目的:本課題擬通過體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)研究雌激素和氧化應(yīng)激對小鼠成骨細(xì)胞凋亡、增殖和分化等生物學(xué)行為的影響,以及在此過程中過氧化物還原酶1型表達(dá)的情況;另外通過對小鼠MC3T3-E1前成骨細(xì)胞系進(jìn)行過氧化物還原酶1型基因的敲除和過表達(dá),研究該蛋白對成骨細(xì)胞凋亡、增殖和分化等生物學(xué)行為的影響;并對雌激素影響成骨細(xì)胞過氧化物還原酶1型表達(dá)的相關(guān)的信號通路進(jìn)行研究,進(jìn)一步探討雌激素和氧化應(yīng)激調(diào)控成骨細(xì)胞功能的具體作用機(jī)制。方法:1.本研究擬通過使用8周齡雌性小鼠,對其進(jìn)行卵巢摘除（OVX）手術(shù),制備雌激素缺乏骨質(zhì)疏松動(dòng)物模型。通過對小鼠脛骨石蠟切片進(jìn)行組織化學(xué)染色和免疫組織化學(xué)染色等方法,觀察雌激素缺乏后骨組織的病理學(xué)變化以及過氧化物還原酶的表達(dá)情況。另外采用體外培養(yǎng)的小鼠MC3T3-E1前成骨細(xì)胞系對體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。2.通過體外培養(yǎng)的小鼠MC3T3-E1前成骨細(xì)胞系,采用CCK8,堿性磷酸酶半定量測試,茜素紅S染色,天狼星紅染色,流式細(xì)胞技術(shù),實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western-blot蛋白電泳等方法,檢測氧化應(yīng)激對體外培養(yǎng)的MC3T3-E1細(xì)胞的凋亡、增殖和分化的影響,以及雌激素對此過程... 

【文章來源】：山東大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：170 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮略語表
第1章 前言
第2章 雌激素和氧化應(yīng)激對成骨細(xì)胞功能以及過氧化物還原酶1型表達(dá)的影響
    2.1 材料和方法
        2.1.1 主要試劑和儀器
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 雌激素缺乏導(dǎo)致小鼠脛骨近端骨小梁表現(xiàn)為骨質(zhì)疏松
        2.2.2 雌激素缺乏導(dǎo)致小鼠脛骨近端骨小梁骨改建活躍
        2.2.3 雌激素缺乏導(dǎo)致小鼠脛骨近端過氧化物還原酶表達(dá)增加
        2.2.4 小鼠MC3T3-E1前成骨細(xì)胞系的體外培養(yǎng)的形態(tài)及功能鑒定
        2.2.5 氧化應(yīng)激導(dǎo)致成骨細(xì)胞凋亡增加并降低細(xì)胞活力
        2.2.6 雌激素抑制氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞凋亡和PRX1表達(dá)的增加
        2.2.7 氧化應(yīng)激導(dǎo)致成骨細(xì)胞的分化功能降低以及雌激素的保護(hù)作用
    2.3 討論
        2.3.1 雌激素缺乏導(dǎo)致高轉(zhuǎn)化型骨質(zhì)疏松
        2.3.2 雌激素缺乏導(dǎo)致小鼠脛骨成骨細(xì)胞內(nèi)PRXs表達(dá)水平升高
        2.3.3 ROS促進(jìn)成骨細(xì)胞PRX1表達(dá)和凋亡并抑制分化
        2.3.4 雌激素通過降低PRX1表達(dá)抑制ROS誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞凋亡并促進(jìn)分化
    2.4 結(jié)論
第3章 過氧化物還原酶1型敲除和過表達(dá)細(xì)胞系的制備
    3.1 材料和方法
        3.1.1 主要試劑和儀器
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 MC3T3-E1細(xì)胞電轉(zhuǎn)條件檢測結(jié)果
        3.2.2 MC3T3-E1細(xì)胞藥篩濃度檢測及單克隆生長驗(yàn)證結(jié)果
        3.2.3 敲除靶位點(diǎn)設(shè)計(jì)及引物合成
        3.2.3 PRX1敲除載體構(gòu)建結(jié)果
        3.2.4 質(zhì)粒電轉(zhuǎn)后pool細(xì)胞的敲除效率檢測結(jié)果
        3.2.5 CRISPR/Cas9敲除結(jié)果分析
        3.2.6 PRX1過表達(dá)載體構(gòu)建結(jié)果
        3.2.7 PRX1敲除和過表達(dá)AMC3T3-E1細(xì)胞株P(guān)RX1表達(dá)檢測
    3.3 討論
    3.4 結(jié)論
第4章 過氧化物還原酶1型對成骨細(xì)胞凋亡、增殖和分化功能的影響
    4.1 材料和方法
        4.1.1 主要試劑和儀器
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 PRX1維持成骨細(xì)胞的增殖并促進(jìn)其凋亡
        4.2.2 雌激素抑制過氧化氫誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞凋亡
        4.2.3 PRX1抑制成骨細(xì)胞的分化功能
        4.2.4 雌激素逆轉(zhuǎn)過氧化氫誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞分化功能障礙
    4.3 討論
        4.3.1 PRX1抑制成骨細(xì)胞ROS水平并促進(jìn)其凋亡
        4.3.2 PRX1抑制成骨細(xì)胞分化功能
    4.4 結(jié)論
第5章 雌激素和氧化應(yīng)激通過過氧化物還原酶1型影響成骨細(xì)胞功能的信號通路研究
    5.1 材料和方法
        5.1.1 主要試劑和儀器
        5.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
    5.2 結(jié)果
        5.2.1 PRX1參與TRX、MAPK、AKT1、NF-κB信號通路的調(diào)節(jié)
        5.2.2 PRX1通過細(xì)胞色素C調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞凋亡
        5.2.3 PRX1通過硫氧還蛋白促進(jìn)細(xì)胞凋亡信號調(diào)節(jié)激酶1活化
        5.2.4 雌激素和氧化應(yīng)激通過PRX1-AKT1/NF-κB信號通路影響成骨細(xì)胞分化功能
    5.3 討論
        5.3.1 PRX1分別通過Cyto-c和ASK1途徑影響成骨細(xì)胞凋亡
        5.3.2 雌激素在氧化應(yīng)激環(huán)境下通過AKT1/PRX1/NF-κB途徑調(diào)控成骨細(xì)胞增殖和分化
    5.4 結(jié)論
第6章 全文結(jié)論
圖片附錄
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
學(xué)位論文評閱及答辯情況表
附錄


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]過氧化氫預(yù)處理對抗氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞凋亡(英文)[J]. 唐小卿,陳靜,唐二虎,馮鑒強(qiáng),陳培熹.  生理學(xué)報(bào). 2005(02)



本文編號：2908008