發(fā)布時(shí)間：2020-11-16 01:57

　　 慢性肝病是我國(guó)沉重的疾病負(fù)擔(dān)之一,肝硬化常是肝損傷進(jìn)展的最終結(jié)局,造成較高的病殘率和病死率。不能對(duì)肝纖維化進(jìn)行早期發(fā)現(xiàn)和實(shí)時(shí)干預(yù)評(píng)估一直是制約基礎(chǔ)研究走向臨床的“瓶頸”。現(xiàn)在已有大量的實(shí)驗(yàn)證據(jù)表明肝纖維化伴隨著血管新生,與免疫、炎癥等病理生理過程關(guān)系密切。整合素αvβ3在肝星狀細(xì)胞活化和血管新生中起著重要作用。本課題的研究目的是通過高分辨率小動(dòng)物超聲系統(tǒng)用以靶向環(huán)肽標(biāo)記的超聲增強(qiáng)造影劑,觀察正常大鼠和纖維化大鼠肝臟超聲增強(qiáng)前后的聲像變化,分析不同時(shí)期纖維化大鼠肝臟聲像差異和肝組織病理分期的相關(guān)性；建立整合素αvβ3受體的靶向超聲增強(qiáng)影像與肝纖維化程度的關(guān)系；為肝纖維化早期診斷和治療評(píng)價(jià)探索可靠實(shí)用的無創(chuàng)性方法。 研究?jī)?nèi)容包括如下幾個(gè)方面：第一部分是體外實(shí)驗(yàn),包括大鼠肝星狀細(xì)胞(HSC)的分離、培養(yǎng)、鑒定和體外活化,對(duì)整合素αvβ3在HSC的表達(dá)情況進(jìn)行定性、定位和定量分析；通過固相合成法合成c(RGDyK)環(huán)肽和c(RGAyk)假肽,ESI-MS測(cè)定分子量,HPLC進(jìn)行純度分析,并研究其與活化HSC結(jié)合的生物化學(xué)特征。第二部分是硫代乙酰胺(TAA)誘導(dǎo)大鼠肝纖維化模型的建立,以及整合素αvβ3的表達(dá)情況和血管新生的研究。第三部分是Biotin-PEG-c(RGDyK)/c(RGAyK)的合成,與微泡的結(jié)合及高分辨率小動(dòng)物超聲系統(tǒng)對(duì)不同纖維化時(shí)期的大鼠肝臟進(jìn)行超聲造影,取大鼠肝組織進(jìn)行病理檢查。 研究結(jié)果：體外活化的大鼠HSC中整合素αvβ3表達(dá)顯著增高,固相合成的整合素αvβ3受體RGD配基能與活化HSC發(fā)生受體配基樣結(jié)合,人工修飾的Biotin-PEG-c(RGDyK)保持RGD配基特性,靶向超聲增強(qiáng)造影提示,纖維化大鼠肝臟對(duì)Biotin-PEG-c(RGDyK)標(biāo)記的靶向微泡攝取明顯高于正常大鼠,隨著纖維化的進(jìn)展,聲強(qiáng)信號(hào)也顯著增強(qiáng),差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論：靶向超聲增強(qiáng)造影可能成為檢測(cè)早期肝纖維化的有效方法。
【學(xué)位單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2010
【中圖分類】：R575.2
【部分圖文】：

實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)圖解

圖2.新分離的HSC為圓形(x40)cs形態(tài)學(xué)觀察養(yǎng)6小時(shí)后細(xì)胞貼壁率超過50%，培養(yǎng)48小時(shí)絕伸出偽足。72小時(shí)后部分細(xì)胞形態(tài)變化，伸展為減少(圖3一A)，細(xì)胞培養(yǎng)10天后細(xì)胞增殖明顯，細(xì)，胞漿內(nèi)折光顆粒減少或消失。傳代的大鼠HSC生大明顯為肌成纖維母樣細(xì)胞(MFB)，傳3一4代細(xì)胞逐

培養(yǎng)活化的HSC呈星形和不規(guī)則形(X100)
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本文編號(hào)：2885482