發(fā)布時(shí)間：2024-07-04 23:50

　　脊髓損傷為脊柱外科較為嚴(yán)重的疾病之一,多因物理損傷導(dǎo)致,患者傷后常出現(xiàn)損傷部位以遠(yuǎn)的肢體感覺、運(yùn)動(dòng),甚至二便功能障礙。脊髓損傷可分為不完全性或完全性神經(jīng)損傷,依據(jù)損傷的類型和輕重程度,神經(jīng)功能恢復(fù)所需時(shí)間長短不一。因神經(jīng)損傷后難以自行修復(fù),所以損傷嚴(yán)重者往往終生殘留肢體功能障礙。這不僅降低了患者自身的生活質(zhì)量,而且護(hù)理和治療相關(guān)費(fèi)用也給患者家庭帶來較大的經(jīng)濟(jì)壓力。目前脊髓損傷的發(fā)病率在逐漸升高,關(guān)于脊髓損傷后的神經(jīng)修復(fù)和再生已成為所有研究人員面臨的嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。伴隨現(xiàn)代生物技術(shù)的日新月異,人們逐漸認(rèn)識到神經(jīng)細(xì)胞可通過干細(xì)胞的移植而再生,使損傷的神經(jīng)功能得到修復(fù)。神經(jīng)干細(xì)胞是干細(xì)胞成員之一,具有增殖、自我更新和分化為多種神經(jīng)組織細(xì)胞的特點(diǎn)。神經(jīng)干細(xì)胞可分為內(nèi)源性和外源性神經(jīng)干細(xì)胞。內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞在成體中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)數(shù)量較少,再生能力較低,依靠刺激內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞,不足以補(bǔ)償損失的神經(jīng)細(xì)胞與組織,目前通過神經(jīng)干細(xì)胞移植來補(bǔ)償神經(jīng)細(xì)胞與組織的缺失已經(jīng)成為脊髓損傷的治療方法之一。但是,神經(jīng)干細(xì)胞在不斷受到學(xué)術(shù)界關(guān)注的同時(shí),也面臨著諸多問題。如干細(xì)胞移植治療的安全性問題(致瘤性)以及干細(xì)胞移植后分...

【文章頁數(shù)】：89 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分 :基于基因芯片及實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證選取目的microRNA
    1 前言
    2 實(shí)驗(yàn)材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞、主要試劑和儀器
            2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.2 CCK-8 法繪制細(xì)胞生長曲線
            2.2.3 神經(jīng)干細(xì)胞分化培養(yǎng)
            2.2.4 提取細(xì)胞RNA
            2.2.5 microRNA RT-qPCR檢測
            2.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 神經(jīng)干細(xì)胞的培養(yǎng)與分化
        3.2 神經(jīng)干細(xì)胞的生長曲線
        3.3 大鼠神經(jīng)干細(xì)胞與神經(jīng)元中microRNA的差異表達(dá)
        3.4 miR-329 的莖環(huán)結(jié)構(gòu)與miR-329-3p堿基序列
        3.5 miR-329-3p在神經(jīng)干細(xì)胞分化過程中的表達(dá)變化
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 :miR-329-3p調(diào)控NSCs增殖與分化的實(shí)驗(yàn)研究
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞、主要試劑和儀器
            2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.2 CCK-8 法繪制細(xì)胞生長曲線
            2.2.3 神經(jīng)干細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            2.2.4 提取細(xì)胞RNA
            2.2.5 神經(jīng)干細(xì)胞轉(zhuǎn)染后相關(guān)基因RT-qPCR檢測
            2.2.6 CCK-8 法檢測細(xì)胞增殖
            2.2.7 EdU法檢測細(xì)胞增殖
            2.2.8 熒光素酶實(shí)驗(yàn)
            2.2.9 Western blot檢測相關(guān)蛋白表達(dá)
            2.2.10 免疫熒光檢測
            2.2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 檢測miR-329-3p mimic于神經(jīng)干細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)染情況
            3.1.1 轉(zhuǎn)染效率檢測
            3.1.2 RT-qPCR法檢測神經(jīng)干細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-329-3p mimic后 miR-329-3p表達(dá)情況
        3.2 miR-329-3p調(diào)節(jié)神經(jīng)干細(xì)胞增殖的功能研究
            3.2.1 miR-329-3p過表達(dá)抑制了神經(jīng)干細(xì)胞的增殖
            3.2.2 通過生物信息學(xué)預(yù)測E2F1是miR-329-3p的一個(gè)作用靶點(diǎn)
            3.2.3 熒光素酶實(shí)驗(yàn)檢測miR-329-3p靶向調(diào)控E2F
            3.2.4 miR-329-3p在神經(jīng)干細(xì)胞內(nèi)靶向調(diào)控E2F1 的表達(dá)
            3.2.5 干擾E2F1 抑制神經(jīng)干細(xì)胞增殖
        3.3 miR-329-3p調(diào)節(jié)神經(jīng)干細(xì)胞分化的功能研究
            3.3.1 miR-329-3p過表達(dá)促進(jìn)了神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元的分化
            3.3.2 E2F1 在神經(jīng)干細(xì)胞分化過程中的表達(dá)變化
            3.3.3 miR-329-3p靶向E2F1 調(diào)控神經(jīng)干細(xì)胞的分化
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性自我評價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡歷



本文編號：4000714