發(fā)布時間：2020-03-22 13:18

【摘要】：目的觀察牡荊素對鏈脲佐菌素(STZ)誘導(dǎo)的糖尿病小鼠睪丸功能障礙的保護(hù)作用以及探討其作用機(jī)制。方法1觀察牡荊素對糖尿病小鼠睪丸功能障礙的保護(hù)作用采用腹腔注射STZ 45mg/kg連續(xù)給藥5天構(gòu)建Ⅰ型糖尿病小鼠模型并隨機(jī)分為正常組、DM組、西地那非組(5mg/kg)、牡荊素(10,20,40mg/kg)組,灌胃給藥62天,觀察牡荊素對糖尿病小鼠睪丸功能障礙的影響:(1)采用葡萄糖氧化酶法檢測各組小鼠不同時間段空腹血糖水平及終末期糖化血紅蛋白(HbAlc)水平;(2)采用臟器稱重法檢測糖尿病小鼠睪丸、附睪重量,計算臟器系數(shù);(3)利用血球計數(shù)儀檢測糖尿病小鼠精子參數(shù);(4)采用ELISA方法檢測糖尿病小鼠血清中內(nèi)分泌激素睪酮(T)、卵泡刺激素(FSH)及黃體生成素(LH)的水平;(5)采用分光光度法檢測糖尿病小鼠睪丸組織中氧化應(yīng)激相關(guān)的指標(biāo);(6)利用HE染色法觀察糖尿病小鼠睪丸組織的病理結(jié)構(gòu)變化;(7)利用透射電鏡觀察糖尿病小鼠Leydig細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)。建立高糖(HG,75mM)誘導(dǎo)TM3睪丸間質(zhì)細(xì)胞損傷模型,并隨機(jī)分為正常組、HG組、牡荊素(0.1,1,10μg/mL)組,以及LY294002(1μg/mL)組。處理48h,觀察Vitexin對HG誘導(dǎo)TM3細(xì)胞損傷的影響:(1)使用MTT法檢測HG誘導(dǎo)的TM3細(xì)胞存活率;(2)采用JC-1化學(xué)熒光探針法檢測HG誘導(dǎo)的TM3細(xì)胞線粒體膜電位(MMP)水平;(3)Annexin V/PI流式細(xì)胞分析法檢測HG誘導(dǎo)的TM3細(xì)胞的細(xì)胞凋亡率。2探討牡荊素對糖尿病小鼠睪丸功能障礙的保護(hù)作用與PI3K/Akt信號通路之間的關(guān)系Western blot法檢測牡荊素對糖尿病小鼠睪丸組織中PI3K、Akt、Caspase-3、Bcl-2及Bax蛋白表達(dá)水平的影響。Western blot法檢測牡荊素對高糖誘導(dǎo)的TM3細(xì)胞中PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、Caspase-3、Active Caspase-3、Bad、Bcl-2及Bax蛋白表達(dá)水平的影響。結(jié)果1牡荊素對糖尿病小鼠睪丸功能障礙的保護(hù)作用與正常組比較,DM組血糖及HbAlc水平顯著升高(p0.01,p0.01),同時精子數(shù)量、精子活力及精子活率顯著降低(p0.01,p0.01,p0.01),精子畸形率顯著增加(p0.01),小鼠血清中性激素水平下降明顯(p0.01),睪丸組織內(nèi)ROS與MDA水平顯著增加(p0.01,p0.01),抗氧化酶SOD、GSH-Px及CAT酶活力顯著降低(p0.01,p0.01,p0.01)。與DM組比較,給予牡荊素治療后(10,20,40 mg/kg)組小鼠空腹血糖無統(tǒng)計學(xué)差異;其全血HbAlc水平顯著降低(p0.05,p0.01);牡荊素(20,40 mg/kg)組可顯著提高糖尿病小鼠附睪尾部精子數(shù)量、活力及活率(p0.05,p0.01),牡荊素(40 mg/kg)降低精子畸形率(p0.01),牡荊素(40 mg/kg)顯著增加糖尿病小鼠血清當(dāng)中T、FSH及LH含量(p0.01),并且可顯著減少糖尿病小鼠睪丸組織中MDA和ROS水平(p0.01),睪丸組織中SOD、GSH-Px和CAT酶活性顯著增加(p0.01);牡荊素(40 mg/kg)組可明顯減輕糖尿病小鼠睪丸病理性損傷,Leydig細(xì)胞數(shù)量增加并且可以減輕糖尿病小鼠睪丸Leydig細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)病理性變化。與正常組相比,HG組TM3細(xì)胞細(xì)胞存活率降低(p0.01),同時細(xì)胞內(nèi)ROS水平顯著增加(p0.01),細(xì)胞內(nèi)MMP顯著下降(p0.01),細(xì)胞凋亡率顯著升高(p0.01)。與HG組相比,牡荊素(0.1,1,10μg/mL)給藥后,其細(xì)胞存活率呈劑量依賴性增加(p0.05,p0.05,p0.01),牡荊素(10μg/mL)治療后其MMP顯著增加及細(xì)胞凋亡率顯著降低(p0.05)。2牡荊素對糖尿病小鼠睪丸功能障礙的保護(hù)作用與PI3K/Akt信號通路的關(guān)系與DM組相比,牡荊素(40 mg/kg)能夠提高睪丸組織PI3K和Akt蛋白表達(dá)水平(p0.05,p0.05),降低Caspase-3蛋白表達(dá)(p0.01)并能明顯升高Bcl-2/Bax蛋白比率(p0.05)。與HG組相比,牡荊素(10μg/mL)給藥后,PI3K,p-PI3K、p-Akt蛋白表達(dá)水平顯著上升(p0.05,p0.05,p0.05),Bcl-2/Bax蛋白比率表達(dá)水平明顯提高(p0.05),active Caspase-3和Bad蛋白表達(dá)水平顯著下降(p0.05);牡荊素對上述蛋白表達(dá)的調(diào)節(jié)作用部分能夠被LY294002抵消。結(jié)論1牡荊素對糖尿病小鼠睪丸功能障礙具有保護(hù)作用。2牡荊素發(fā)揮糖尿病小鼠睪丸功能障礙的保護(hù)作用與激活睪丸間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)PI3K/Akt信號通路,進(jìn)而減少細(xì)胞凋亡有關(guān)。
【圖文】：

寧夏醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 結(jié)果結(jié) 果1. 牡荊素對 DM 小鼠睪丸功能障礙的保護(hù)作用1.1 牡荊素對不同時間點(diǎn) DM 小鼠隨機(jī)血糖值及 HbAlc 水平的影響在牡荊素治療過程中，不同時間點(diǎn)血糖測定顯示牡荊素各劑量組與 DM 組比較血糖無統(tǒng)計學(xué)差異（p > 0.05）。實(shí)驗(yàn)?zāi)┢�，DM 組小鼠 HbAlc 水平 7.80 ±0.31% 較 Control 組 2.16 ± 0.02% 顯著升高（p < 0.01），給予牡荊素（20mg/kg，40mg/kg）治療后可將 HbAlc 水平分別降至 5.35 ± 0.21%、4.39 ± 0.35% （p< 0.01），，見圖 1。

寧夏醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 結(jié)果1.3 牡荊素對 DM 小鼠精子參數(shù)的影響DM 組小鼠精子數(shù)量 25.78×106± 7.72/ml，與 Control 組 156.48×106±11.32/ml 相比顯著下降（p < 0.01），且 DM 組精子活力與活率與 Control 組相比顯著降低（p < 0.01），同時精子畸形率顯著增加（p < 0.01）。在給予藥物治療后，牡荊素（20mg/kg，40mg/kg）可以增加精子數(shù)量（61.16×107± 7.78/ml，116.31×107± 12.43/ml），精子活力及活率，牡荊素 40mg/kg 可顯著降低精子畸形率（38.88 ± 3.36%）（p < 0.05，p < 0.01），牡荊素對精子參數(shù)的恢復(fù)呈現(xiàn)劑量依賴性，以牡荊素 40mg/kg 治療效果最佳，見圖 2。
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R285.5

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