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金不換（網(wǎng)果酸模）藥材及科研制劑的基礎(chǔ)研究

發(fā)布時(shí)間：2020-07-04 06:12

【摘要】：金不換為蓼科酸模屬網(wǎng)果酸模Rumex chalepensis Mill.的根及根莖,味苦、性寒,具有清熱解毒、破瘀生新、消腫痛、止血、通便、殺蟲(chóng)等功效,民間用于止血和治療痢疾�，F(xiàn)代臨床應(yīng)用認(rèn)為其具有理氣活血、破瘀生新、消腫生肌之功效。其單味藥或復(fù)方治療幽門(mén)螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp)相關(guān)性胃炎、消化性潰瘍、十二指腸球部潰瘍等均取得了較好的療效。上世紀(jì)80年代,湖北省荊州市中醫(yī)醫(yī)院已制成金不換(網(wǎng)果酸模)沖劑,該制劑臨床治感染Hp相關(guān)性胃炎等,療效確切。但金不換(網(wǎng)果酸模)基礎(chǔ)研究比較薄弱,沒(méi)有建立地方和國(guó)家標(biāo)準(zhǔn),質(zhì)量難以控制,制劑未經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的工藝篩選,難以發(fā)揮最大藥效,毒性及藥效學(xué)研究幾乎為空白。因此,有必要對(duì)已有30余年臨床應(yīng)用的金不換(網(wǎng)果酸模)開(kāi)展全面的基礎(chǔ)研究。本課題對(duì)金不換(網(wǎng)果酸模)的基原、化學(xué)成分、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、制劑工藝、急性毒性、抑制胃酸、胃蛋白酶藥理作用進(jìn)行研究,主要內(nèi)容及結(jié)果如下:1金不換基原鑒定金不換鑒定用樣品采自湖北省荊州市公安縣章莊鋪鎮(zhèn),共2批,第一批具有根、莖、葉和花;第二批具有根、莖、葉和果實(shí)。黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)王振月教授以植物形態(tài)和解剖上相似性為基礎(chǔ),依據(jù)《中國(guó)植物志》第25(1)卷,鑒定其為蓼科酸模屬網(wǎng)果酸模Rumex chalepensis Mill.的干燥根及根莖。2金不換(網(wǎng)果酸模)化學(xué)成分分析采用UPLC-Q-TOF-MS技術(shù),對(duì)金不換(網(wǎng)果酸模)可能含有的化學(xué)成分進(jìn)行分析。結(jié)果共鑒定化合物18個(gè),其中結(jié)合蒽醌化合物3個(gè),游離蒽醌化合物3個(gè),萘醌類化合物4個(gè),黃酮類化合物7個(gè),木脂素類1個(gè)。該研究結(jié)果為其質(zhì)量控制及藥效的闡明奠定了基礎(chǔ)。3金不換(網(wǎng)果酸模)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定3.1建立金不換(網(wǎng)果酸模)的薄層鑒別方法對(duì)金不換(網(wǎng)果酸模)中5個(gè)成分進(jìn)行薄層鑒別。以硅膠G板為固定相,以乙酸乙酯-三氯甲烷-丙酮-甲醇-水(1:5:2.5:1.5:0.4)為展開(kāi)劑,在紫外光365 nm下,檢識(shí)大黃酚-8-O-β-D-葡萄糖苷;以硅膠G板為固定相,以石油醚(60～90℃C)-乙酸乙酯-丙酮-甲酸(6:1:1:0.5)為展開(kāi)劑,在紫外光365 nm下檢識(shí)大黃素、酸模素、大黃酚、大黃素甲醚。薄層圖譜顯示,在與對(duì)照品相同位置處,供試品顯示相同顏色的斑點(diǎn),樣品各成分分離較好,Rf大黃酚-8-O-β-D葡萄糠苷=0.59,Rt大黃素=0.26,Rf酸模素=0.46,Rf大黃酚=0.54,Rf大黃素甲醚=0.62,Rf值均在0.2～0.8之間。該方法可作為金不換(網(wǎng)果酸模)薄層鑒別方法。3.2建立金不換(網(wǎng)果酸模)液相含量測(cè)定方法,明確其生長(zhǎng)年限、采收時(shí)間采用高效液相色譜法建立了金不換(網(wǎng)果酸模)含量測(cè)定方法。通過(guò)對(duì)色譜柱、流動(dòng)相、檢測(cè)波長(zhǎng)進(jìn)行考察,確定含量測(cè)定條件為:色譜柱Agent Extend-C18(250×4.6mm,5μm),254nm波長(zhǎng)處二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè),流動(dòng)相為:A 甲醇,B 0.1%甲酸,梯度洗脫,0～14 min,45%～60%A,14～25 min,60%～86%A,25～30 min,86%～100%A,30～35 min,100%A。流速11 mL/min,柱溫25℃,進(jìn)樣量5μL。通過(guò)篩選供試品溶液提取方法、溶劑、溶劑體積、提取時(shí)間,確定供試品溶液制備方法為:金不換藥材粉末(過(guò)50目篩)1.0g,加甲醇40 mL,超聲提取1h;并進(jìn)行方法學(xué)考察,標(biāo)準(zhǔn)曲線、精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性、加樣回收均符合含量測(cè)定要求。對(duì)采集的16批金不換(網(wǎng)果酸模)中大黃酚-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黃素-8-β-D-吡喃葡萄糖苷、酸模素、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的含量進(jìn)行測(cè)定,含量范圍分別為0.06%～0.71%、0～0.27%、0.10%～0.65%、0.01%～0.06%、0.07～0.43%、0.01%～0.04%。上述 6 個(gè)成分可作為金不換(網(wǎng)果酸模)含量控制指標(biāo)。同時(shí),對(duì)不同生長(zhǎng)年限、不同采收期、不同地塊樣品含量對(duì)比分析,認(rèn)為金不換(網(wǎng)果酸模)最佳采收年限為2年,適宜在初春或夏末初秋采集。3.3建立金不換(網(wǎng)果酸模)指紋圖譜采用液相色譜法,對(duì)16批金不換(網(wǎng)果酸模)開(kāi)展指紋圖譜研究。結(jié)果顯示,16批次金不換(網(wǎng)果酸模)在254nm波長(zhǎng)下,共獲得10個(gè)共有峰,各色譜峰分離度較好,平均相似度為0.91。對(duì)比分析不同地塊、不同生長(zhǎng)年限、不同采收季節(jié)樣品含量發(fā)現(xiàn),金不換(網(wǎng)果酸模)HPLC指紋圖譜相似度雖有變化,但均大于90%。本文所建立金不換(網(wǎng)果酸模)的指紋圖譜特征性及專屬性強(qiáng),可用于全面控制金不換的質(zhì)量。4金不換(網(wǎng)果酸模)制劑的研究4.1優(yōu)化金不換(網(wǎng)果酸模)提取方法,確定最佳工藝參數(shù)采用L9(34)正交設(shè)計(jì)和單因素考察,以金不換(網(wǎng)果酸模)主要成分總提取率和抑菌環(huán)為考察指標(biāo),對(duì)金不換(網(wǎng)果酸模)水提醇沉工藝和醇提取工藝進(jìn)行對(duì)比篩選,同時(shí)按荊州醫(yī)院金不換沖劑的生產(chǎn)工藝制備金不換樣品。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,金不換(網(wǎng)果酸模)最佳醇提取工藝為藥材加6倍量75%乙醇回流提取90 min,提取3次,酸模素及蒽醌類總提取率為0.73%,明顯高于水提工藝的0.24%、水提醇沉工藝的0.28%和荊州原沖劑工藝的0.24%,6個(gè)成分轉(zhuǎn)移率為84.11%,高于水提工藝的27.68%、水提醇沉工藝的33.08%和荊州沖劑工藝的27.68%,因此,確定金不換的提取工藝為75%乙醇回流提取,最佳工藝條件為飲片加6倍量75%乙醇回流提取90 min,提取3次。4.2制備金不換膠囊劑按2015版《中國(guó)藥典》(通則0103),制成金不換乙醇提取物膠囊劑。水分含量、裝量差異、崩解時(shí)限、穩(wěn)定性均符合《中國(guó)藥典》的要求。膠囊劑規(guī)格:0.49 g/粒,服用方法:3次/日,3粒/次。4.3建立金不換膠囊劑HPLC含量測(cè)定方法采用高效液相色譜法建立了金不換膠囊含量測(cè)定方法。金不換膠囊內(nèi)容物主要含有大黃酚-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黃素-8-β-D-吡喃葡萄糖苷、酸模素、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚等成分,3批金不換膠囊6個(gè)成分平均含量分別為3.20%、0.40%、0.23%、0.10%、1.03%、0.25%,總含量5.21%。該研究結(jié)果為金不換膠囊劑質(zhì)量控制提供了科學(xué)依據(jù)。4.4建立金不換膠囊劑的薄層鑒別方法對(duì)金不換(網(wǎng)果酸模)膠囊中5個(gè)成分進(jìn)行薄層鑒別。參照金不換(網(wǎng)果酸模)飲片薄層鑒別方法進(jìn)行檢識(shí)。薄層圖譜顯示,供試品色譜在與對(duì)照品色譜相同位置上,顯相同顏色的熒光斑點(diǎn),同時(shí),各熒光斑點(diǎn)分離度較好,Rf大黃酚-8-O-β-D-葡萄糖苷=0.59,Rf大黃素=0.26,Rf酸模素=0.46,Rf大黃酚=0.54,Rf大黃素甲醚=0.62,Rf值均在 0.2～0.8之間。上述5個(gè)成分可作為金不換(網(wǎng)果酸模)膠囊劑薄層鑒別成分。5開(kāi)展金不換(網(wǎng)果酸模)急性毒性研究在無(wú)法得到金不換(網(wǎng)果酸模)的半數(shù)致死量(LD50)情況下,進(jìn)行最大耐受量實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示:小鼠灌胃量等同人服用生藥量的250倍,遠(yuǎn)大于100倍,表明金不換(網(wǎng)果酸模)75%乙醇提取物毒性很小。6金不換(網(wǎng)果酸模)對(duì)胃幽門(mén)結(jié)扎大鼠胃酸、胃蛋白酶的影響采用幽門(mén)結(jié)扎法考察金不換(網(wǎng)果酸模)75%乙醇提取物對(duì)大鼠胃酸、胃蛋白酶的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,各給藥組均具有降低胃潰瘍大鼠胃液總酸度、每小時(shí)總酸排出量和胃組織蛋白酶活力的作用,金不換(網(wǎng)果酸模)高劑量組聯(lián)合奧美拉唑(西藥)抑制胃酸、胃蛋白酶分泌能力在各給藥組中最強(qiáng),其對(duì)胃酸、胃蛋白酶的抑制作用優(yōu)于陽(yáng)性藥奧美拉唑和單味中藥金不換(網(wǎng)果酸模),說(shuō)明金不換(網(wǎng)果酸模)高劑量組聯(lián)合奧美拉唑具有增效作用。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R284;R285
【圖文】：