Wistar大鼠腦發(fā)育早期母體甲狀腺激素缺乏對后代腦發(fā)育影響及機制研究
發(fā)布時間：2020-12-10 01:36
目的:母體甲狀腺功能減退影響后代腦發(fā)育過程中神經(jīng)元的遷移、分化、樹突和軸突的生長,以及突觸形成和髓鞘形成。后代表現(xiàn)為智力發(fā)育不良,語言記憶能力下降,嚴重者出現(xiàn)呆小癥。上世紀六十年代,人們普遍認為甲狀腺激素（TH）不能夠通過胎盤,對甲狀腺激素影響腦發(fā)育的相關(guān)研究主要集中在出生后階段。隨著優(yōu)生優(yōu)育需求的提高,醫(yī)學(xué)篩查手段,生物分子技術(shù)的進展,發(fā)現(xiàn)胎兒在宮內(nèi)甲狀腺未發(fā)育完全且甲功未建立之前,腦組織中已經(jīng)有甲狀腺激素受體的表達且體內(nèi)能夠檢測到一定量的甲狀腺激素。這說明妊娠期間母體甲狀腺激素能夠通過胎盤屏障到達胎兒體內(nèi)。胎兒甲狀腺功能建立之前,母體甲狀腺激素的缺乏也能夠?qū)е绿撼錾笾橇ο陆�。哺乳動物腦發(fā)育按照一定的時間和空間次序進行,且甲狀腺激素的調(diào)節(jié)作用具有時間和空間特異性。即甲狀腺激素對不同組織和不同細胞存在不同的作用,而且對于同一組織或細胞在不同階段的調(diào)節(jié)作用也不盡相同。腦發(fā)育不同階段母體甲狀腺激素缺乏對后代神經(jīng)精神發(fā)育的影響是否存在差異仍不清楚。圍產(chǎn)期甲狀腺激素過量能夠?qū)е潞蟠纳窠?jīng)元分化加速。妊娠期間特異的應(yīng)激狀態(tài),容易發(fā)生妊娠一過性甲狀腺毒癥,研究發(fā)現(xiàn)妊娠一過性毒癥對妊娠結(jié)局有影響...
【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省
【文章頁數(shù)】：119 頁
【學(xué)位級別】：博士
【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分：腦發(fā)育不同階段母體甲狀腺激素缺乏對后代神經(jīng)精神發(fā)育影響的動物研究
1 前言
2 材料與方法
2.1 實驗材料
2.1.1 實驗動物
2.1.2 主要儀器設(shè)備
2.1.3 主要試劑
2.2 實驗方法
2.2.1 造模方法
2.2.2 母鼠眶后采血方法
2.2.3 仔鼠取腦過程
2.2.4 ELISA法測定母鼠甲功、仔鼠甲功和仔鼠腦組織中甲狀腺激素含
2.2.5 翻身校正反射（Righting reflex）
2.2.6 觸須引發(fā)的前肢放置試驗（Vibrissae-elicited forelimb placing test）
2.2.7 長時程增強（Long-term potentiation, LTP）
2.2.8 曠場實驗（Open field test）
2.2.9 高架十字迷宮（Elevated plus maze）
2.2.10 高架零迷宮（Elevated zero maze）
2.2.11 旋轉(zhuǎn)加速實驗（Rotarod test）
2.2.12 水迷宮（Morris water maze）
2.2.13 強迫游泳（Forced swimming test）
2.3 統(tǒng)計學(xué)處理
3 結(jié)果
3.1 造模情況
3.2 后代一般情況
3.3 后代PND10甲功
3.4 仔鼠PND5、10大腦皮層發(fā)育相關(guān)行為學(xué)實驗
3.5 仔鼠PND10長時程增強
3.6 成年仔鼠自主活動及焦慮行為相關(guān)行為學(xué)實驗
3.7 成年仔鼠抑郁相關(guān)行為學(xué)實驗
3.8 成年仔鼠運動及學(xué)習(xí)記憶相關(guān)行為學(xué)實驗
4 討論
5 結(jié)論
第二部分：腦發(fā)育第一階段母體甲狀腺激素異常對后代神經(jīng)精神發(fā)育影響的動物研究
1 前言
2 材料與方法
2.1 實驗材料
2.1.1 實驗動物
2.1.2 主要儀器設(shè)備
2.1.3 主要試劑
2.2 實驗方法
2.2.1 動物造模過程及處理時間點
2.2.2 甲功測定
2.2.3 水迷宮（Morris water maze）
2.2.4 條件恐懼實驗（Fear conditioning test）
2.2.5 長時程增強（Long-term potentiation）
2.2.6 鍍銀染色
2.2.7 實時定量PCR （Quantitative real-time PCR）
2.2.8 Western Blotting
2.3統(tǒng)計學(xué)處理
3 結(jié)果
3.1 造模情況
3.1.1 妊娠大鼠GD10天血清TT4和TSH水平
3.1.2 妊娠大鼠GD18天血清TT4和TSH水平
3.2 后代仔鼠PND10血清和大腦皮層組織勻漿TT4水平
3.3 仔鼠PND40水迷宮結(jié)果
3.4 仔鼠PND40條件恐懼實驗
3.5 仔鼠PND40長時程增強
3.6 PND40天仔鼠神經(jīng)元軸突鍍銀染色
3.7 real-time PCR結(jié)果
3.7.1 P40天仔鼠海馬組織甲狀腺激素反應(yīng)基因mRNA的表達
3.7.2 P40天仔鼠皮層組織甲狀腺激素反應(yīng)基因mRNA表達
3.7.3 P40天仔鼠海馬組織神經(jīng)營養(yǎng)因子mRNA表達比較
3.7.4 P40天仔鼠皮層組織神經(jīng)營養(yǎng)因子mRNA表達比較
3.7.5 P40天仔鼠海馬組織神經(jīng)導(dǎo)向因子mRNA表達比較
3.7.6 P40天仔鼠皮層組織神經(jīng)導(dǎo)向因子mRNA表達比較
3.7.7 P40天仔鼠海馬組織GTPase家族因子mRNA表達比較
3.7.8 P40天仔鼠皮層組織GTPase家族因子mRNA表達比較
3.8 Western blot結(jié)果
3.8.1 P40天仔鼠海馬組織GTPase家族因子蛋白表達比較
3.8.2 P40天仔鼠皮層組織GTPase家族因子蛋白表達比較
4 討論
5 結(jié)論
第三部分:腦發(fā)育第一階段母體甲狀腺激素缺乏后代GD17天胎腦大腦皮層轉(zhuǎn)錄組分析
1 前言
2 材料和方法
2.1 實驗材料
2.1.1 實驗動物
2.1.2 主要實驗儀器
2.1.3 主要實驗試劑
2.2 實驗方法
2.2.1 動物造模過程及處理時間點
2.2.2 石蠟切片
2.2.3 尼氏染色（Nissl staining）
2.2.4 激光捕獲顯微切害lj （Laser capture microdissection）
2.2.5 微量RNA提取
2.2.6 RNA質(zhì)量檢測
2.2.7 轉(zhuǎn)錄組測序（RNA sequencing, RNA-seq）
2.3 統(tǒng)計學(xué)分析
3 結(jié)果
3.1 造模情況
3.2 尼氏染色
3.3 RNA樣品處理
3.3.1 LCM后微量RNA提取
3.3.2 第一次總RNA混樣樣品質(zhì)檢結(jié)果
3.3.3 Trizol法提取4%多聚甲醛固定后皮層組織總RNA
3.3.4 第二次總RNA質(zhì)檢結(jié)果
3.3.5 重新造模、新鮮腦組織體視顯微鏡下分離皮層，Trizol法提取總RNA
3.3.6 第三次質(zhì)檢結(jié)果
3.3.7 測序結(jié)果
3.4 仔鼠PND10皮層和海馬組織甲狀腺激素反應(yīng)基因表達
4 討論
5 結(jié)論
本論文創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻
文獻綜述
參考文獻
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷
本文編號：2907844
【文章來源】：中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省
【文章頁數(shù)】：119 頁
【學(xué)位級別】：博士
【文章目錄】：
摘要
Abstract
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第一部分：腦發(fā)育不同階段母體甲狀腺激素缺乏對后代神經(jīng)精神發(fā)育影響的動物研究
1 前言
2 材料與方法
2.1 實驗材料
2.1.1 實驗動物
2.1.2 主要儀器設(shè)備
2.1.3 主要試劑
2.2 實驗方法
2.2.1 造模方法
2.2.2 母鼠眶后采血方法
2.2.3 仔鼠取腦過程
2.2.4 ELISA法測定母鼠甲功、仔鼠甲功和仔鼠腦組織中甲狀腺激素含
2.2.5 翻身校正反射（Righting reflex）
2.2.6 觸須引發(fā)的前肢放置試驗（Vibrissae-elicited forelimb placing test）
2.2.7 長時程增強（Long-term potentiation, LTP）
2.2.8 曠場實驗（Open field test）
2.2.9 高架十字迷宮（Elevated plus maze）
2.2.10 高架零迷宮（Elevated zero maze）
2.2.11 旋轉(zhuǎn)加速實驗（Rotarod test）
2.2.12 水迷宮（Morris water maze）
2.2.13 強迫游泳（Forced swimming test）
2.3 統(tǒng)計學(xué)處理
3 結(jié)果
3.1 造模情況
3.2 后代一般情況
3.3 后代PND10甲功
3.4 仔鼠PND5、10大腦皮層發(fā)育相關(guān)行為學(xué)實驗
3.5 仔鼠PND10長時程增強
3.6 成年仔鼠自主活動及焦慮行為相關(guān)行為學(xué)實驗
3.7 成年仔鼠抑郁相關(guān)行為學(xué)實驗
3.8 成年仔鼠運動及學(xué)習(xí)記憶相關(guān)行為學(xué)實驗
4 討論
5 結(jié)論
第二部分：腦發(fā)育第一階段母體甲狀腺激素異常對后代神經(jīng)精神發(fā)育影響的動物研究
1 前言
2 材料與方法
2.1 實驗材料
2.1.1 實驗動物
2.1.2 主要儀器設(shè)備
2.1.3 主要試劑
2.2 實驗方法
2.2.1 動物造模過程及處理時間點
2.2.2 甲功測定
2.2.3 水迷宮（Morris water maze）
2.2.4 條件恐懼實驗（Fear conditioning test）
2.2.5 長時程增強（Long-term potentiation）
2.2.6 鍍銀染色
2.2.7 實時定量PCR （Quantitative real-time PCR）
2.2.8 Western Blotting
2.3統(tǒng)計學(xué)處理
3 結(jié)果
3.1 造模情況
3.1.1 妊娠大鼠GD10天血清TT4和TSH水平
3.1.2 妊娠大鼠GD18天血清TT4和TSH水平
3.2 后代仔鼠PND10血清和大腦皮層組織勻漿TT4水平
3.3 仔鼠PND40水迷宮結(jié)果
3.4 仔鼠PND40條件恐懼實驗
3.5 仔鼠PND40長時程增強
3.6 PND40天仔鼠神經(jīng)元軸突鍍銀染色
3.7 real-time PCR結(jié)果
3.7.1 P40天仔鼠海馬組織甲狀腺激素反應(yīng)基因mRNA的表達
3.7.2 P40天仔鼠皮層組織甲狀腺激素反應(yīng)基因mRNA表達
3.7.3 P40天仔鼠海馬組織神經(jīng)營養(yǎng)因子mRNA表達比較
3.7.4 P40天仔鼠皮層組織神經(jīng)營養(yǎng)因子mRNA表達比較
3.7.5 P40天仔鼠海馬組織神經(jīng)導(dǎo)向因子mRNA表達比較
3.7.6 P40天仔鼠皮層組織神經(jīng)導(dǎo)向因子mRNA表達比較
3.7.7 P40天仔鼠海馬組織GTPase家族因子mRNA表達比較
3.7.8 P40天仔鼠皮層組織GTPase家族因子mRNA表達比較
3.8 Western blot結(jié)果
3.8.1 P40天仔鼠海馬組織GTPase家族因子蛋白表達比較
3.8.2 P40天仔鼠皮層組織GTPase家族因子蛋白表達比較
4 討論
5 結(jié)論
第三部分:腦發(fā)育第一階段母體甲狀腺激素缺乏后代GD17天胎腦大腦皮層轉(zhuǎn)錄組分析
1 前言
2 材料和方法
2.1 實驗材料
2.1.1 實驗動物
2.1.2 主要實驗儀器
2.1.3 主要實驗試劑
2.2 實驗方法
2.2.1 動物造模過程及處理時間點
2.2.2 石蠟切片
2.2.3 尼氏染色（Nissl staining）
2.2.4 激光捕獲顯微切害lj （Laser capture microdissection）
2.2.5 微量RNA提取
2.2.6 RNA質(zhì)量檢測
2.2.7 轉(zhuǎn)錄組測序（RNA sequencing, RNA-seq）
2.3 統(tǒng)計學(xué)分析
3 結(jié)果
3.1 造模情況
3.2 尼氏染色
3.3 RNA樣品處理
3.3.1 LCM后微量RNA提取
3.3.2 第一次總RNA混樣樣品質(zhì)檢結(jié)果
3.3.3 Trizol法提取4%多聚甲醛固定后皮層組織總RNA
3.3.4 第二次總RNA質(zhì)檢結(jié)果
3.3.5 重新造模、新鮮腦組織體視顯微鏡下分離皮層，Trizol法提取總RNA
3.3.6 第三次質(zhì)檢結(jié)果
3.3.7 測序結(jié)果
3.4 仔鼠PND10皮層和海馬組織甲狀腺激素反應(yīng)基因表達
4 討論
5 結(jié)論
本論文創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻
文獻綜述
參考文獻
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷
本文編號：2907844
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