發(fā)布時間：2024-05-31 02:13

　　背景:Th17/Treg細胞失衡可能是參與克羅恩病(CD)發(fā)生的重要環(huán)節(jié)。腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體(TRAIL)信號通路是影響包括CD在內的多種自身免疫性疾病的潛在機制之一。目的:探討TRAIL基因敲除對實驗性結腸炎小鼠Th17/Treg細胞平衡的影響。方法:采用CRISPR/Cas9基因敲除技術獲得TRAIL^-/-C57BL/6小鼠。分別將TRAIL^-/-小鼠和同品系野生型(WT)小鼠各20只隨機分為兩組,一組不予處理,一組以三硝基苯磺酸(TNBS)誘導實驗性結腸炎。評估各組小鼠結腸炎癥程度,采用real-time PCR、蛋白質印跡法和ELISA法檢測外周血和結腸組織中的Th17、Treg細胞相關轉錄因子RORγt、Foxp3和細胞因子白細胞介素-17(IL-17)、IL-10表達。結果:與未造模小鼠相比,造模小鼠體質量顯著下降,結腸縮短,疾病活動指數(shù)評分和組織活動度指數(shù)評分升高(P <0.05),TRAIL^-/-結腸炎小鼠上述表現(xiàn)更為明顯(P <0.05)。WT結腸炎小鼠外周血和結腸組織中的RORγ...

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【部分圖文】：

圖1TRAIL-/-小鼠基因型驗證

每日觀察并記錄小鼠精神狀態(tài)、進食和活動情況、體質量變化、糞便性狀和次數(shù)，行疾病活動指數(shù)(diseaseactivityindex,DAI)評分[9]。造模第4天以頸椎脫臼法處死小鼠，眼眶靜脈叢取血，置于EDTA抗凝管中，并收集炎癥表現(xiàn)明顯的結腸組織備用。部分結腸組織常規(guī)石蠟包....

圖2TRAIL基因敲除對小鼠結腸炎的影響

大量研究表明，腸黏膜免疫異常激活參與了CD的發(fā)生、發(fā)展。傳統(tǒng)觀念認為，CD患者的腸黏膜炎癥以分泌干擾素-γ(IFN-γ)、TNF-α的Th1型免疫反應為主，但近年研究發(fā)現(xiàn)Th17和Treg細胞在CD中可能起較Th1細胞更為重要的作用。Th17細胞主要分泌IL-17、IL-22、I....

圖3各組小鼠外周血和結腸組織RORγt、IL-17、Foxp3、IL-10mRNA表達比較

圖2TRAIL基因敲除對小鼠結腸炎的影響圖4各組小鼠外周血和結腸組織RORγt、IL-17、Foxp3、IL-10蛋白表達比較

圖4各組小鼠外周血和結腸組織RORγt、IL-17、Foxp3、IL-10蛋白表達比較

圖3各組小鼠外周血和結腸組織RORγt、IL-17、Foxp3、IL-10mRNA表達比較圖5各組小鼠外周血和結腸組織RORγt/Foxp3比值比較

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