發(fā)布時(shí)間：2024-07-07 03:58

　　將滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)與銅納米線(xiàn)相結(jié)合進(jìn)行信號(hào)放大,建立高選擇性、高靈敏的汞離子比色檢測(cè)新方法。以鏈霉親和素修飾的磁珠為探針捕獲和分離基質(zhì),將生物素修飾的引物鏈固定到其表面。汞離子存在時(shí),模板鏈將通過(guò)T-Hg²⁺-T作用與引物鏈結(jié)合。加入T4連接酶及DNA聚合酶引發(fā)滾環(huán)擴(kuò)增反應(yīng)形成超長(zhǎng)單鏈DNA。與短單鏈DNA互補(bǔ)形成的長(zhǎng)雙鏈DNA可作為銅納米線(xiàn)沉積模板,加入鹽酸釋放出大量銅離子催化底物氧化顯色。在0. 005～1. 0 nmol/L范圍,汞離子濃度與吸收信號(hào)呈良好線(xiàn)性關(guān)系,檢出限低至3. 7 pmol/L。

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【部分圖文】：

圖2不同條件下的吸收光譜圖

不同條件下的吸收光譜如圖2所示，僅TMB存在時(shí)吸收信號(hào)很低(曲線(xiàn)a)，溶液幾乎無(wú)色，進(jìn)一步加入H2O2(曲線(xiàn)b)或Cu2+(曲線(xiàn)c)，吸收信號(hào)無(wú)明顯變化，溶液仍接近無(wú)色。當(dāng)H2O2和Cu2+共同存在時(shí)，吸收信號(hào)顯著增大(曲線(xiàn)d)，溶液顏色變黃。這些結(jié)果表明，Cu2+能夠有效催化H....

圖3加Hg2+前、后滾環(huán)擴(kuò)增反應(yīng)及產(chǎn)物與HP雜交后凝膠電泳成像圖

對(duì)加Hg2+前后吸收信號(hào)進(jìn)行比較以驗(yàn)證方法可行性。從圖4可知，無(wú)Hg2+存在時(shí)吸收信號(hào)較低(曲線(xiàn)a)，溶液為淡黃色，該信號(hào)為磁珠表面CP產(chǎn)生的背景信號(hào)。當(dāng)加入0.5nmol/LHg2+時(shí)，吸收信號(hào)迅速增強(qiáng)(曲線(xiàn)b)，溶液顏色加深。當(dāng)Hg2+濃度增大到1.0nmol/L時(shí)，吸....

圖4不同Hg2+濃度下的吸收光譜圖

圖3加Hg2+前、后滾環(huán)擴(kuò)增反應(yīng)及產(chǎn)物與HP雜交后凝膠電泳成像圖2.5Hg2+檢測(cè)條件的優(yōu)化

圖5不同CP濃度(A),RCA反應(yīng)時(shí)間(B)，雜交時(shí)間(C)，納米銅沉積時(shí)間(D)對(duì)Hg2+檢測(cè)的影響

對(duì)一些實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化。優(yōu)化結(jié)果如圖5所示，獲得最優(yōu)CP濃度0.1μmol/L(圖5A)，滾環(huán)擴(kuò)增時(shí)間60min(圖5B)，擴(kuò)增產(chǎn)物與HP雜交時(shí)間30min(圖5C)，銅納米線(xiàn)沉積時(shí)間10min(圖5D)。2.6Hg2+的線(xiàn)性范圍與檢出限

本文編號(hào)：4003120