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基于高通量測序技術(shù)的潰瘍性結(jié)腸炎及回腸貯袋患者腸道菌群的實驗研究

發(fā)布時間:2024-05-25 05:17
  目的:分析潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis,UC)、末端回腸造口及全結(jié)直腸切除、回腸貯袋肛管吻合術(shù)(ileal pouch anal anastomosis,IPAA)術(shù)后回腸貯袋患者腸道菌群結(jié)構(gòu)、豐度及多樣性變化,探討腸道菌群介導(dǎo)的UC及貯袋炎發(fā)生的微生物學(xué)機(jī)制。方法:連續(xù)選取2017年12月~2018年12月期間在天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院普通外科、消化內(nèi)科病房及門診,并接受結(jié)腸鏡和組織病理學(xué)檢查且符合條件的UC患者37例、末端回腸造口患者14例及IPAA術(shù)后回腸貯袋患者16例,分別記作UC組、造口組和貯袋組;選擇同時期性別年齡相匹配的健康人18例作為健康對照組,收集上述4組大便標(biāo)本至無菌管中,放置低溫冰箱儲存?zhèn)溆。按照改良Mayo評分系統(tǒng)將UC組分為緩解期(Aa)、輕度活動(Ab)、中度活動(Ac)及重度活動(Ad)四個亞組;按照貯袋炎活動指數(shù)評分(PDAI)將貯袋組分為≥7分的貯袋炎組(Pa)和<7分的非貯袋炎組(Pb)兩個亞組;按照基礎(chǔ)疾病的不同將造口組分為UC術(shù)后造口(Sa)組及非UC術(shù)后造口(Sb)組。隨后對糞便樣本DNA進(jìn)行抽提質(zhì)檢,PCR擴(kuò)增及產(chǎn)物提純...

【文章頁數(shù)】:100 頁

【學(xué)位級別】:碩士

【部分圖文】:

圖2.1糞便樣本基因組DNA的瓊脂糖凝膠電泳(2)Nan0DroPZo00超微量分光光度計檢測表明,1.5OD‘

圖2.1糞便樣本基因組DNA的瓊脂糖凝膠電泳(2)Nan0DroPZo00超微量分光光度計檢測表明,1.5OD‘


圖2.2NanoDrop2000超微量分光光度計檢測糞便樣本基因組DNA

圖2.2NanoDrop2000超微量分光光度計檢測糞便樣本基因組DNA


圖2.3PCR特異性擴(kuò)增產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果

圖2.3PCR特異性擴(kuò)增產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果

圖2.2NanoDrop2000超微量分光光度計檢測糞便樣本基因組DNAPCR特異性擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測本實驗采用瓊脂糖凝膠電泳檢測經(jīng)PCR特異性擴(kuò)增后的產(chǎn)物質(zhì)量,所得條晰、單一,濃度適中,片段大小在420bp左右,無明顯雜帶及彌散,表明擴(kuò)增后產(chǎn)物為細(xì)菌16Sr....


圖2.4UC各亞組與HC組OTU分布Venn圖

圖2.4UC各亞組與HC組OTU分布Venn圖

釋TU對應(yīng)的物種分類信息,在Silva128數(shù)據(jù)OTUs代表序列進(jìn)行比對分析,并在門(Phyluily)、屬(Genus)水平注釋其群落的物種信息分析后,可以得知樣本在各分類水平上的分類學(xué)相對豐度,將結(jié)果繪制成菌群組成分析柱狀平上的菌群組成情況。物種組成別出20個菌....



本文編號:3981758

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