發(fā)布時間：2018-12-25 13:51

【摘要】：鼓室硬化(tympanosclerosis)是長期中耳炎癥消退后所遺留的中耳結(jié)締組織退行性病變,多表現(xiàn)為進行性聽力減退,病程較長,可伴有耳鳴等其他癥狀,純音測聽檢查多呈傳導(dǎo)性聾。其病因至今尚不明確,一般認為鼓室硬化常伴隨中耳疾病如急性中耳炎、慢性中耳炎、化膿性中耳炎和滲出性中耳炎等的反復(fù)感染而發(fā)生發(fā)展,而肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌等是中耳炎癥疾病常見的致病菌。近年來,對器官硬化發(fā)生機制的研究表明,盡管各組織和器官硬化的發(fā)生機制有所差異,卻有著共同的特征：以各種原因(炎癥、免疫、缺血及血流動力學(xué)改變等)引起實質(zhì)細胞損傷為起點,最終引起細胞外基質(zhì)過度沉積和器官組織結(jié)構(gòu)重建。轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGFβ1)作為多效生長因子超家族的一員,能夠正常調(diào)節(jié)細胞增殖分化、細胞外基質(zhì)代謝及免疫應(yīng)答等。有文獻報道認為,TGFP1在分泌性中耳炎中既發(fā)揮了免疫抑制作用,又能通過減低細菌誘導(dǎo)的黏蛋白分泌來降低機體天然免疫功能,誘導(dǎo)炎癥繼續(xù)發(fā)展。另外,TGFβ1是已知重要的促纖維化因子之一,并有研究證明在許多組織和器官(如肝、腎及肺)纖維化形成中均有明顯的表達�；�質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)是降解細胞外基質(zhì)成分的主要酶系。而MMP-9作為該家族的一員,即能直接降解細胞外基質(zhì)成分又能降解4型膠原纖維。土耳其學(xué)者Ozcan等應(yīng)用基質(zhì)金屬蛋白酶拮抗藥物對鼓室硬化發(fā)展進行干預(yù)后發(fā)現(xiàn)硬化程度有所減輕。既往研究表明,在肝纖維化早期,MMP-2和MMP-9活性升高能降解過度沉積細胞外基質(zhì),破壞基底膜正常結(jié)構(gòu),啟動了纖維化的發(fā)生；在肝纖維化后期,二者的持續(xù)升高又進一步促進正�；�質(zhì)成分降解,破壞正常組織結(jié)構(gòu),導(dǎo)致結(jié)構(gòu)重塑,最終形成惡性循環(huán),共同促進了纖維化進程。另有研究報道,多種炎癥細胞因子及生長因子(如TGFβ1, PDGF)均可誘導(dǎo)MMPs的表達,而TGFβ1又能通過抑制基質(zhì)金屬蛋白酶合成和促進金屬蛋白酶組織抑制劑表達來減少細胞外基質(zhì)的降解。大量學(xué)者通過對各種炎癥和纖維化疾病中轉(zhuǎn)化生長因子β和基質(zhì)金屬蛋白酶的表達研究中提出,對二者的針對性靶治療可能是治療和預(yù)防疾病發(fā)生發(fā)展的新方向。鼓室硬化的形成與不斷發(fā)展不同程度得影響到患者的正常交流,進而降低患者生活、學(xué)習(xí)及工作質(zhì)量,甚至對心理造成一定的影響,而至今尚無有效的藥物來治療和預(yù)防鼓室硬化癥；手術(shù)目前是治療鼓室硬化的主要治療措施,但術(shù)前硬化程度和聽骨鏈破壞程度等都會影響術(shù)后的聽力恢復(fù)。因此,本實驗?zāi)康氖峭ㄟ^建立鼓室硬化動物模型來研究轉(zhuǎn)化生長因子β1及基質(zhì)金屬蛋白酶9在鼓室硬化發(fā)展中的表達,并探討二者在鼓室硬化發(fā)生發(fā)展過程中可能發(fā)揮的作用機制,并為臨床實驗研究及臨床尋找新的治療與預(yù)防措施具有一定的指導(dǎo)意義。 目的探討轉(zhuǎn)化生長因子β1和基質(zhì)金屬蛋白酶-9在鼓室硬化中的表達及其在鼓室硬化形成發(fā)展中可能的病理作用機制。方法選取70只健康成年雄性豚鼠(300-350g),并隨機分為空白對照組(n=10只)和實驗組(n=60只)。應(yīng)用鼓膜穿刺術(shù)向?qū)嶒灲M60只豚鼠右耳鼓室內(nèi)均注入活性3型肺炎鏈球菌菌懸液(3×108CFU/ml,100ul)并按照6個不同試驗點再隨機分為6個亞組,包括1周、2周、3周、4周、6周及8周。通過耳鏡觀察鼓膜鈣化形成及應(yīng)用HE和Von Kossa染色觀察鼓室硬化組織形態(tài)學(xué)改變及鈣質(zhì)形成特點來評估實驗性鼓室硬化模型構(gòu)建情況。利用免疫組織化學(xué)法及Western blot法來檢測TGFβ1和MMP-9在鼓室硬化中的表達及表達變化規(guī)律。結(jié)果耳鏡觀察發(fā)現(xiàn),鼓膜從第二周開始出現(xiàn)輕微的鈣化改變,到第六周鼓膜出現(xiàn)明顯的鈣化形成。HE染色及Von Kossa特殊染色發(fā)現(xiàn)在第六周實驗動物鼓膜及中耳黏膜組織中均出現(xiàn)明顯的鼓室硬化病理學(xué)特征表現(xiàn)及鈣質(zhì)沉積。免疫組織化學(xué)顯示TGFβ1及MMP-9在第六周實驗動物鼓膜和中耳黏膜組織中均有明顯表達,且均主要表達于成纖維細胞及炎性細胞胞質(zhì)內(nèi)。Western blot法檢測發(fā)現(xiàn),TGFβ1蛋白表達呈遞增趨勢,且與對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；MMP-9蛋白表達呈先遞后減趨勢,且在第四周時表達量最高,而后表達相對減少,但與對照組相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論TGFβ1與MMP-9在實驗性鼓室硬化中均有明顯表達,且其蛋白表達在鼓室硬化形成過程中均呈一定趨勢性改變,提示二者即參與了鼓室硬化的發(fā)生發(fā)展又可能在鼓室硬化形成的病理發(fā)生機制中起重要作用,同時也對鼓室硬化病理機制研究及鼓室硬化臨床治療與預(yù)防的研究有一定的指導(dǎo)性意義。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R764.29

【參考文獻】

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本文編號：2391214