發(fā)布時間：2020-12-10 03:31

　　目的:本課題擬通過體內(nèi)和體外實驗研究雌激素和氧化應激對小鼠成骨細胞凋亡、增殖和分化等生物學行為的影響,以及在此過程中過氧化物還原酶1型表達的情況;另外通過對小鼠MC3T3-E1前成骨細胞系進行過氧化物還原酶1型基因的敲除和過表達,研究該蛋白對成骨細胞凋亡、增殖和分化等生物學行為的影響;并對雌激素影響成骨細胞過氧化物還原酶1型表達的相關的信號通路進行研究,進一步探討雌激素和氧化應激調(diào)控成骨細胞功能的具體作用機制。方法:1.本研究擬通過使用8周齡雌性小鼠,對其進行卵巢摘除（OVX）手術(shù),制備雌激素缺乏骨質(zhì)疏松動物模型。通過對小鼠脛骨石蠟切片進行組織化學染色和免疫組織化學染色等方法,觀察雌激素缺乏后骨組織的病理學變化以及過氧化物還原酶的表達情況。另外采用體外培養(yǎng)的小鼠MC3T3-E1前成骨細胞系對體內(nèi)實驗結(jié)果進行驗證。2.通過體外培養(yǎng)的小鼠MC3T3-E1前成骨細胞系,采用CCK8,堿性磷酸酶半定量測試,茜素紅S染色,天狼星紅染色,流式細胞技術(shù),實時熒光定量PCR和Western-blot蛋白電泳等方法,檢測氧化應激對體外培養(yǎng)的MC3T3-E1細胞的凋亡、增殖和分化的影響,以及雌激素對此過程... 

【文章來源】：山東大學山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：170 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮略語表
第1章 前言
第2章 雌激素和氧化應激對成骨細胞功能以及過氧化物還原酶1型表達的影響
    2.1 材料和方法
        2.1.1 主要試劑和儀器
        2.1.2 實驗方法
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 雌激素缺乏導致小鼠脛骨近端骨小梁表現(xiàn)為骨質(zhì)疏松
        2.2.2 雌激素缺乏導致小鼠脛骨近端骨小梁骨改建活躍
        2.2.3 雌激素缺乏導致小鼠脛骨近端過氧化物還原酶表達增加
        2.2.4 小鼠MC3T3-E1前成骨細胞系的體外培養(yǎng)的形態(tài)及功能鑒定
        2.2.5 氧化應激導致成骨細胞凋亡增加并降低細胞活力
        2.2.6 雌激素抑制氧化應激誘導的成骨細胞凋亡和PRX1表達的增加
        2.2.7 氧化應激導致成骨細胞的分化功能降低以及雌激素的保護作用
    2.3 討論
        2.3.1 雌激素缺乏導致高轉(zhuǎn)化型骨質(zhì)疏松
        2.3.2 雌激素缺乏導致小鼠脛骨成骨細胞內(nèi)PRXs表達水平升高
        2.3.3 ROS促進成骨細胞PRX1表達和凋亡并抑制分化
        2.3.4 雌激素通過降低PRX1表達抑制ROS誘導的成骨細胞凋亡并促進分化
    2.4 結(jié)論
第3章 過氧化物還原酶1型敲除和過表達細胞系的制備
    3.1 材料和方法
        3.1.1 主要試劑和儀器
        3.1.2 實驗方法
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 MC3T3-E1細胞電轉(zhuǎn)條件檢測結(jié)果
        3.2.2 MC3T3-E1細胞藥篩濃度檢測及單克隆生長驗證結(jié)果
        3.2.3 敲除靶位點設計及引物合成
        3.2.3 PRX1敲除載體構(gòu)建結(jié)果
        3.2.4 質(zhì)粒電轉(zhuǎn)后pool細胞的敲除效率檢測結(jié)果
        3.2.5 CRISPR/Cas9敲除結(jié)果分析
        3.2.6 PRX1過表達載體構(gòu)建結(jié)果
        3.2.7 PRX1敲除和過表達AMC3T3-E1細胞株PRX1表達檢測
    3.3 討論
    3.4 結(jié)論
第4章 過氧化物還原酶1型對成骨細胞凋亡、增殖和分化功能的影響
    4.1 材料和方法
        4.1.1 主要試劑和儀器
        4.1.2 實驗方法
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 PRX1維持成骨細胞的增殖并促進其凋亡
        4.2.2 雌激素抑制過氧化氫誘導的成骨細胞凋亡
        4.2.3 PRX1抑制成骨細胞的分化功能
        4.2.4 雌激素逆轉(zhuǎn)過氧化氫誘導的成骨細胞分化功能障礙
    4.3 討論
        4.3.1 PRX1抑制成骨細胞ROS水平并促進其凋亡
        4.3.2 PRX1抑制成骨細胞分化功能
    4.4 結(jié)論
第5章 雌激素和氧化應激通過過氧化物還原酶1型影響成骨細胞功能的信號通路研究
    5.1 材料和方法
        5.1.1 主要試劑和儀器
        5.1.2 實驗方法
    5.2 結(jié)果
        5.2.1 PRX1參與TRX、MAPK、AKT1、NF-κB信號通路的調(diào)節(jié)
        5.2.2 PRX1通過細胞色素C調(diào)節(jié)成骨細胞凋亡
        5.2.3 PRX1通過硫氧還蛋白促進細胞凋亡信號調(diào)節(jié)激酶1活化
        5.2.4 雌激素和氧化應激通過PRX1-AKT1/NF-κB信號通路影響成骨細胞分化功能
    5.3 討論
        5.3.1 PRX1分別通過Cyto-c和ASK1途徑影響成骨細胞凋亡
        5.3.2 雌激素在氧化應激環(huán)境下通過AKT1/PRX1/NF-κB途徑調(diào)控成骨細胞增殖和分化
    5.4 結(jié)論
第6章 全文結(jié)論
圖片附錄
參考文獻
綜述
    參考文獻
致謝
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學位論文評閱及答辯情況表
附錄


【參考文獻】：
期刊論文
[1]過氧化氫預處理對抗氧化應激誘導的PC12細胞凋亡(英文)[J]. 唐小卿,陳靜,唐二虎,馮鑒強,陳培熹.  生理學報. 2005(02)



本文編號：2908008