【摘要】：目的探討大鼠纖維化肝組織勻漿上清液對人臍帶間充質干細胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUCMSCs)向肝細胞分化的誘導作用。方法取健康SD大鼠(體重180~220 g),采用腹腔注射3%硫代乙酰胺生理鹽水溶液(200 mg/kg,2次/周,共4周)方法制備大鼠肝纖維化模型,取造模成功的纖維化肝組織用于制備肝纖維化誘導培養(yǎng)基。取第3代HUCMSCs進行分組培養(yǎng)7 d,對照組以含10%FBS的DMEM/F12培養(yǎng)基培養(yǎng),實驗組以含10%FBS及50 g/L肝纖維化誘導培養(yǎng)基上清的DMEM/F12培養(yǎng)基培養(yǎng)。倒置顯微鏡下觀察兩組細胞形態(tài)學變化;取培養(yǎng)7 d的對照組及實驗組細胞,采用Western blot法檢測甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)、細胞角蛋白18(cytokeratin 18,CK18)、CYP3A4表達情況,采用糖原過碘酸-雪夫(periodic acid-schiff,PAS)染色檢測細胞儲存糖原的能力,分別采用二乙酰肟比色法及ELISA法測定兩組細胞培養(yǎng)液中尿素(blood urea nitrogen,BUN)和白蛋白(albumin,ALB)的含量。結果與對照組長梭形細胞相比,實驗組細胞于誘導1 d時即可見到細胞兩極回縮,胞體變短;誘導7 d時,細胞呈不規(guī)則形或類圓形,胞體豐滿。Western blot檢測示,對照組細胞未見AFP、CK18、CYP3A4表達;實驗組細胞可表達肝細胞特異性標志物AFP、CK18及與代謝功能相關的重要蛋白CYP3A4。對照組上清液中BUN、ALB濃度分別為(0.43±0.07)mmol/L和(8.08±0.41)μg/mL,實驗組分別為(2.52±0.20)mmol/L和(41.48±4.11)μg/mL,比較差異均有統(tǒng)計學意義(t=24.160,P=0.000;t=19.810,P=0.000)。PAS染色示,對照組HUCMSCs細胞核呈深藍色,細胞質呈淡紫色;實驗組細胞整個胞體被染成深紫色,細胞核可見。結論大鼠纖維化肝組織勻漿上清液可快速誘導HUCMSCs向肝細胞分化,形成的肝樣細胞不僅具備肝細胞表面標志物,同時有肝藥酶的表達,并具有儲存糖原、合成BUN及分泌ALB的能力,可部分替代肝細胞功能,這可能是干細胞移植改善肝功能的機制之一。
[Abstract]:......
【作者單位】： 解放軍醫(yī)學院;解放軍白求恩國際和平醫(yī)院藥劑科;
【基金】：軍隊“十二五”重點課題資助項目(BWS11J002)~~
【分類號】：R575.2

【參考文獻】

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本文編號：2410624