發(fā)布時(shí)間：2019-01-18 10:38

【摘要】：目的探討大鼠纖維化肝組織勻漿上清液對(duì)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUCMSCs)向肝細(xì)胞分化的誘導(dǎo)作用。方法取健康SD大鼠(體重180~220 g),采用腹腔注射3%硫代乙酰胺生理鹽水溶液(200 mg/kg,2次/周,共4周)方法制備大鼠肝纖維化模型,取造模成功的纖維化肝組織用于制備肝纖維化誘導(dǎo)培養(yǎng)基。取第3代HUCMSCs進(jìn)行分組培養(yǎng)7 d,對(duì)照組以含10%FBS的DMEM/F12培養(yǎng)基培養(yǎng),實(shí)驗(yàn)組以含10%FBS及50 g/L肝纖維化誘導(dǎo)培養(yǎng)基上清的DMEM/F12培養(yǎng)基培養(yǎng)。倒置顯微鏡下觀察兩組細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化;取培養(yǎng)7 d的對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞,采用Western blot法檢測(cè)甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)、細(xì)胞角蛋白18(cytokeratin 18,CK18)、CYP3A4表達(dá)情況,采用糖原過碘酸-雪夫(periodic acid-schiff,PAS)染色檢測(cè)細(xì)胞儲(chǔ)存糖原的能力,分別采用二乙酰肟比色法及ELISA法測(cè)定兩組細(xì)胞培養(yǎng)液中尿素(blood urea nitrogen,BUN)和白蛋白(albumin,ALB)的含量。結(jié)果與對(duì)照組長(zhǎng)梭形細(xì)胞相比,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞于誘導(dǎo)1 d時(shí)即可見到細(xì)胞兩極回縮,胞體變短;誘導(dǎo)7 d時(shí),細(xì)胞呈不規(guī)則形或類圓形,胞體豐滿。Western blot檢測(cè)示,對(duì)照組細(xì)胞未見AFP、CK18、CYP3A4表達(dá);實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞可表達(dá)肝細(xì)胞特異性標(biāo)志物AFP、CK18及與代謝功能相關(guān)的重要蛋白CYP3A4。對(duì)照組上清液中BUN、ALB濃度分別為(0.43±0.07)mmol/L和(8.08±0.41)μg/mL,實(shí)驗(yàn)組分別為(2.52±0.20)mmol/L和(41.48±4.11)μg/mL,比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=24.160,P=0.000;t=19.810,P=0.000)。PAS染色示,對(duì)照組HUCMSCs細(xì)胞核呈深藍(lán)色,細(xì)胞質(zhì)呈淡紫色;實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞整個(gè)胞體被染成深紫色,細(xì)胞核可見。結(jié)論大鼠纖維化肝組織勻漿上清液可快速誘導(dǎo)HUCMSCs向肝細(xì)胞分化,形成的肝樣細(xì)胞不僅具備肝細(xì)胞表面標(biāo)志物,同時(shí)有肝藥酶的表達(dá),并具有儲(chǔ)存糖原、合成BUN及分泌ALB的能力,可部分替代肝細(xì)胞功能,這可能是干細(xì)胞移植改善肝功能的機(jī)制之一。
[Abstract]:......
【作者單位】： 解放軍醫(yī)學(xué)院;解放軍白求恩國際和平醫(yī)院藥劑科;
【基金】：軍隊(duì)“十二五”重點(diǎn)課題資助項(xiàng)目(BWS11J002)~~
【分類號(hào)】：R575.2

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2410624