發(fā)布時(shí)間：2020-06-29 22:35

【摘要】：【目的】本研究選取Lewis肺癌小鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型,肺癌Ⅰ號方為實(shí)驗(yàn)藥物,運(yùn)用免疫組織化學(xué)法和蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測小鼠腫瘤組織中Fas、Fas L、Caspase-8、Bcl-2、Bax和Caspase-3的蛋白表達(dá)情況,探討其抗腫瘤機(jī)制,為肺癌Ⅰ號方臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)�！痉椒ā繌�(fù)制異位移植肺癌小鼠,將構(gòu)建成功的48只模型小鼠按照隨機(jī)數(shù)字法分為以下四組:模型組、肺癌Ⅰ號方組、順鉑組和聯(lián)合用藥組(順鉑+肺癌Ⅰ號方)。除模型組外,其余三組均為用藥組。模型組每日生理鹽水灌胃一次,生理鹽水每三日腹腔注射一次;肺癌Ⅰ號方組每日肺癌Ⅰ號方灌胃一次,生理鹽水每三日腹腔注射一次;順鉑組每日生理鹽水灌胃一次,順鉑每三日腹腔注射一次;聯(lián)合用藥組每日肺癌Ⅰ號方灌胃一次,順鉑每三日腹腔注射一次。實(shí)驗(yàn)期間密切監(jiān)測小鼠生理狀態(tài),12天后行頸椎脫臼處死,取出腫瘤組織,清洗血塊后,稱取其重量并計(jì)算得出抑瘤率。HE染色行組織病理學(xué)觀察,免疫組織化學(xué)法和蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測腫瘤組織中Fas、Fas L、Caspase-8、Bcl-2、Bax和Caspase-3的蛋白表達(dá)。實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((?)±s)表示,運(yùn)用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件,實(shí)驗(yàn)結(jié)果選擇單因素方差分析�！窘Y(jié)果】1.小鼠生存質(zhì)量觀測:各用藥組與模型組相比,小鼠活動(dòng)量和飲食量均增加。三組實(shí)驗(yàn)組相比,聯(lián)合用藥組的小鼠生存狀態(tài)最優(yōu),肺癌Ⅰ號方組次之,順鉑組最差。2.瘤重與抑瘤率測定結(jié)果:2.1瘤重:各用藥組平均瘤重均低于模型組,有明顯差異,呈統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。各用藥組相比,順鉑組平均瘤重低于肺癌Ⅰ號方組,有明顯差異,呈統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);聯(lián)合用藥組平均瘤重低于順鉑組,有明顯差異,呈統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2.2抑瘤率:聯(lián)合用藥組抑瘤率40.1%,效果最佳;順鉑組抑瘤率28.5%,效果次之;肺癌Ⅰ號方組抑瘤率15.2%,效果最弱。3.組織病理學(xué)觀測結(jié)果:與模型組相比,各用藥組腫瘤細(xì)胞密集程度降低,細(xì)胞水腫顯著,壞死區(qū)域增加,壞死面積較大,壞死結(jié)構(gòu)多為片狀。各用藥組之間比較,聯(lián)合用藥組壞死區(qū)域最多,細(xì)胞水腫最為明顯。順鉑組與肺癌Ⅰ號方組相比,壞死區(qū)域較大,壞死面積較廣,細(xì)胞水腫程度也更加顯著。4.免疫組織化學(xué)法檢測結(jié)果顯示:與模型組相比,各用藥組均可升高腫瘤組織中Fas、Fas L、Caspase-8、Bax和Caspase-3的陽性表達(dá)并降低Bcl-2陽性表達(dá),有明顯差異,呈統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與肺癌Ⅰ號方組相比,順鉑組和聯(lián)合用藥組Fas L、Bax、Caspase-3的陽性表達(dá)升高,Bcl-2的陽性表達(dá)降低,有明顯差異,呈統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。順鉑組Fas和Caspase-3的陽性表達(dá)雖較肺癌Ⅰ號方組有所升高,但差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);聯(lián)合用藥組Fas和Caspase-8的陽性表達(dá)較肺癌Ⅰ號方組增加,有明顯差異,呈統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與順鉑組相比,聯(lián)合用藥組Fas、Fas L、Caspase-8、Bax和Caspase-3的陽性表達(dá)增加,Bcl-2的陽性表達(dá)降低,有明顯差異,呈統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5.蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測結(jié)果顯示:與模型組相比,各用藥組均可升高腫瘤組織中Fas、Fas L、Caspase-8、Bax和Caspase-3的蛋白相對表達(dá)量并降低Bcl-2蛋白相對表達(dá)量,有明顯差異,呈統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與肺癌Ⅰ號方組相比,順鉑組和聯(lián)合用藥組Fas L、Caspase-8、Bax和Caspase-3的蛋白相對表達(dá)量升高,有明顯差異,呈統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);順鉑組Fas的蛋白相對表達(dá)量雖較肺癌Ⅰ號方組升高,但差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);聯(lián)合用藥組Fas蛋白相對表達(dá)量較肺癌Ⅰ號方組升高,有明顯差異,呈統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);聯(lián)合用藥組Bcl-2蛋白相對表達(dá)量較肺癌Ⅰ號方組降低,有明顯差異,呈統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);順鉑組Bcl-2蛋白相對表達(dá)量較肺癌Ⅰ號方組降低,但差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與順鉑組相比,聯(lián)合用藥組Fas、Fas L、Caspase-8、Bax和Caspase-3的蛋白相對表達(dá)量升高,Bcl-2的蛋白相對表達(dá)量降低,有明顯差異,呈統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)�！窘Y(jié)論】1.肺癌Ⅰ號方能夠升高Lewis肺癌小鼠癌細(xì)胞Fas、Fas L和Caspase-8表達(dá),提示肺癌Ⅰ號方抗癌機(jī)制可能與調(diào)控死亡受體凋亡途徑,進(jìn)而促進(jìn)肺癌細(xì)胞凋亡有關(guān)。2.肺癌Ⅰ號方能夠升高Lewis肺癌小鼠癌細(xì)胞Bax和Caspase-3表達(dá),降低Bcl-2的表達(dá),提示肺癌Ⅰ號方抗癌機(jī)制可能與調(diào)控線粒體凋亡途徑,進(jìn)而促進(jìn)肺癌細(xì)胞凋亡有關(guān)。3.肺癌Ⅰ號方或順鉑單獨(dú)使用與二者聯(lián)合用藥相比,肺癌Ⅰ號方與順鉑聯(lián)合應(yīng)用在升高Fas、Fas L、Caspase-8、Bax和Caspase-3表達(dá),降低Bcl-2表達(dá)方面,比單獨(dú)使用肺癌Ⅰ號方或順鉑效果更好,提示肺癌Ⅰ號方與化療藥物順鉑聯(lián)合應(yīng)用時(shí)療效增強(qiáng)。結(jié)合前期實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析,肺癌Ⅰ號方聯(lián)合順鉑具有較強(qiáng)的抑瘤作用,但其在臨床中與化療藥或靶向藥的安全性尚不明確,今后實(shí)驗(yàn)中需加入本方與化療藥和靶向藥的毒副反應(yīng)研究,對于進(jìn)一步推廣上臨床具有一定的實(shí)際意義。
【學(xué)位授予單位】：云南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5
【圖文】：

3.1 生存質(zhì)量觀測隨著實(shí)驗(yàn)時(shí)間的的延長，模型組小鼠腫瘤與各實(shí)驗(yàn)組小鼠腫瘤可見持續(xù)性增長，小鼠食欲逐漸減退，出現(xiàn)明顯的活動(dòng)性障礙，反應(yīng)靈敏度降低，精神狀態(tài)下降，毛色光澤度較差。與實(shí)驗(yàn)組移植瘤小鼠相比，模型組小鼠腫瘤生長速度較快，精神狀態(tài)萎靡，喜歡聚集蜷縮在一起，活動(dòng)逐漸減少，反應(yīng)靈敏度差，飲食量減少，毛色光澤度差且毛發(fā)較為稀疏。肺癌 Ⅰ 號方組小鼠在飲食量、活動(dòng)性、反應(yīng)靈敏度、精神狀態(tài)以及毛色光澤度方面均優(yōu)于模型組。順鉑組小鼠移植瘤未見明顯影響小鼠活動(dòng)性，喜歡聚集蜷縮，活動(dòng)較肺癌 Ⅰ號方組小鼠減少，飲食量較聯(lián)合用藥組減少，毛色光澤度較差，體溫用手觸之較涼。聯(lián)合用藥組小鼠在活動(dòng)性、反應(yīng)靈敏度、毛色光澤度以及飲食量等方面都要明顯優(yōu)于模型組、順鉑組和肺癌 Ⅰ 號方組，且體溫觸之溫暖。

3.2 瘤重與抑瘤率測定結(jié)果3.2.1 瘤重：各組的瘤重與抑瘤率結(jié)果見表2和圖3。其中模型組平均瘤重6.91±0.76g、肺癌 Ⅰ 號方組平均瘤重5.86 0.65g、順鉑組平均瘤重4.94 0.64g、聯(lián)合用藥組平均瘤重4.10 0.39g。以模型組小鼠平均瘤重作為比較對象，肺癌 Ⅰ 號方組、順鉑組和聯(lián)合用藥組平均瘤重均低于該組，有明顯差異，呈統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；

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本文編號：2734452