提高破傷風(fēng)類毒素免疫原性的初步研究
本文關(guān)鍵詞：胃漂浮海藻酸鈣緩釋微球體內(nèi)外研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。
《西北農(nóng)林科技大學(xué)》 2006年
提高破傷風(fēng)類毒素免疫原性的初步研究
蔣會(huì)婷
【摘要】： 破傷風(fēng)梭菌產(chǎn)生的破傷風(fēng)毒素,經(jīng)0.4%甲醛滅活后,失去毒性而仍保留抗原性稱之為破傷風(fēng)類毒素。類毒素精制后,可作為疫苗對(duì)人和動(dòng)物進(jìn)行免疫接種。但機(jī)體感染后不能獲得終身免疫力,且此免疫程序較長。為了減輕接種的副反應(yīng),提高免疫效果,減少注射次數(shù),提高接種覆蓋率,本研究采用原核細(xì)胞表達(dá)具有高免疫原性的重組C蛋白,用于生產(chǎn)疫苗及免疫接種,以避免出現(xiàn)副作用;另外,用雙功能交聯(lián)劑戊二醛聚合破傷風(fēng)毒素,使毒素分子之間進(jìn)行交聯(lián),從而產(chǎn)生分子量較大的,表面決定簇多的聚合類毒素。該類毒素作為免疫的抗原,可以誘發(fā)較高的抗體水平,加強(qiáng)免疫記憶,延長保護(hù)機(jī)體免受破傷風(fēng)的侵害的時(shí)間。 1.利用PCR技術(shù)從破傷風(fēng)梭菌基因組DNA中擴(kuò)增出1 356 bp的破傷風(fēng)毒素C基因,將該基因片段插入到表達(dá)載體pET32a(+)中,轉(zhuǎn)化宿主菌BL21(DE3)中,用IPTG誘導(dǎo)表達(dá),觀察各種條件下對(duì)重組菌蛋白表達(dá)的影響。對(duì)重組后蛋白用Ni-NAT親和層析的技術(shù)純化C融合蛋白,然后進(jìn)行小鼠免疫實(shí)驗(yàn)并測(cè)定效價(jià)。研究顯示:經(jīng)SDS-PAGE分析,重組破傷風(fēng)毒素C蛋白(rTTC)的表達(dá)量占可溶性蛋白的28.19%,純化后得到蛋白純度為96.92%。免疫印跡證實(shí)該重組蛋白是破傷風(fēng)毒素C蛋白抗原,對(duì)小鼠免疫,三免后14 d rTTC組小鼠抗體效價(jià)仍能達(dá)到1∶16 000。所獲得的重組蛋白具有良好的免疫原性。 2.經(jīng)過厭氧培養(yǎng)的破傷風(fēng)梭菌,產(chǎn)毒后進(jìn)行脫毒、精制,在產(chǎn)毒期間進(jìn)行毒力鑒定、解毒和毒性逆轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)。再由戊二醛聚合破傷風(fēng)類毒素,經(jīng)不同的聚合條件的優(yōu)化,進(jìn)行分子量和Lf的測(cè)定,然后免疫小鼠和兔子,并測(cè)定其免疫效價(jià)。培養(yǎng)的毒素可以作為制備類毒素使用,脫毒精制后的類毒素,經(jīng)毒力鑒定試驗(yàn)、解毒試驗(yàn)和毒性逆轉(zhuǎn)試驗(yàn)檢測(cè)后均合格。用pH 7.2的PBS稀釋類毒素,終濃度為0.1%、0.3%戊二醛置于室溫中聚合稀釋后的類毒素12 h,聚合類毒素中聚合的類毒素分子量為600 ku,含量占聚合物的43.82%,經(jīng)ELISA檢測(cè)抗原性,抗原與陽性血清呈陽性反應(yīng)。免疫小鼠和兔子,平均效價(jià)在1∶2 0 000～1∶3 0 000。所得到的聚合類毒素具有抗原性及免疫原性。 3.最后將聚合類毒素和未聚合類毒素分別與重組抗原聯(lián)合免疫馬匹,未聚合類毒素的平均效價(jià)明顯低于聚合類毒素組別,說明在聯(lián)合免疫后,聚合類毒素可以提高馬匹的血清效價(jià)。
【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：西北農(nóng)林科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：S852.5
【目錄】：
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