發(fā)布時間：2020-11-15 02:05

　　 目的探討存活蛋白(survivin)對人腦膠質(zhì)瘤細胞替莫唑胺(TMZ)敏感性的影響及其可能機制。方法構(gòu)建過表達survivin的U87/sur膠質(zhì)瘤細胞,以及抑制survivin表達的U87/sur si膠質(zhì)瘤細胞,經(jīng)100μmol/L TMZ處理后,采用MTT法檢測細胞增殖情況,克隆形成實驗檢測細胞的克隆形成能力,異硫氰酸熒光素標記的膜聯(lián)素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)雙標記聯(lián)合流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡情況,Western blotting檢測活化caspase-3表達水平。結(jié)果經(jīng)TMZ處理后,與親代細胞相比,U87/sur si細胞的增殖活性明顯下降,克隆形成率明顯降低,凋亡率明顯增加,而U87/sur細胞的增殖活性明顯增強,克隆形成率明顯增高,凋亡率明顯下降。經(jīng)TMZ處理后,與親代細胞相比,U87/sur si細胞中活化的caspase-3蛋白水平升高,而U87/sur細胞中活化的caspase-3蛋白水平下降。結(jié)論抑制survivin可明顯提高膠質(zhì)瘤細胞對TMZ的敏感性,其機制可能與survivin促進細胞凋亡有關(guān)。
【部分圖文】：

氧化物酶標記的山羊抗兔IgG(1:8000)，室溫孵育1h；TBST漂洗，ECL曝光定影。用BandScan4.3軟件對各條段灰度值進行測定分析。1.7統(tǒng)計學處理采用SPSS14.0軟件行統(tǒng)計學分析。計量資料以x±s表示，組間比較采用方差分析，進一步兩兩比較采用LSD-t檢驗；計數(shù)資料以率表示，組間比較采用SNK-q檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。2結(jié)果2.1不同轉(zhuǎn)染方法對U87細胞中survivin表達水平的影響穩(wěn)定轉(zhuǎn)染干擾載體的U87/sursi細胞中survivin表達明顯降低(P<0.01)，而穩(wěn)定轉(zhuǎn)染survivin的U87/sur細胞中survivin表達明顯升高(P<0.01，圖1)。圖1各組細胞survivin表達水平(Westernblotting)Fig.1Expressionofsurvivinineachgroupofcells(Westernblotting)(1)P<0.01comparedwithcontrolgroup2.2不同穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞的生長曲線TMZ處理后，與親代U87細胞相比，上調(diào)surivivn表達的U87/sur細胞增殖活性明顯增強(P<0.01)，而下調(diào)survivin表達的U87/sursi細胞增殖活性明顯降低(P<0.01，圖2)。2.3不同穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞的克隆形成能力經(jīng)100μmol/LTMZ處理后，與親代U87細胞相比，U87/sursi細胞克隆數(shù)明顯減少(P<0.01)，而U87/sur細胞克隆數(shù)明顯增多(P<0.01，圖3)。2.4不同穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞的凋亡水平經(jīng)TMZ處理后，與親代U87細胞相比，U87/sursi細胞凋亡明顯增多(P<0.01)，而U87/sur細胞凋亡明顯減少(P<0.01，圖4)。SurvivinGAPDHSursiCtrlCtrlSur200150100500Coonlyorfinmgfficeeicny%)(SursiCtrlCtrlSur(1)(1)

MedJChinPLA,Vol.42,No.10,October1,2017889圖2各組U87細胞生長曲線Fig.2GrowthcurveofU87cellsineachgroup(1)P<0.01comparedwithTMZgroup圖3各組U87細胞克隆形成率Fig.3ColonyformingrateofU87cellsineachgroup(1)P<0.01comparedwithTMZgroup2.5不同穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞的活化caspase-3表達水平Westernblotting檢測結(jié)果顯示，經(jīng)TMZ處理后，與親代U87細胞相比，U87/sursi細胞中活化caspase-3蛋白表達水平明顯增加(P<0.01)，而U87/sur細胞中活化caspase-3表達水平明顯降低(P<0.01，圖5)。3討論膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的原發(fā)腫瘤，約占顱內(nèi)腫瘤的35%，具有極強的侵襲性及較高的致圖4各組U87細胞凋亡水平Fig.4ApoptosisrateofU87cellsineachgroup(1)P<0.01comparedwithTMZgroup圖5各組U87細胞活化caspase-3表達水平(Westernblotting)Fig.5Expressionofactivatedcaspase-3ofU87cellsineachgroup(Westernblotting)(1)P<0.01comparedwithTMZgroup死率。膠質(zhì)母細胞瘤占膠質(zhì)瘤的55%，即使經(jīng)過手術(shù)、放療及化療，其預(yù)后依然不容樂觀，患者的中位生存時間僅為12~15個月，是5年存活率較低的腫瘤之一[10-12]。膠質(zhì)瘤患者術(shù)后進行TMZ同步及輔助化療是其標準治療方案，可顯著提高生存期[13]。但是耐藥性的產(chǎn)生降低了TMZ的療效，而膠質(zhì)瘤細胞如何獲得對TMZ的耐藥性尚未完全明了，嚴重影響了膠質(zhì)瘤的治療效果，因此研究膠質(zhì)瘤細胞對TMZ耐藥的機制具有重要的臨床意義。既往研究提示凋亡在腫瘤的發(fā)生及治療中具有重要作用[14-15]，化療或放療導(dǎo)致的腫瘤細胞死亡主要是通過激活細胞凋亡實現(xiàn)的，因此凋亡抗性是腫瘤細胞化療耐藥的一個重要機制[16-18]。Survivin具有多種功能，在細胞的關(guān)鍵進程中發(fā)揮重要作用，如凋亡、細?

MedJChinPLA,Vol.42,No.10,October1,2017889圖2各組U87細胞生長曲線Fig.2GrowthcurveofU87cellsineachgroup(1)P<0.01comparedwithTMZgroup圖3各組U87細胞克隆形成率Fig.3ColonyformingrateofU87cellsineachgroup(1)P<0.01comparedwithTMZgroup2.5不同穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞的活化caspase-3表達水平Westernblotting檢測結(jié)果顯示，經(jīng)TMZ處理后，與親代U87細胞相比，U87/sursi細胞中活化caspase-3蛋白表達水平明顯增加(P<0.01)，而U87/sur細胞中活化caspase-3表達水平明顯降低(P<0.01，圖5)。3討論膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的原發(fā)腫瘤，約占顱內(nèi)腫瘤的35%，具有極強的侵襲性及較高的致圖4各組U87細胞凋亡水平Fig.4ApoptosisrateofU87cellsineachgroup(1)P<0.01comparedwithTMZgroup圖5各組U87細胞活化caspase-3表達水平(Westernblotting)Fig.5Expressionofactivatedcaspase-3ofU87cellsineachgroup(Westernblotting)(1)P<0.01comparedwithTMZgroup死率。膠質(zhì)母細胞瘤占膠質(zhì)瘤的55%，即使經(jīng)過手術(shù)、放療及化療，其預(yù)后依然不容樂觀，患者的中位生存時間僅為12~15個月，是5年存活率較低的腫瘤之一[10-12]。膠質(zhì)瘤患者術(shù)后進行TMZ同步及輔助化療是其標準治療方案，可顯著提高生存期[13]。但是耐藥性的產(chǎn)生降低了TMZ的療效，而膠質(zhì)瘤細胞如何獲得對TMZ的耐藥性尚未完全明了，嚴重影響了膠質(zhì)瘤的治療效果，因此研究膠質(zhì)瘤細胞對TMZ耐藥的機制具有重要的臨床意義。既往研究提示凋亡在腫瘤的發(fā)生及治療中具有重要作用[14-15]，化療或放療導(dǎo)致的腫瘤細胞死亡主要是通過激活細胞凋亡實現(xiàn)的，因此凋亡抗性是腫瘤細胞化療耐藥的一個重要機制[16-18]。Survivin具有多種功能，在細胞的關(guān)鍵進程中發(fā)揮重要作用，如凋亡、細?
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