發(fā)布時(shí)間：2020-10-12 23:33

　　 目的:本研究旨在探討納米級(jí)炭黑誘導(dǎo)16HBE細(xì)胞毒性作用以及miR-96靶向FOXO3a在其中的作用研究。方法:16HBE(中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心)于含10%熱滅活胎牛血清的MEM培養(yǎng)基37℃,5%CO2飽和濕度下培養(yǎng)。選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,用納米級(jí)炭黑處理24小時(shí),劑量分別為0、50、100和200μg/mL;以MEM為陰性對(duì)照。采用RT-qPCR法檢測(cè)16HBE細(xì)胞miR-96水平,流式細(xì)胞儀檢測(cè)活性氧水平,AnnexinV-FITC和PI染色并用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡,單細(xì)胞凝膠電泳(SCGE)測(cè)定DNA損傷以及Western Blot方法測(cè)定FOXO3a蛋白含量。設(shè)計(jì)特異的mi R-96抑制序列(miR-96 Inhibitor)和miR-96模擬序列(miR-96 Mimic),脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染,構(gòu)建miR-96高表達(dá)和低表達(dá)16HBE細(xì)胞。結(jié)果:納米級(jí)炭黑處理16HBE細(xì)胞后,部分細(xì)胞貼壁不牢,折光率差;各劑量組細(xì)胞miR-96水平較炭黑處理前明顯降低而ROS水平、OTM值、凋亡率顯著升高;炭黑處理后FOXO3a蛋白含量是處理前的1.6倍。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染Mimic組miR-96水平是轉(zhuǎn)染NC Mimic組的7.01倍,轉(zhuǎn)染Inhibitor組mi R-96水平是轉(zhuǎn)染NC Inhibitor組的0.47倍,說(shuō)明miR-96高低表達(dá)細(xì)胞株構(gòu)建成功。炭黑誘導(dǎo)NC Mimic組、Mimic組、NC Inhibitor和Inhibitor組ROS水平、OTM值、早期凋亡率、晚期凋亡率和FOXO3a蛋白含量顯著升高,存活率顯著降低。炭黑處理后Mimic組ROS水平、OTM值、早期凋亡率、晚期凋亡率、存活率和FOXO3a蛋白含量分別為炭黑處理后NC Mimic組的0.78倍、0.51倍、0.70倍、0.49倍、1.05倍、0.67倍,即炭黑處理后Mimic組各指標(biāo)升高的幅度低于炭黑處理后NC Mimic組。炭黑處理后Inhibitor組ROS水平、OTM值、早期凋亡率、晚期凋亡率、存活率和FOXO3a蛋白含量分別為炭黑處理后NC Inhibitor組的1.57倍、2.84倍、1.99倍、1.63倍、0.89倍、1.72倍,即炭黑處理后Inhibitor組各指標(biāo)升高的幅度高于炭黑處理后NC Inhibitor組。結(jié)論:納米級(jí)炭黑誘導(dǎo)16HBE細(xì)胞產(chǎn)生氧化損傷,DNA損傷和細(xì)胞凋亡。納米級(jí)炭黑可以抑制miR-96的表達(dá);mi R-96 Mimic可以減輕納米級(jí)炭黑誘導(dǎo)的16HBE細(xì)胞氧化損傷,DNA損傷和細(xì)胞凋亡;miR-96Inhibitor促進(jìn)納米級(jí)炭黑誘導(dǎo)的16HBE細(xì)胞氧化損傷、DNA損傷和細(xì)胞凋亡。納米級(jí)炭黑誘導(dǎo)16HBE細(xì)胞FOXO3a蛋白表達(dá)增加,其機(jī)制可能與炭黑對(duì)miR-96的抑制作用有關(guān)。
【學(xué)位單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類(lèi)】：R114
【部分圖文】：

圖 1 納米級(jí)炭黑染毒后 16HBE 細(xì)胞顯微鏡形態(tài)變化A/B：100×； C/D：200×。A/C：0μg/ml CB；B/D：100μg/ml CB。Fig.1 The morphology changes induced by CB in 16HBE cells.A/B: 100×;C/D; 200×.A/C: 0μg/ml CB; B/D: 100μg/ml CB

20 納米級(jí)炭黑誘導(dǎo) 16HBE 細(xì)胞 DNA 損傷的彗星實(shí)驗(yàn)圖(EB 200μg/ml CB；B：50μg/ml CB；C：100μg/ml CB；D：200μg/mFig.2 The images of DNAdamages induced by CB in 16HBEells (EB 200×).A: 0μg/ml CB; B: 50μg/ml CB; C: 100μg/ml CB; D200μg/ml CB

圖 3 納米級(jí)炭黑對(duì) 16HBE 細(xì)胞凋亡的影響的流式檢測(cè)圖A：0μg/ml CB；B：100μg/ml CB。Fig.3 The images of flow cytometry of 16HBE cellsApoptosisinduced by CB.A: 0μg/ml CB ; B: 100μg/ml CB.A
【參考文獻(xiàn)】

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2 王革芳;于觀貞;王詠梅;王杰軍;;轉(zhuǎn)移抑制基因MTSS1在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)及其意義[J];臨床腫瘤學(xué)雜志;2011年01期

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本文編號(hào)：2838435