目的結節(jié)性硬化癥(TSC)是由兩種抑癌基因TSC1或TSC2的功能性失活突變導致哺乳動物雷帕霉素靶點復合物1(m TORC1)的活化所引起。而且TSC1/TSC2復合物失活導致的m TORC1過度活化能夠負反饋抑制AKT,這被認為是TSC多為良性腫瘤的主要原因之一。然而,這種負反饋調節(jié)的確切機制我們?nèi)匀徊皇呛芮宄?而我們的研究目的則是進一步闡明這種機制。方法在前期的研究工作中,我們通過基因芯片分析,發(fā)現(xiàn)與對照小鼠胚胎成纖維細胞(Tsc2+/+MEFs)相比,Tsc2缺失的小鼠胚胎成纖維細胞(Tsc2-/-MEFs)中血小板源性生長因子受體α(PDGFRɑ)的表達明顯下調。蛋白印記(WB)和實時定量PCR(q RT-PCR)進一步證實。并且雷帕霉素(rapamycin)處理或si Raptor干擾能夠恢復Tsc2-/-MEFs中的PDGFRα的表達。接著我們構建PDGFRα過表達的Tsc2-/-MEFs或Tsc1-/-MEFs以及PDGFRα敲低的Tsc2+/+MEFs或Tsc1+/+MEFs,CCK-8法和克隆形成實驗檢測細胞增殖和克隆形成能力。將PDGFRα過表達的Tsc2-/-MEF...

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【學位級別】：碩士

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英文縮略詞表(Abbreviation)
摘要
Abstract
1 引言
2 材料和方法
    2.1 材料
        2.1.1 儀器耗材
        2.1.2 細胞系、質粒載體和菌株
        2.1.3 實驗所需抗體、試劑
        2.1.4 使用引物序列及干擾RNA序列
        2.1.5 實驗動物
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細胞培養(yǎng)
        2.2.2 基因克隆及相關實驗
        2.2.3 細胞轉染
        2.2.4 病毒的獲得及穩(wěn)定轉染細胞系的建立
        2.2.5 熒光素酶報告基因實驗
        2.2.6 蛋白相關實驗
        2.2.7 細胞總RNA的提取
        2.2.8 cDNA第一鏈的合成
        2.2.9 實時熒光定量PCR（qRT-PCR）反應
        2.2.10 激光共聚焦
        2.2.11 細胞增殖實驗
        2.2.12 動物實驗
        2.2.13 免疫組織化學實驗
        2.2.14 統(tǒng)計分析
3 結果
    3.1 mTORC1負調控PDGFRα
    3.2 PDGFRα下調阻礙Tsc1或Tsc2缺陷細胞的增殖和腫瘤發(fā)生
    3.3 PDGFRα激活AKT
    3.4 mTORC1負調控FOXO3a
    3.5 mTORC1通過抑制FOXO3a下調PDGFRα/AKT信號通路
    3.6 在體內(nèi)和體外聯(lián)合使用雷帕霉素與AG1295抑制TSC1/TSC2復合物缺乏的細胞的生長
4 討論
5 結論
參考文獻
附錄
致謝
綜述
    參考文獻



本文編號：4057336