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難治性癲癇患兒血清中GADA及GM1-A的表達及意義

發(fā)布時間:2020-11-15 02:02
   目的研究兒童難治性癲癇(refractory epilepsy,RE)血清中谷氨酸脫羧酶抗體(glutamic acid decarboxylase antibody,GADA)及神經(jīng)節(jié)苷脂抗體(antibodies to GM1 ganglioside,GM1-A)的表達及水平,分析兒童RE的免疫學發(fā)病機制與上述兩種自身血清抗體的相關(guān)性,從而為臨床診斷及治療與免疫有關(guān)的RE提供新的思路及科學依據(jù)。方法本研究共分為兩組,即難治性癲癇組(RE組)及藥物可控性癲癇組(Controlled epilepsy group,CE組),每組45例。選取2015年11月至2016年11月唐山市婦幼保健院小兒神經(jīng)內(nèi)科的住院及門診隨訪登記的癲癇患兒300例,根據(jù)納入排除標準篩選出206例癲癇患兒,其中難治性癲癇患兒45例,藥物可控性癲癇患兒161例。把45例難治性癲癇患兒作為病例組(RE組),隨機選取45例藥物可控性癲癇患兒作為對照組(CE組)進行研究分析。所有入組患兒的癲癇、癲癇綜合征的定義標準及癲癇的發(fā)作分類標準均符合國際抗癲癇聯(lián)盟(International League Against epilepsy,ILAE)指南制定的標準。同時根據(jù)小兒本身的年齡特點及我國制定的兒童RE的定義標準,入組患兒同時符合國內(nèi)制定的兒童RE的定義標準。然后分別記錄每一個入組患兒的性別、年齡、發(fā)病年齡、癲癇的臨床發(fā)作類型、每月發(fā)作次數(shù)、實驗室檢查結(jié)果等。采集每個入組患兒的晨起空腹血,放入離心機離心血清,然后用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)檢測RE組及CE組患兒的血清GADA和GM1-A的數(shù)值。采用SPSS17.0統(tǒng)計學軟件對實驗結(jié)果進行分析,對于計量資料以均數(shù)±標準差((?)±s)表示,兩組間比較采用獨立樣本t檢驗;兩組間率的比較采用c2檢驗;同時采用正態(tài)性檢驗各變量是否符合正態(tài)分布,對于計量資料不符合正態(tài)分布的采用非參數(shù)秩和檢驗;利用ROC(receiver operating characteristic,ROC)曲線分析法判斷血清GADA及GM1-A對兒童RE的診斷性能;繪制出ROC曲線并計算ROC曲線下面積。結(jié)果以α=0.05為檢驗水準。結(jié)果1 GADA及GM1-A在RE組及CE組均有表達,并且這兩種抗體在RE組中的表達水平均顯著高于CE組,差異具有統(tǒng)計學意義。2 GADA及GM1-A的表達水平與兒童難治性癲癇的發(fā)生具有相關(guān)性,當GADA的表達水平高于中位數(shù)濃度0.96mmol/L時,其發(fā)生難治性癲癇的危險性為16.188;當GM1-A的表達水平高于中位數(shù)濃度4.84ng/ml時,其發(fā)生難治性癲癇的危險性是5.451。3 GADA及GM1-A的ROC曲線下面積AUC(area under curve,AUC)分別為0.847、0.759,并且GADA的95%可信區(qū)間(CI)為0.767-0.928,GM1-A的95%可信區(qū)間(CI)為0.660-0.857,均大于0.5,表明兩種抗體對兒童RE具有一定得診斷價值。4由ROC曲線分析出GADA及GM1-A最佳截點濃度值分別為0.96mmol/L、4.36ng/ml,也是兩種抗體診斷RE的靈敏度和特異度同時達到最大時所對應(yīng)的濃度值。進一步繪制出兩種抗體聯(lián)合的ROC曲線,得出的AUCROC為0.878,分別大于GADA及GM1-A的AUCROC,說明聯(lián)合兩種抗體對RE的診斷價值大于單獨一種抗體。結(jié)論1兒童RE多伴有自身免疫功能紊亂,血清中可檢測到與癲癇難以控制有關(guān)的GADA及GM1-A抗體。2 GADA及GM1-A與RE發(fā)生有關(guān),當兩種抗體的表達大于中位數(shù)濃度時,其發(fā)生RE的危險性增加。3聯(lián)合檢測GADA及GM1-A血清滴度水平對于診斷、治療及預(yù)后判斷兒童RE具有指導(dǎo)作用。
【學位單位】:華北理工大學
【學位級別】:碩士
【學位年份】:2017
【中圖分類】:R742.1
【部分圖文】:

曲線圖,曲線圖,標準品,溫育


7°恒溫箱溫育 60min;復(fù)洗板 5 次,方法:取出溫育后的酶標板,迅速甩去孔中液,然后在每孔中把洗滌液加滿并靜置 1min 后甩去,在吸水板 5 次后,加底物 A 和底物 B 各 50ul 于每孔中,錫紙避光箱孵育 15min;后分別于每孔中加入終止反應(yīng)液 50ul,加完后在 15min 內(nèi)儀并設(shè)置波長為 450nm 測定各個樣品和標準品的 OD 值。計算方法測出的各個標準品濃度對應(yīng)的 OD 值,在 EXCLE 工作表中標準品濃度,Y 軸上為標準品對應(yīng)的 OD 值,首先繪制出標并得出曲線的回歸方程式(見圖 1、圖 2),然后將各個樣,計算出樣品濃度,再乘以原來的稀釋倍數(shù),得出樣品的實

曲線圖,曲線圖,標準品,回歸方程式


測出的各個標準品濃度對應(yīng)的 OD 值,在 EXCLE 工作表中標準品濃度,Y 軸上為標準品對應(yīng)的 OD 值,首先繪制出標并得出曲線的回歸方程式(見圖 1、圖 2),然后將各個樣,計算出樣品濃度,再乘以原來的稀釋倍數(shù),得出樣品的實圖 1 GADA 的標準品曲線圖Fig.1 Standard curve of GADA

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華北理工大學碩士學位論文具有統(tǒng)計學意義(P<0.001),(見表 7、見圖 3),說明 GADA 組患兒中均有表達,但在 RE 組中表達水平較 CE 組明顯升高。表 7 GADA 在 RE 組和 CE 組的濃度比較(mmol/L)Table7 Comparison of the concentrations of the GADA in RE and CE groups百分位數(shù)最大值 最小值 Z 值 P25P50P751.01 2.20 3.24 11.61 0.01-5.311 0.29 0.58 0.88 3.5 0.01
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