發(fā)布時(shí)間：2020-11-17 13:11

　　 目的:探討針對大鼠RhoA基因的RNA干擾技術(shù)對HSC-T6 RhoA、Ⅰ型膠原(CollagenⅠ,ColⅠ)、Ⅲ型前膠原(Procollagen typeⅢ,PCⅢ)、透明質(zhì)酸(Hyaluronic acid ,HA)及層粘連蛋白(Laminin,LN)的影響。 方法:將陰性質(zhì)粒(HK-A質(zhì)粒)及大鼠RhoA基因特異性siRNA表達(dá)質(zhì)粒(Rat1質(zhì)粒、Rat2質(zhì)粒)轉(zhuǎn)染至大鼠肝星狀細(xì)胞HSC-T6。將細(xì)胞分組如下:A組(正常培養(yǎng))、B組(轉(zhuǎn)染HK-A質(zhì)粒)、C組(轉(zhuǎn)染Rat1質(zhì)粒)、D組(轉(zhuǎn)染Rat2質(zhì)粒)。用RT-PCR技術(shù)檢測細(xì)胞RhoA、ColⅠ、PCⅢmRNA的表達(dá)。用ELISA方法檢測培養(yǎng)上清中HA及LN的含量。 結(jié)果:Rat1質(zhì)粒所介導(dǎo)的RNAi技術(shù)能有效抑制大鼠肝星狀細(xì)胞HSC-T6 RhoA、PCⅢ、ColⅠmRNA表達(dá)量及培養(yǎng)上清中HA及LN生成量。與A組相比,C組RhoA、PCⅢmRNA表達(dá)量下降(p﹤0.05),ColⅠmRNA、HA及LN表達(dá)量也顯著下降(p﹤0.01),五者抑制率分別為43.77%、43.68%、71.00%、59.53%、93.08%。而B組、D組與A組相比,表達(dá)量均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p﹥0.05)。 結(jié)論:以RhoA為干預(yù)點(diǎn),Rat1質(zhì)粒所介導(dǎo)的RNAi技術(shù)能有效抑制大鼠肝星狀細(xì)胞HSC-T6細(xì)胞外基質(zhì)的生成,為體內(nèi)的進(jìn)一步研究提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【學(xué)位單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2007
【中圖分類】：R575.2
【部分圖文】：

生長狀態(tài)差，質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率約 30％（見圖 1、圖 2、圖 3、圖 4）。圖 1 普通光學(xué)顯微鏡下所見 A 組細(xì)胞（正常培養(yǎng)） ×200圖 2 熒光顯微鏡下所見 B 組細(xì)胞（轉(zhuǎn)染 HK-A 質(zhì)粒） ×200

生長狀態(tài)差，質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率約 30％（見圖 1、圖 2、圖 3、圖 4）。圖 1 普通光學(xué)顯微鏡下所見 A 組細(xì)胞（正常培養(yǎng)） ×200圖 2 熒光顯微鏡下所見 B 組細(xì)胞（轉(zhuǎn)染 HK-A 質(zhì)粒） ×200

備注：從右至左泳道分Marker （ 從 上 到100bp 、 200bp 、 30400bp、500bp、600A 組、B 組、C 組、樣本。內(nèi)參Ⅰ片段為 17RhoA 片段為 347bp
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本文編號：2887532