目的構建表達于噬菌體表面的隨機環(huán)八肽庫。方法通過自行設計,人工合成編碼隨機環(huán)八肽的寡核苷酸片段,通過延伸引物擴增獲得編碼隨機環(huán)八肽的基因片段。將編碼基因片段和M13KE噬菌體載體經(jīng)過EagⅠ和KpnⅠ限制性內(nèi)切酶雙酶切后進行連接,重組產(chǎn)物電轉入大腸桿菌ER2738感受態(tài)細胞獲得噬菌體展示隨機環(huán)八肽庫,噬斑及測序檢測庫容和多樣性。結果構建的環(huán)八肽庫庫容超過7.5×109,重組陽性率為92.5%,不同率為97.3%。結論成功構建了庫容量與多樣性都滿足篩選要求的噬菌體展示隨機環(huán)八肽庫。

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圖１肽庫挑克隆測序部分結果

２μＬ收獲的隨機環(huán)八肽庫，按１０倍比梯度稀釋，分別取１０５～１０９倍比稀釋物各１０μＬ加至４５℃水浴中保溫的含頂層瓊脂糖和ＥＲ２７３８的測試管中，混勻后分別鋪于ＬＢ／ＩＰＴＧ／Ｘｇａｌ培養(yǎng)板，待頂層瓊脂糖凝固后，３７℃倒置培養(yǎng)過夜。進行藍斑計數(shù)，依據(jù)藍斑數(shù)和稀釋倍數(shù)計算庫容量。２....

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