發(fā)布時(shí)間：2020-06-10 13:30

【摘要】：目的:為給急性腦梗死患者個(gè)體化治療提供更多的參考和依據(jù),本課題選取血小板活化標(biāo)志物CD62P、PAC-1及NIHSS評分作為主要評價(jià)指標(biāo),分析不同P2Y12和CYP2C19基因型患者應(yīng)用氯吡格雷后的指標(biāo)差異,探討急性腦梗死患者P2Y12和CYP2C19基因多態(tài)性對氯吡格雷抗血小板作用及臨床療效的影響。方法:1.根據(jù)病例入選及排除標(biāo)準(zhǔn)選取商丘市第一人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科2016年12月至2017年11月之間收治的急性腦梗死患者111例作為研究對象。2.采用PCR-RFLP法對納入本研究的111例急性腦梗死患者進(jìn)行P2Y12和CYP2C19基因多態(tài)性檢測。根據(jù)P2Y12基因上G52T位點(diǎn)是否存在突變將入選患者分為G52T突變組和G52T非突變組,根據(jù)CYP2C19基因分型情況將入選患者分為快代謝組(CYP2C19*1/*1,EM組),中代謝組(CYP2C19*1/*2、CYP2C19*1/*3,IM組),慢代謝組(CYP2C19*2/*2、CYP2C19*2/*3和CYP2C19*3/*3,PM組)。3.利用流式細(xì)胞術(shù)檢測入選患者應(yīng)用氯吡格雷治療前、治療第7天和治療第14天血小板活化標(biāo)志物CD62P、PAC-1的陽性表達(dá)率,以陽性表達(dá)率表示其表達(dá)水平。4.利用美國國立衛(wèi)生研究院卒中量表(NIHSS)對入選患者應(yīng)用氯吡格雷治療前、治療第7天和治療第14天的神經(jīng)功能缺損程度進(jìn)行評分,評估各組急性腦梗死患者應(yīng)用氯吡格雷的臨床治療效果。5.采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,比較各組患者治療前后血小板活化標(biāo)志物CD62P、PAC-1表達(dá)水平及NIHSS評分的組內(nèi)差異和組間差異,評價(jià)急性腦梗死患者P2Y12和CYP2C19基因多態(tài)性與氯吡格雷抗血小板作用及臨床療效的相關(guān)性。結(jié)果:1.入選本研究的111例急性腦梗死患者中,G52T突變組患者36例,占比32.4%,G52T非突變組患者75例,占比67.6%;快代謝組患者42例,占比37.8%,中代謝組患者53例,占比47.7%,慢代謝組患者16例,占比14.5%。2.應(yīng)用氯吡格雷治療前,各組急性腦梗死患者血小板活化標(biāo)志物CD62P、PAC-1表達(dá)水平及NIHSS評分比較均無顯著差異(P0.05)。與應(yīng)用氯吡格雷治療前相比,應(yīng)用氯吡格雷治療第7天和治療第14天,G52T突變組、G52T非突變組、快代謝組和中代謝組血小板CD62P、PAC-1表達(dá)水平及NIHSS評分均顯著減少(P0.05),慢代謝組血小板CD62P、PAC-1表達(dá)水平雖然有降低趨勢,但無顯著差異(P0.05)。3.應(yīng)用氯吡格雷治療第7天、治療第14天,G52T突變組與G52T非突變組的血小板CD62P、PAC-1表達(dá)水平及NIHSS評分比較均無顯著差異(P0.05);慢代謝組和中代謝組血小板CD62P、PAC-1表達(dá)水平均顯著高于快代謝組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);慢代謝組的NIHSS評分均顯著高于快代謝組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.急性腦梗死患者CYP2C19基因多態(tài)性與氯吡格雷的抗血小板作用和臨床療效密切相關(guān),同等用藥情況下快代謝組患者應(yīng)用氯吡格雷后的抗血小板作用和臨床療效最好,中代謝組次之,慢代謝組患者相對較差,可根據(jù)患者CYP2C19基因型合理選擇氯吡格雷的使用。2.急性腦梗死患者P2Y12基因G52T位點(diǎn)多態(tài)性可能與氯吡格雷抗血小板作用無明顯相關(guān)性。
【圖文】：

圖 2.1 P2Y12 基因 PCR 反應(yīng)程序設(shè)置2.2 酶切反應(yīng)P2Y12 基因 G52T 位點(diǎn) PCR 產(chǎn)物的酶切反應(yīng)體系如表 2.3 所示，將混勻后置于 58℃恒溫水浴中酶切 4 h。表 2.3 P2Y12 基因 G52T 位點(diǎn) PCR 產(chǎn)物酶切反應(yīng)體系（30 μL）2.3 酶切產(chǎn)物電泳將酶切產(chǎn)物置于 3.0%的瓊脂糖凝膠中進(jìn)行電泳，，具體操作如下：1）用 10 μL 微量移液槍分別吸取 9 μL 的酶切產(chǎn)物和 1 μL 的 Load試劑 劑量PCR產(chǎn)物 15.0 μLBSAJ I內(nèi)切酶 1.5 μLCutSmart Buffer(10×) 3.0 μLddH2O 10.5 μL

⑤72℃終末延伸 5 min⑥4℃保存程序設(shè)置見圖 2.1。經(jīng)反復(fù)優(yōu)化后選擇降落 PCR 技術(shù)對 CYP2C19 基因外顯子 5 片段進(jìn)行特異性擴(kuò)增，反應(yīng)條件為：①95℃高溫預(yù)變性 5 min②94℃變性 30 s③58℃-50℃退火 30 s ×9（每個(gè)循環(huán)下降 1℃）④72℃延伸 30 s⑤95℃變性 30 s⑥50℃退火 30 s ×26⑦72℃延伸 30 s⑧72℃終末延伸 5 min⑨ 4℃保存程序設(shè)置見如圖 2.2 所示。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R743.3

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本文編號：2706358