背景:黑色素瘤是世界上最具侵襲性的惡性腫瘤之一。在過(guò)去的幾十年里,黑色素瘤的發(fā)病率一直在持續(xù)上升。腫瘤的早期診斷是非常重要的。因此,器官特異性生物標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)迫在眉睫,這有助于及早發(fā)現(xiàn)黑素瘤,準(zhǔn)確監(jiān)測(cè)疾病進(jìn)展并預(yù)測(cè)治療效果。血紅素氧合酶1(HO-1,32k Da)是一種重要的酶,它能催化血紅素降解為膽綠素、一氧化碳和鐵離子。許多人類(lèi)腫瘤中的HO-1的表達(dá)水平上升,尤其是乳腺癌、甲狀腺癌和口腔癌,通常與疾病分期和病人預(yù)后不良有關(guān)。HO-1促進(jìn)癌細(xì)胞增殖,抑制化學(xué)毒性物質(zhì)或紫外線照射引發(fā)的細(xì)胞凋亡。據(jù)報(bào)道,在細(xì)胞壓力反應(yīng)下HO-1轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核發(fā)揮獨(dú)立于酶活性的許多重要功能,特別是轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)。除了細(xì)胞定位影響HO-1的功能,異構(gòu)體的產(chǎn)生可能也是影響HO-1功能的一種重要途徑。在真核細(xì)胞中,內(nèi)含子的存在極大地增加了基因表達(dá)的復(fù)雜性,這使得一個(gè)基因可以產(chǎn)生各種各樣的蛋白質(zhì),這是通過(guò)一種叫做選擇性剪接的過(guò)程來(lái)實(shí)現(xiàn)的。大多數(shù)人類(lèi)基因轉(zhuǎn)錄本可以通過(guò)多種方式剪接而成。然而,HO-1的可變剪接體到目前為止還沒(méi)有被報(bào)道過(guò)。本文鑒定了HO-1基因的一種新型選擇性剪接形式,它是由移除3號(hào)外顯子產(chǎn)生的,我們將它命名...

【文章頁(yè)數(shù)】：72 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖2.1.HO-1基因擴(kuò)增及測(cè)序分析

用TBST溶液清洗PVDF膜2次，每次2分鐘，加入用一抗稀釋液稀釋好的抗體（稀釋比例為1：1000），放置在搖床上在0到4度低溫環(huán)境下緩慢搖晃過(guò)夜。回收一抗后，用TBST溶液清洗PVDF膜3次，每次7分鐘。將PVDF膜浸泡在5%的脫....

圖2.2.HO-1外顯子/內(nèi)含子剪接方式及相應(yīng)蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)

圖2.1中可以看出，以A375，F(xiàn)EK4，OSC-19和SCC-15的cDNA為底到的HO-1基因867bp的條帶，但同時(shí)發(fā)現(xiàn)以A375，OSC-19和SCC-15為底物擴(kuò)增的基因片段存在400bp大小的條帶，我們對(duì)該條帶進(jìn)行測(cè)序后條帶為37....

圖2.3.HO-1不同外顯子區(qū)域PCR擴(kuò)增結(jié)果

重慶大學(xué)碩士學(xué)位論文2新型可變剪接體14kDaHO-1的發(fā)現(xiàn)及鑒定修飾后導(dǎo)致HO-1編碼的蛋白質(zhì)失去了與Heme綁定的結(jié)構(gòu)域。推測(cè)14kDaHO-1具有獨(dú)立于HO-1酶活性的生物學(xué)功能。2.4.3HO-1不同外顯子區(qū)域基因PCR分析為進(jìn)一步從m....

圖2.4.Westernblotting檢測(cè)HO-1的表達(dá)

圖2.4.Westernblotting檢測(cè)HO-1的表達(dá)Fig2.4.DetectionofHO-1proteinbyWesternblotting從圖2.4中可以看出，在A375，OSC-19和SCC-15細(xì)胞中均可檢測(cè)到14kDaHO-....

本文編號(hào)：3997397