發(fā)布時(shí)間：2020-11-01 05:13

　　 苯(Benzene)是一種常見環(huán)境污染物和人類致癌物,尤以引發(fā)再生障礙性貧血和白血病令人關(guān)注。既往研究表明苯的慢性(包括致癌)毒效應(yīng)是通過其活性代謝物來起作用的,即CYP2E1酶催化的反應(yīng)產(chǎn)物。然而,迄今尚無報(bào)道苯在人CYP2E1酶活化條件下誘發(fā)基因突變作用;此外,本課題組近年報(bào)道苯及其代謝產(chǎn)物對(duì)重組表達(dá)人CYP2E1和人磺基轉(zhuǎn)移酶(sulfotransferase,SULT)1A1的V79細(xì)胞誘發(fā)微核形成,并且證明CYP2E1對(duì)苯、苯酚、氫醌、兒茶酚及三羥基苯均具有活化作用,而人SULT1A1則具有代謝減毒作用。本研究進(jìn)一步探討苯、上述羥化物及其終毒物1,4-苯醌誘發(fā)V79-hCYP2E1-hSULT1A1細(xì)胞Hprt基因突變的作用,并對(duì)活性氧(ROS)作為其一種影響基因致突變效應(yīng)作用機(jī)制的可能性進(jìn)行了研究。目的1.以誘發(fā)基因突變作為觀察終點(diǎn),觀察細(xì)胞內(nèi)人CYP2E1酶對(duì)苯及其羥化代謝物苯酚、氫醌、兒茶酚、三羥基苯代謝活化作用。2.對(duì)苯、其一系列羥化代謝物或1,4-苯醌作用于細(xì)胞產(chǎn)生的ROS進(jìn)行檢測,以探討氧化應(yīng)激與代謝活化的關(guān)系及是否參與受試物的毒性作用。方法細(xì)胞毒性采用CCK-8試驗(yàn)來觀察,暴露/恢復(fù)時(shí)程為72 h/0 h或24 h/48 h;Hprt致突變?cè)囼?yàn)采用上述處理方案,按標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)程序進(jìn)行;以DCFH-DA為熒光染料用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量。細(xì)胞毒性和ROS數(shù)據(jù)(均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差,分別含6與4個(gè)重復(fù)樣)用方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)推斷;基因突變數(shù)據(jù)按計(jì)數(shù)資料(合并2個(gè)重復(fù)數(shù)據(jù))采用確切概率法處理。結(jié)果1.CCK-8試驗(yàn)結(jié)果提示6種受試物對(duì)V79-hCYP2E1-hSULT1A1和V79-Mz細(xì)胞均呈現(xiàn)一定的細(xì)胞毒性,同一化合物不同細(xì)胞之間無明顯差異,細(xì)胞毒性強(qiáng)度呈現(xiàn)苯三羥基苯苯酚兒茶酚苯醌氫醌的次序;除苯以外其它化合物都表現(xiàn)出濃度依賴性細(xì)胞毒作用。2.苯在72 h/0 h試驗(yàn)條件下對(duì)兩個(gè)細(xì)胞系均不呈現(xiàn)致突變作用;但在24 h/48 h實(shí)驗(yàn)條件下,苯誘發(fā)V79-hCYP2E1-hSULT1A1細(xì)胞基因突變,而對(duì)V79-Mz細(xì)胞結(jié)果陰性。其它5種受試物對(duì)V79-hCYP2E1-hSULT1A1細(xì)胞均可在72h暴露條件下誘發(fā)基因突變,并呈濃度相關(guān)性;致突變作用強(qiáng)度為苯苯酚三羥基苯兒茶酚氫醌苯醌。對(duì)于V79-Mz細(xì)胞,苯、苯酚、三羥基苯和兒茶酚均無致突變作用,而苯醌的作用比氫醌強(qiáng)。3.經(jīng)過ROS活性氧檢測后發(fā)現(xiàn),在實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)三羥基苯誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)ROS水平增高,且對(duì)V79-hCYP2E1-hSULT1A1細(xì)胞的作用微強(qiáng)于V79-Mz細(xì)胞。其它化合物對(duì)兩種受試細(xì)胞都未明顯改變ROS水平。結(jié)論本研究首次觀察到苯對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞誘發(fā)基因突變作用,而人CYP2E1酶是其必需的代謝活化酶;同時(shí),實(shí)驗(yàn)結(jié)果支持人CYP2E1對(duì)各個(gè)羥化代謝物的進(jìn)一步活化作用,也印證了 1,4-苯醌是苯的終致突變物。ROS并非上述化合物致突變作用的主要介導(dǎo)者。
【學(xué)位單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R114
【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 前言
第二章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
    2.2 主要試劑配制
    2.3 試驗(yàn)儀器設(shè)備
    2.4 實(shí)驗(yàn)方法
    2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
第三章 結(jié)果
    3.1 苯及其羥化代謝物對(duì)V79-Mz和V79-hCYP2E1-hSULT1A1的細(xì)胞毒性和致突變作用
    3.2 苯及其羥化代謝物對(duì)V79-Mz和V79-hCYP2E1-hSULT1A1細(xì)胞內(nèi)ROS水平的影響
第四章 討論
全文小結(jié)
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4 謝麗波;蘇海濤;何英華;;長春市居民住宅空氣中苯污染現(xiàn)狀及防治對(duì)策[J];中國衛(wèi)生工程學(xué);2013年06期

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本文編號(hào)：2865067