發(fā)布時間：2018-03-01 00:32

  本文關(guān)鍵詞： 小干擾RNA 半胱氨酸蛋白酶 內(nèi)毒素 肝細胞 細胞凋亡 細胞增殖　出處：《山東醫(yī)藥》2017年34期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的觀察利用小干擾RNA(siRNA)抑制Caspase-3表達對內(nèi)毒素誘導(dǎo)肝細胞凋亡的影響。方法針對Caspase-3的DNA序列843~1 634 bp設(shè)計引物,常規(guī)分子克隆至慢病毒表達載體p Lenti-7.1,同時設(shè)置空載體為陰性對照;利用Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染至293T細胞,48 h后收獲抑制Caspase-3表達病毒質(zhì)粒V-Caspase-3和空載體病毒質(zhì)粒V-control。將肝細胞HL7702隨機分為觀察組和對照組,分別加入V-Caspase-3、V-control培養(yǎng)4 h,均與終濃度為20 mg/L的內(nèi)毒素共培養(yǎng)12 h。采用Western blotting法檢測Caspase-3蛋白,流式細胞術(shù)測算細胞凋亡率,原位末端標記技術(shù)測算細胞凋亡指數(shù)(AI),MTT法觀察細胞增殖活力。結(jié)果觀察組HL7702細胞Caspase-3相對表量為17.32±2.16,低于對照組的62.14±4.36(P0.01);觀察組HL7702細胞凋亡率為28.75%,低于對照組的72.67%(P0.01);觀察組HL7702細胞AI為23.52±1.24,低于對照組的54.26±1.87(P0.01);觀察組HL7702細胞增殖率為65.47%±6.24%,高于對照組的41.39%±4.87%(P0.01)。結(jié)論通過siRNA抑制Caspase-3表達能有效降低內(nèi)毒素誘導(dǎo)的HL7702細胞凋亡,從而增強細胞增殖活性。
[Abstract]:Objective to observe the effect of small interference RNA-siRNAs (siRNAs) on lipopolysaccharide induced hepatocyte apoptosis. Methods A primer was designed for the DNA sequence of Caspase-3 (843 ~ 1 634 BP), which was cloned into lentivirus expression vector pLenti-7.1, and empty vector was set as negative control. After transfection of Lipofectamine 2000 into 293T cells for 48 h, Caspase-3 expression plasmid V-Caspase-3 and empty vector virus plasmid V-controlwere harvested. HL7702 in hepatocytes was randomly divided into two groups: observation group and control group. V-Caspase-3 V-control was added for 4 h and co-cultured with endotoxin for 20 mg/L for 12 h. Caspase-3 protein was detected by Western blotting assay and apoptosis rate was measured by flow cytometry. Results the relative surface volume of Caspase-3 of HL7702 cells in the observation group was 17.32 鹵2.16, which was lower than that of the control group (62.14 鹵4.36) P0.01.The apoptotic rate of the HL7702 cells in the observation group was 28.75 and was lower than that in the control group (P 0.01). The AI of HL7702 cells was 23.52 鹵1.24, which was lower than that of the control group (54.26 鹵1.87P0.01), and the proliferative rate of HL7702 cells in the observation group was 65.47% 鹵6.24g, which was higher than that in the control group (41.39% 鹵4.87p 0.01). Conclusion the inhibition of Caspase-3 expression by siRNA can effectively reduce the apoptosis of HL7702 cells induced by endotoxin. Thus, the cell proliferation activity was enhanced.
【作者單位】： 河南醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校;
【基金】：河南省高等學(xué)校重點科研項目計劃(15B310006)
【分類號】：R575

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本文編號：1549660