發(fā)布時(shí)間：2020-12-06 00:21

　　目的:1、研究惡性脈絡(luò)膜黑色素瘤組織（UM）中成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子2（FGF2）的表達(dá)情況。2、證明通過FGF2刺激人侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤（MUM2B）細(xì)胞系,使腫瘤細(xì)胞的規(guī)模更大而且更傾向于遷移。而這一過程是通過鈣存儲(chǔ)通道（SOCE）調(diào)控鈣釋放激活鈣調(diào)因子1（Orai1）和基質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)分子1（STIM1）的表達(dá)實(shí)現(xiàn)的。3、驗(yàn)證鈣通道阻滯劑三磷酸肌醇受體拮抗劑（2-APB）阻止了由FGF2引起的腫瘤細(xì)胞的遷移作用。方法:1.收集惡性脈絡(luò)膜黑色素瘤病人的一般情況以及腫瘤組織（原位癌組織和肝肺轉(zhuǎn)移癌組織）等的臨床資料。HE切片染色和免疫組化檢測(cè)FGF2在腫瘤中的表達(dá),并分析FGF2水平和臨床病理類型等參數(shù)的關(guān)系。同時(shí)對(duì)比在樣本中Orai1和STIM1蛋白的表達(dá)情況。2.將MUM2B細(xì)胞分為三組,腫瘤細(xì)胞組（對(duì)照組）、腫瘤細(xì)胞+FGF2組（FGF2組）、腫瘤細(xì)胞+FGF2+2-APB組（FGF2/2-APB組）,用Fluo3-AM作為鈣離子指示劑染色細(xì)胞內(nèi)的鈣離子,然后再用流式細(xì)胞儀檢測(cè)三組中鈣離子的含量。3.采用Western-Blot方法測(cè)定對(duì)照組、FGF2組、FGF2/2-APB組中的O... 

【文章來(lái)源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁(yè)數(shù)】：96 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

FGF2在人脈絡(luò)膜黑色素瘤組織中的表達(dá)

圖 2 FGF2 對(duì)細(xì)胞內(nèi) Ca2+濃度的影響及鈣通道調(diào)控蛋白的表達(dá)(A)FGF2 刺激升高細(xì)胞內(nèi)濃度，2-APB 逆轉(zhuǎn)這種效應(yīng)(左)；(B)FGF2 刺激增加 MUM2B 細(xì)胞 STIM1 和 ORAI1 的表達(dá)2-APB 逆轉(zhuǎn)這種效應(yīng)(左)。STIM1 和 ORAI1 與β-actin 蛋白的相對(duì)表達(dá)量比較(右)(*P<0.05+FGF2 組的細(xì)胞和對(duì)照組比較；FGF2/2-APB 處理組的細(xì)胞和 FGF2 組的細(xì)胞比較**P<0.05Figure 2 The effect of FGF2 on intracellular Ca2+concentration and expression of store-operated calciuentry-regulated proteins. (A) FGF2 stimulation elevated intracellular calcium concentration, and 2-APreversed this effect (left); (B) FGF2 stimulation increased the expression of STIM1 and ORAI1 of MUMcells, and 2-APB reversed this effect (left). Relative amounts of protein expression of STIM1 and ORAcompared with -actin (right) (*P<0.05 between FGF2-treated cells and the control cells, **P<0.05 betweFGF2/2-APB-treated cells and the FGF2-treated cells).2.3 FGF2 加速了 MUM2B 細(xì)胞創(chuàng)傷愈合

圖 3 2-APB 阻止了如下作用：由 FGF2 引起的 MUM2B 細(xì)胞水平和垂直遷移的增力的降低。（A）創(chuàng)傷愈合試驗(yàn)在 0, 12 和 24 小時(shí)的圖像（100r）（左）。在創(chuàng)傷愈不同時(shí)間的遷移距離(右)；(B)對(duì)侵入 Boyden 室的細(xì)胞進(jìn)行染色(200r)(左)。在 5 個(gè)計(jì)數(shù)侵襲細(xì)胞數(shù)(右)；(C)在 5 倍高倍鏡區(qū)域計(jì)數(shù)結(jié)合細(xì)胞數(shù)(200r)(*P<0.05，在 FG和 control 組之間比較，**P<0.05FGF2/2-APB 細(xì)胞組和 FGF2 細(xì)胞組之間比較)Figure 3 2-APB impairs increased horizontal and vertical migration and decreased MUM2BcellscausedbyFGF2.(A)Imagesofwoundhealingassayat0,12, and 24 h (Migration distances at different times in the wound healing assay (right); (B) Celthrough the Boyden chamber were stained (200r) (left). The numbers of invadingcounted in five predetermined fields (right); (C) The numbers of bound cells werefive high magnification (200r) fields (*P<0.05 between FGF2-treated cells and the c**P<0.05betweenFGF2/2-APB-treatedcellsandthe FGF2-treatedcells).

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：2900355