發(fā)布時(shí)間：2018-02-26 17:06

  本文關(guān)鍵詞： 白細(xì)胞介素-33 原發(fā)性膽汁性肝硬化 髓過氧化物酶 白介素可溶性受體 中性粒細(xì)胞 原發(fā)性膽汁性肝硬化 愈肝方 熊去氧膽酸膠囊 臨床療效　出處：《第四軍醫(yī)大學(xué)》2014年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的：原發(fā)性膽汁性肝硬化(primary billary cirrhosis, PBC)的定義是一種進(jìn)行性的,慢性的肝內(nèi)膽汁淤積性疾病,是以肝細(xì)胞內(nèi)中、小膽管的非化膿性炎癥,以及在血清中抗線粒體抗體(Anti-mitochondrial antibody, AM A)呈高滴度表現(xiàn)為主要特征的自身免疫性肝病,PBC發(fā)病機(jī)制仍未完全闡明,但公認(rèn)的是,免疫因素在其發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮著十分重要的作用。白細(xì)胞介素-33 (Interleukin-33, IL-33)是一種在固有免疫和獲得性免疫中均具有廣泛效應(yīng)的細(xì)胞因子。IL-33通過其受體ST2信號(hào)途徑,促進(jìn)了Th2類細(xì)胞因子、促炎細(xì)胞因子(IL-8、IL-1β)和組胺的釋放。另外,能直接作用于中性粒細(xì)胞的IL-33,通過上調(diào)中性粒細(xì)胞表面趨化因子受體(CXCR2)的表達(dá),從而增強(qiáng)中性粒細(xì)胞的遷移能力。然而在PBC疾病研究中,有關(guān)IL-33的相關(guān)作用研究尚無相關(guān)報(bào)道,IL-33的表達(dá)特征及其對(duì)中性粒細(xì)胞的作用也不清楚,兩者與PBC患者疾病的嚴(yán)重程度,以及肝臟組織學(xué)的嚴(yán)重程度的關(guān)系仍未闡明。本研究旨在通過初步觀察PBC患者(Child-Pugh A級(jí)組21例、Child-Pugh B級(jí)組29例及Child-Pugh C級(jí)組18例)血清及肝組織內(nèi)IL-33的表達(dá)水平及其分布水平,同時(shí)觀察PBC患者肝臟組織中IL-33 mRNA的表達(dá)水平與肝組織中性粒細(xì)胞(MPO+細(xì)胞)的浸潤水平的相關(guān)性,并進(jìn)一步通過體外實(shí)驗(yàn)觀察PBC患者外周血漿中IL-33對(duì)中性粒細(xì)胞的趨化作用,從而探討IL-33與PBC患者疾病進(jìn)展的可能機(jī)制。方法：1.采用ELISA技術(shù),檢測(cè)PBC患者(Child-Pugh A級(jí)組、Child-Pugh B級(jí)組、Child-PughC級(jí)組)血清中IL-33水平,觀察IL-33表達(dá)水平與PBC患者肝損傷標(biāo)志ALT、AST、 ALP、GGT水平的相關(guān)性,闡明IL-33表達(dá)水平與疾病嚴(yán)重程度的關(guān)系。2.利用肝臟組織原位免疫組化分析技術(shù)和：RT-PCR技術(shù),檢測(cè)PBC患者不同組織學(xué)階段的(早期組：相于I+II期、晚期組：相當(dāng)于Ⅲ+Ⅳ期)肝組織內(nèi)IL-33 mRNA以及ST2mRNA表達(dá)水平,觀察IL-33+細(xì)胞在PBC患者不同組織學(xué)階段的表達(dá)水平以及PBC患者肝臟中中性粒細(xì)胞(MPO+細(xì)胞)的數(shù)量與IL-33 mRNA水平相關(guān)性。3.通過中性粒細(xì)胞趨化實(shí)驗(yàn),明確PBC患者血漿中IL-33對(duì)中性粒細(xì)胞的作用效應(yīng)。結(jié)果1.PBC患者血清中的IL-33濃度升高與健康對(duì)照組(HCs)血清中IL-33表達(dá)水平(32.24±8.37 pg/ml)相比,PBC患者血清中IL-33的濃度(69.44±10.70 pg/ml)顯著升高(P0.001)。此外我們對(duì)PBC患者進(jìn)行Child-Pugh分級(jí),發(fā)現(xiàn)：與Child-Pugh A級(jí)組PBC患者血清IL-33水平(57.24±6.55 pg/ml)相比,Child-Pugh B級(jí)組和Child-Pugh C級(jí)組的IL-33水平明顯升高(74.93±6.56和75.61±7.95 pg/ml)(P0.001)；而在Child-Pugh B級(jí)組和Child-Pugh C級(jí)組患者血清IL-33水平則未見明顯差異(P0.05)2.PBC患者血清中sST2的濃度升高我們進(jìn)一步檢測(cè)了PBC患者血清中sST2的濃度,發(fā)現(xiàn)與健康對(duì)照組(HCs)血清中sST2表達(dá)水平(144.94±224.60 pg/ml)相比,PBC患者血清中sST2的濃度(70.47±25.81 pg/ml)顯著升高(P0.001)。而各Child-Pugh分級(jí)組的PBC患者血清sST2濃度無明顯差異(Child-Pugh A級(jí)組,1343.84±583.28 pg/ml、Child-Pugh B級(jí)組,1438.31±485.42 pg/ml、Child-PughC級(jí)組,1439.37±503.73 pg/ml) (P0.05)。3.PBC患者血清11.,-33濃度與ALP水平相關(guān)我們進(jìn)一步對(duì)PBC患者血清IL-33水平與其肝生化學(xué)指標(biāo)的相關(guān)性進(jìn)行探討,發(fā)現(xiàn)PBC患者血清IL-33濃度與ALP水平顯著相關(guān)(R=0.421,P0.001),而與ALTAST及GGT水平無顯著相關(guān)性(R=-0.023、R=-0.071、R=0.158,P值均0.05)。4.IL-33+細(xì)胞增多與PBC患者的組織學(xué)分期密切相關(guān)我們進(jìn)一步對(duì)PBC患者肝組織內(nèi)IL-33原位免疫組化分析發(fā)現(xiàn),與HCs肝臟組織相比,PBC患者肝組織中IL-33+細(xì)胞數(shù)量顯著增多(P0.001)。此外,我們進(jìn)一步探討PBC患者肝組織中IL-33+細(xì)胞數(shù)量與PBC患者肝臟病理分期的相關(guān)性,發(fā)現(xiàn),與PBC Ⅰ期PPBC Ⅱ期患者相比,PBC Ⅲ期和PBC Ⅳ期患者肝組織中IL-33+細(xì)胞浸潤顯著增多(P0.001)。與此同時(shí),我們發(fā)現(xiàn)IL-33 mRNA的表達(dá)水平在PBC Ⅲ期和PBC Ⅳ期患者肝組織中,較HCs、PBC Ⅰ期和IPBC Ⅱ期患者肝組織中水平明顯升高(P0.001)。5.PBC患者肝組織內(nèi)中性粒細(xì)胞浸潤增加且與其IL-33 mRNA表達(dá)水平密切相關(guān)隨后我們對(duì)PBC患者肝組織中中性粒細(xì)胞的浸潤水平進(jìn)行探討,肝臟原位免疫組織化學(xué)發(fā)現(xiàn)髓過氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)+細(xì)胞較HCs肝組織中顯著增多(P0.001)。我們進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),與PBC Ⅰ期和PBC Ⅱ期患者相比,PBC Ⅲ期和PBC Ⅳ期患者肝組織中MPO+細(xì)胞浸潤明顯升高(P0.001)。與此同時(shí),我們還發(fā)現(xiàn)PBC患者肝組織中MPO+細(xì)胞的數(shù)量與其IL-33 mRNA表達(dá)水平密切相關(guān)(R=0.81,P0.001)6.升高的IL-33促進(jìn)了中性粒細(xì)胞的趨化作用為了進(jìn)一步確定IL-33對(duì)中性粒細(xì)胞的作用效應(yīng),我們進(jìn)行了中性粒細(xì)胞趨化作用的分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn),與HCs患者的血漿相比,PBC患者的血漿可誘導(dǎo)更多的中性粒細(xì)胞遷移(P0.001)。此外,與PBC患者血漿中培養(yǎng)的中性粒細(xì)胞相比,當(dāng)把IL-33加回到PBC患者血漿時(shí),其中性粒細(xì)胞的趨化指數(shù)可進(jìn)一步升高(P0.001)。結(jié)論P(yáng)BC患者的血清IL-33表達(dá)水平明顯升高,同時(shí)肝組織內(nèi)IL-33+細(xì)胞表達(dá)水平以及IL-33 mRNA的表達(dá)水平也明顯升高,而且與PBC患者疾病進(jìn)展相關(guān)；PBC患者肝組織內(nèi)中性粒細(xì)胞浸潤增多,且與IL-33 mRNA的表達(dá)水平相關(guān),并隨著PBC患者疾病進(jìn)展浸潤加重,提示中性粒細(xì)胞在PBC患者疾病進(jìn)程中發(fā)揮重要作用；PBC患者的血清sST2表達(dá)水平明顯升高,體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)IL-33可增加PBC患者血漿對(duì)中性粒細(xì)胞的趨化作用,進(jìn)一步提示IL-33可能通過IL-33/ST2募集中性粒細(xì)胞從血液中向肝組織內(nèi)遷移進(jìn)而加重PBC患者疾病進(jìn)展。這些結(jié)果進(jìn)一步證實(shí),IL-33誘導(dǎo)的中性粒細(xì)胞遷移可能會(huì)成為PBC患者治療的新靶點(diǎn)。為將來進(jìn)一步研究原發(fā)性膽汁性肝硬化的發(fā)病機(jī)制,以及開發(fā)臨床治療新藥物,提供了理論依據(jù)和參考。目的：本研究旨在通過觀察愈肝方聯(lián)合熊去氧膽酸膠囊對(duì)原發(fā)性膽汁性肝硬化患者肝功能的改善,闡述中西藥聯(lián)合應(yīng)用對(duì)PBC的臨床療效。方法：對(duì)于2011年9月至2012年9月在我科確診為原發(fā)性膽汁性肝硬化的患者中,選擇符合入選標(biāo)準(zhǔn)的60例患者,隨機(jī)分為治療組(愈肝方聯(lián)合熊去氧膽酸膠囊)和對(duì)照組(單用熊去氧膽酸膠囊),檢測(cè)治療前、治療后4周及治療后12周患者肝功能指標(biāo)：堿性磷酸酶、總膽紅素、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、γ-谷氨酞轉(zhuǎn)移酶,應(yīng)用spss17.0統(tǒng)計(jì)軟件,計(jì)數(shù)資料采用配對(duì)/檢驗(yàn)的方法,率的比較采用χ2分析的方法,進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,從而評(píng)價(jià)采用愈肝方聯(lián)合西藥熊去氧膽酸膠囊治療原發(fā)性膽汁性肝硬化的臨床療效。結(jié)果：1.總有效率分析(見表1)：治療4周后,總有效率分別為：治療組83.3%、對(duì)照組63.3%,兩組比較有顯著的差異(P0.05)。而治療12周后,總有效率分別為：治療組90.0%,對(duì)照組66.7%,兩組比較有顯著的差異(P0.001)。2.肝功能分析(見圖1、2、3)：在0周時(shí),治療組與對(duì)照組相比較：各肝功能指標(biāo)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),說明兩組之間具有可比性。治療4周后：各組內(nèi)治療前、后相比較,治療組、對(duì)照組TBil下降均無明顯差異(P0.05),而ALT、AST、ALP、GGT均有明顯下降,差異顯示有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(**P0.05,***P0.001)；兩組間相比較(治療組、對(duì)照組比較)：TBil下降無顯著性差異(P0.05),治療組ALP、ALT、AST、GGT下降明顯,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(**P0.05,***P0.001)。在治療12周后：各組內(nèi)治療前、后比較,TBil、ALT、AST、ALP、GGT均有明顯下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(**P0.05,***P0.001)；兩組間相比較(治療組、對(duì)照組比較)：治療組TBi、ALP、 ALT、AST、GGT下降明顯,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(**P0.05,***P0.001)。結(jié)論：采用愈肝方聯(lián)合西藥熊去氧膽酸膠囊治療原發(fā)性膽汁性肝硬化,能有效改善患者的肝功能指標(biāo),而且無明顯不良反應(yīng),臨床上值得推廣應(yīng)用。
[Abstract]:Objective : To study the expression of IL - 33 and IL - 33 in liver tissues of PBC patients , and to investigate the possible mechanism of IL - 33 and IL - 33 in patients with PBC . The levels of IL - 33 in serum of PBC patients were significantly higher than those in healthy control group ( P < 0.01 ) . The levels of IL - 33 in serum of PBC patients were significantly higher than those in healthy control group ( P < 0.01 ) . The levels of IL - 33 + cells in liver tissues of PBC patients were significantly higher than those in patients with PBC ( R = - 0.023 , P < 0.01 ) . The results showed that IL - 33 could increase the liver function in patients with primary biliary cirrhosis . The results showed that IL - 33 could increase the plasma concentration of IL - 33 / ST2 in patients with primary biliary cirrhosis . ***P0.001). Conclusion : The treatment of primary biliary cirrhosis with the combination of the Yugan prescription and the western medicine bear deoxycholic acid capsule can effectively improve the liver function index of the patient , and has no obvious adverse reaction , and is worthy of popularization and application in clinic .

【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R575.22

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本文編號(hào)：1538911