發(fā)布時間：2020-11-18 01:29

　　 目的:觀察在使用恩替卡韋聯(lián)合強的松對HBV感染小鼠體內(nèi)病毒復(fù)制表達的影響，了解抗病毒的情況下使用強的松是否會導(dǎo)致HBV復(fù)制型小鼠體內(nèi)病毒復(fù)制表達增強。 方法： 1.檢測強的松對HBV感染小鼠體內(nèi)病毒復(fù)制表達的影響 采用高壓注射體內(nèi)轉(zhuǎn)染法將HBV復(fù)制型重組質(zhì)粒pAAV/HBV1.2導(dǎo)入雄性BALB/C小鼠，轉(zhuǎn)染后24h按體重、血清HBeAg水平對小鼠進行配對，分為實驗組和對照組。實驗組給予強的松200μg/只,溶于0.2ml生理鹽水灌胃，對照組給予等量生理鹽水處理。于處理后第3、7、10、16、22天處死小鼠，每個時間點實驗組和對照組各3-4只。采用real-time PCR（實時熒光定量PCR）檢測小鼠血清HBV-DNA(Hepatitis B virus DNA,乙型肝炎病毒DNA)、（HBV-DNA檢測下限為500copies/ml）；化學(xué)發(fā)光法檢測血清中HBeAg（Hepatitis B eAntigen，乙肝病毒e抗原）和HBsAg（Hepatitis B surface antigen，乙肝病毒表面抗原）。 2.檢測恩替卡韋對HBV感染小鼠體內(nèi)病毒復(fù)制表達的影響 造模方法同第一步，轉(zhuǎn)染后24h按體重、血清HBeAg水平對小鼠進行配對，分為實驗組和對照組。實驗組給予恩替卡韋1.5μg/只，溶于0.2ml生理鹽水灌胃，對照組給予等量生理鹽水處理。于處理后第1、3、6、11天處死小鼠，每個時間點實驗組和對照組各3-4只。采用real-time PCR檢測小鼠血清HBV-DNA、化學(xué)發(fā)光法檢測血清中HBeAg和HBsAg。 3.檢測在不同時間給予恩替卡韋和強的松對HBV感染小鼠體內(nèi)病毒復(fù)制表達的影響 造模方法同第一步，轉(zhuǎn)染24h后按體重、血清HBeAg水平對小鼠進行配對，分為6組實驗組和3組對照組，每組3~4只。其中4組實驗組在分組當(dāng)天（本實驗中定為第0天）給予恩替卡韋灌胃，1.5μg/只，溶于0.2ml生理鹽水中，并分別于第0、1、3、7天給于強的松處理，400μg/只，溶于0.2ml生理鹽水；剩余2組實驗組在第0天給予強的松，并于第3、7天給予恩替卡韋；3組對照組分別設(shè)為恩替卡韋、強的松、生理鹽水對照組；每組均在給予強的松灌胃16天后處死，留存血清。采用real-time PCR檢測小鼠血清HBV-DNA�；瘜W(xué)發(fā)光法檢測血清中HBeAg和HBsAg。 結(jié)果： 一、強的松對HBV感染小鼠體內(nèi)病毒復(fù)制表達的影響 1、強的松對小鼠血清HBV-DNA影響 1、實驗第3、7、10天強的松實驗組和生理鹽水對照組血清HBV-NDA檢測均為陽性，其平均值達105copies/ml,無明顯差別；而在實驗第16天兩組平均值分別為1.83×105,3.07×103copies/ml，兩組比較相差2lg,實驗組明顯高于對照組。實驗第22天兩組平均值分別為：2.03×104,1.99×103copies/ml，實驗組明顯高于對照組。 2、強的松對HBV小鼠血清HBsAg、HBeAg的影響 實驗第3、7、10天實驗組和對照組小鼠血清HBsAg無明顯差別；第16天實驗組和對照組小鼠血清HBsAg平均值分別為：53.35IU/ml、1.97IU/ml，實驗組高于對照組；第22天HBsAg水平仍高于對照組。實驗第3、7、10天小鼠血清實驗組和對照組HBeAg無明顯差別；第16天小鼠血清HBeAg實驗組明顯高于對照組;第22天小鼠血清HBeAg實驗組仍高于對照組。 二、恩替卡韋對HBV感染小鼠體內(nèi)病毒復(fù)制表達的影響 1、恩替卡韋對小鼠血清HBV-DNA影響 實驗組和對照組小鼠在第1天血清HBV-DNA均達104copies/ml，無明顯差異；第3天實驗組和對照組平均值為104copies/ml,105copies/ml,實驗組明顯低于對照組；第6天檢測實驗組其中1只為陰性，2只為陽性，其值為102copies/ml，對照組都為陽性，其平均值為5.27×105copies/ml;實驗組明顯低于對照組；第11天檢測實驗組均為陰性，對照組檢測均為陽性平均值為104copies/ml，對照組明顯高于實驗組。 2、恩替卡韋對小鼠血清HBsAg、HBeAg的影響 實驗第1、3、6、11天實驗組和對照組小鼠血清HBsAg水平無明顯差別；實驗第1、3、6、11天小鼠血清實驗組和對照組HBeAg水平無明顯差別。 三、恩替卡韋和強的松對HBV感染小鼠體內(nèi)病毒復(fù)制表達的影響 1、恩替卡韋和強的松對小鼠血清HBV-DNA的影響 生理鹽水對照組小鼠血清HBV-DNA平均值為2.1×103copies/ml；預(yù)先給予恩替卡韋的4組實驗組中，在第7、3、1、0天給予強的松灌胃后，在試驗終點HBV-DNA均為陰性；預(yù)先給予強的松的2組實驗組中，在第3天給予恩替卡韋小鼠血清中HBV-DNA平均值為2.21×103copies/ml，與生理鹽水對照組無明顯差別；在第7天給予恩替卡韋組，小鼠血清HBV-DNA平均值為1.29×104copies/ml，高于生理鹽水對照組也明顯高于3天組。 2、恩替卡韋和強的松對小鼠血清HBsAg、HBeAg的影響 預(yù)先給予恩替卡韋，并分別在7、3、1、0天給予強的松的4組實驗組，血清HBsAg水平均低于生理鹽水組，各組之間無明顯差異；預(yù)先給予強的松并分別于第3、7天給予恩替卡韋的2組實驗組中，小鼠血清HBsAg水平都低于生理鹽水組，且兩組之間無明顯差異。預(yù)先給予恩替卡韋，并分別在7、3、1、0天給予強的松的4組實驗組血清HBeAg水平都低于生理鹽水組，但其水平隨著恩替卡韋預(yù)先處理的時間延長而降低；預(yù)先給予強的松并分別于第3、7天給予恩替卡韋的實驗組小鼠，血清HBeAg都低于生理鹽水組，7天組稍高于3天組。 結(jié)論： HBV復(fù)制型小鼠在給予強的松處理之前預(yù)先給予或同時給予恩替卡韋處理可抑制HBV-DNA復(fù)制，有效避免強的松引起的HBV再激活。 給予強的松處理后延遲3天給予恩替卡韋即不能阻斷強的松對小鼠體內(nèi)HBV再激活，延遲越久效果越差。
【學(xué)位單位】：川北醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2014
【中圖分類】：R512.62
【文章目錄】：
致謝
摘要
Abstract
前言
材料與方法
結(jié)果
討論
結(jié)論
參考文獻
綜述：HBV 相關(guān)重型肝炎發(fā)病機制研究進展及糖皮質(zhì)激素的應(yīng)用
    參考文獻
附錄
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本文編號：2888169