【摘要】：目的:本研究首先比較自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)患者、AIH肝硬化患者及健康對照者口服乳果糖(lactulose,L)和甘露醇(mannitol,M)雙糖分子探針后尿液中二者的回收情況以評價各組腸屏障功能,旨在探索腸屏障功能改變、腸道來源的抗原如脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)在AIH發(fā)生發(fā)展中的作用。另外,我們分析了AIH患者肝組織巨噬細胞極化分型分子的表達,旨在初步探討并揭示AIH患者肝組織中巨噬細胞的功能表型。方法:第一部分:AIH患者腸屏障功能評價收集2015年1月-2016年1月于天津醫(yī)科大學總醫(yī)院消化科就診的AIH患者5例和對照AIH肝硬化患者5例、健康對照者10例。收集各組受試者口服測試液之后6小時以內(nèi)的所有尿液,利用高效液相色譜法(high performance liquid chromatography,HPLC)測定尿液中乳果糖和甘露醇的回收情況,計算尿液乳果糖/甘露醇比值也即L/M值以評價腸屏障功能。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審核準許(IRB2015-YX-002),所有患者均知情同意。第二部分:AIH患者肝臟巨噬細胞極化分型評價收集2015年1月-2016年1月于天津醫(yī)科大學總醫(yī)院消化科就診的AIH患者5例和對照肝病患者6例、肝囊腫患者5例,行超聲引導下肝穿刺活檢術取得長約1.5cm的肝組織條。應用免疫組化法、免疫熒光染色法檢測各組肝病患者肝組織中巨噬細胞的活化和極化分型情況。進一步通過RT-PCR法檢測并驗證肝組織中巨噬細胞的極化分型相關表面標志物和細胞因子。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會審核準許(IRB2015-YX-002),所有患者均知情同意。結果:第一部分:AIH患者腸屏障功能評價(1)參與尿樣收集的5名AIH患者、5名AIH肝硬化患者在口服測試液后耐受良好、過程順利,無一人出現(xiàn)不良反應。10名健康對照者中1名(10%)出現(xiàn)輕微腹脹等不良反應,2名(20%)出現(xiàn)明顯腹脹等中度不良反應,7名(70%)出現(xiàn)腹痛腹瀉等重度不良反應,收集結束時3名(30%)健康志愿者未收集到尿液。(2)甘露醇回歸方程:y=1.096x+6.510,乳果糖回歸方程:y=1.032x+6.362,其中,x為標準品濃度的常用對數(shù),y為標準品峰面積的常用對數(shù)。(3)健康對照組尿樣中可檢測到甘露醇,其回收量、回收率分別為92.35mg(14.60~209.4mg),1.85%(0.29~4.19%),未檢測到乳果糖,l/m值為0.00(0.00~0.00);aih患者尿樣中乳果糖回收量、乳果糖回收率、l/m值與健康對照組相比,差異均無統(tǒng)計學意義,其甘露醇回收量362.22mg(176.67~515.36mg)、甘露醇回收率7.24%(3.53~10.31%)與健康對照組相比,差異有統(tǒng)計學意義(p=0.023、0.023);aih肝硬化患者尿樣中甘露醇回收量414.54mg(276.53~931.18mg)、回收率8.29%(5.53~18.62%)、乳果糖回收量33.40mg(6.80~48.31mg)、回收率0.37%(0.09~0.64%)及l(fā)/m值0.05(0.02~0.10)與健康對照組[92.35mg(14.60~209.4mg)、1.85%(0.29~4.19%)、0.00mg(0.00~0.00mg)、0.00%(0.00~0.00%)、0.00(0.00~0.00)]相比,差異均有統(tǒng)計學意義(p=0.021、0.021、0.014、0.014、0.014);aih肝硬化患者尿樣中乳果糖回收量33.40mg(6.80~48.31mg)、回收率0.37%(0.09~0.64%)、l/m值0.05(0.02~0.10)與aih患者[0.00mg(0.00~6.33mg)、0.00%(0.00~0.06%)、0.00(0.00~0.03)]相比,差異均有統(tǒng)計學意義(p=0.004、0.004、0.007)。第二部分:aih患者肝臟巨噬細胞極化分型評價(1)aih患者肝組織巨噬細胞數(shù)量增多:aih患者與脂肪肝患者、乙肝患者相比,cd68陽性細胞絕對數(shù)均顯著增多(p=0.034、0.034),脂肪肝患者與乙肝患者相比cd68陽性細胞絕對數(shù)間的差異無統(tǒng)計學意義。(2)aih患者肝組織m2型巨噬細胞相對低表達:脂肪肝患者與aih患者、乙肝患者相比,cd206陽性細胞絕對數(shù)顯著增多(p=0.019、0.046),aih患者與乙肝患者相比cd206陽性細胞絕對數(shù)間的差異無統(tǒng)計學意義;脂肪肝患者肝組織cd206相對表達量顯著高于aih患者和乙肝患者[(8.08±1.63)比(1.03±0.12)、(2.36±1.32)],差異有統(tǒng)計學意義(p均0.05),而aih患者和乙肝患者肝組織cd206相對表達量差異并沒有統(tǒng)計學意義;aih患者肝組織il-10相對表達量顯著高于乙肝患者[(2.16±0.89)比(0.93±0.59)],差異有統(tǒng)計學意義(p0.05),而aih患者與脂肪肝患者相比、乙肝患者與脂肪肝患者相比,肝組織il-10的相對表達量差異均無統(tǒng)計學意義。(3)aih患者肝組織m1型巨噬細胞相對高表達:aih患者、乙肝患者肝組織中存在cd68與inos共表達的m1型巨噬細胞,脂肪肝患者和肝囊腫患者肝組織中鮮見cd68與inos共表達的m1型巨噬細胞;aih患者和乙肝患者肝組織tnf-α相對表達量均顯著高于脂肪肝患者[(13.29±7.55)、(12.39±3.79)比(0.77±0.38)],差異有統(tǒng)計學意義(P均0.05),而AIH患者和乙肝患者TNF-α相對表達量的差異并無統(tǒng)計學意義;AIH患者和乙肝患者肝組織iNOS相對表達量均顯著高于脂肪肝患者[(12.22±5.13)、(10.42±4.27)比(1.25±0.77)],差異有統(tǒng)計學意義(P均0.05),而AIH患者和乙肝患者iNOS相對表達量的差異并無統(tǒng)計學意義;AIH患者和乙肝患者肝組織IL-1β相對表達量顯著高于脂肪肝患者[(5.90±3.01)、(12.19±3.71)比(1.76±1.42)],差異有統(tǒng)計學意義(P均0.05),乙肝患者肝組織IL-1β的相對表達量顯著高于AIH患者,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論:(1)健康對照者對于相同劑量的乳果糖、甘露醇耐受差,應注重探索一個檢測敏感、耐受良好的實驗劑量。健康對照組無腸屏障功能的改變,肝硬化患者確有L/M值的增大、腸屏障功能的改變,與前兩者相比本研究似傾向于提示AIH患者腸屏障功能尚正常,但未來應在優(yōu)化方法的基礎上擴大樣本量進一步驗證。(2)AIH患者炎癥反應及肝損傷過程中巨噬細胞活化并以M1促炎表型為多。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R575.1

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本文編號：2384123