發(fā)布時間：2020-04-22 04:04

【摘要】：目的觀察細胞外調節(jié)蛋白激酶(Erk)1/2、磷酸化(phospho)-Erk1/2、基質金屬蛋白酶(MMP)-2和MMP-9在實驗性慢性氟中毒大鼠腦組織中的改變及硫酸軟骨素的治療作用及機制。方法將30只清潔級SD大鼠,按體質量(100~120g)采用隨機數字表法分為對照組(飲用自來水,氟含量0.5 mg/L)、染氟組(氟離子:10.0 mg/L)和硫酸軟骨素處理組(氟離子:10.0 mg/L,染氟90 d后0.66 mg/kg硫酸軟骨素連續(xù)腹腔注射5 d),每組10只,實驗周期為95 d。采用Morris水迷宮方法檢測大鼠行為學變化,蛋白質免疫印跡法檢測腦組織中Erk1/2、phospho-Erk1/2、MMP-2和MMP-9蛋白表達水平,HE染色觀察大鼠大腦神經元的形態(tài)學改變,免疫組織化學法檢測大鼠腦組織頂葉皮質、海馬CA2、CA3區(qū)phospho-Erk1/2、MMP-2、MMP-9的蛋白表達及分布情況。將人神經母細胞瘤SH-SY5Y細胞分為對照組(正常培養(yǎng)液)、染氟組(氟離子:4.0 mmol/L)和硫酸軟骨素處理組(氟離子:4.0 mmol/L、硫酸軟骨素:0.4mg/ml)。染氟72 h,四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測經不同濃度硫酸軟骨素處理后細胞存活率,錐蟲藍(Trypan Blue)染色觀察三組細胞存活數量并計算細胞存活率;染氟24h,電子顯微鏡觀察SH-SY5Y細胞超微結構變化。結果動物實驗結果顯示,對照組與硫酸軟骨素處理組搜索策略以趨向式為主,趨向式搜索次數(2.20±1.09、3.40±1.34)高于染氟組(0.40±0.54),P均0.05]。染氟組phospho-Erk1/2的蛋白表達(3.26±0.88)較對照組和硫酸軟骨素處理組升高[(1.53±0.28)、(2.36±0.87),P均0.05]。免疫組織化學結果顯示,染氟組大鼠腦海馬CA2區(qū)phospho-Erk1/2的平均灰度值(2.10±0.27)較對照組(1.50±0.08)升高,硫酸軟骨素處理組(1.30±0.18)較染氟組(2.10±0.27,P0.05)降低;海馬CA3區(qū)硫酸軟骨素處理組(0.87±0.06)較對照組(1.71±0.42,P0.05)降低。染氟組和硫酸軟骨素處理組大鼠腦頂葉皮質區(qū)MMP-2平均灰度值[(0.47±0.13)、(0.99±0.25)]較對照組(2.00±0.34,P均0.05)降低,硫酸軟骨素處理組(0.99±0.25)較染氟組(0.47±0.13,P0.05)升高。染氟組大鼠腦頂葉皮質、CA2和CA3區(qū)MMP-9平均灰度值[(1.34±0.70)、(1.12±0.23)、(1.52±0.29)]均較對照組[(2.81±1.33)、(2.59±0.29)、(2.34±0.35),P均0.05]降低;硫酸軟骨素處理組大鼠腦海馬CA2、CA3區(qū)[(1.87±0.16)、(2.22±0.16)]均較染氟組[(1.12±0.23)、(1.52±0.29),P均0.05]升高。細胞實驗結果顯示,硫酸軟骨素處理組SH-SY5Y細胞存活率[(0.92±0.23)%]和細胞計數[(7.83±1.38)×10~6]明顯高于染氟組[(0.55±0.02)%、(2.19±1.26)×10~6,P均0.05]。電鏡下觀察經硫酸軟骨素處理組細胞內吞飲小泡較多,仍有線粒體及內質網腫脹但相對染氟組較少。結論硫酸軟骨素對慢性氟中毒所致的神經損害具有一定的拮抗作用,對神經細胞具有一定的保護作用。Erk1/2通路可能通過調節(jié)MMP-2和MMP-9表達維持細胞生存內環(huán)境穩(wěn)定。
【圖文】：

表 2-2. 實驗性慢性氟中毒大鼠腦組織中 phospho-Erk1/2、Erk1/2表達水平（x—± s，，n =10）Table 2-2. Expression of phospho-Erk1/2,Erk1/2,MMP-2 and MMwith experimental fluorosis組別phospho-Erk1/2 Erk1/2 MM對照組 1.53 ± 0.28 1.61 ± 0.47 2.39 染氟組 3.26 ± 0.88a2.12 ± 1.46 1.72 CS 處理組 2.36 ± 0.87ab1.38 ± 0.60 2.58 F 值 67.92 0.64 1P 值< 0.05 > 0.05 >

表 2-3. 免疫組化測定大鼠大腦頂葉皮質 phospho-Erk1/2 蛋白表達(x—± s)Table2-3. Expression of phospho-Erk1/2 in the occipital cortex of rat brainsdetected by IHC(x—± s)分組 n 頂葉對照組 5 1.91 ± 0.34染氟組 5 1.00 ± 0.38CS處 理組5 1.28 ± 0.25F值 1.56P值 >0.05
【學位授予單位】：貴州醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R599.1

【參考文獻】

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本文編號：2636123