發(fā)布時(shí)間：2020-10-21 03:36

　　 目的:探究亞麻醉劑量氯胺酮調(diào)控的N-甲基-D-天冬氨酸受體一氧化氮(NMDA-NO)通路在小鼠術(shù)后認(rèn)知功能障礙(POCD)中的作用機(jī)制。方法:30只昆明小鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組(A組)、手術(shù)組(B組)、手術(shù)+亞麻醉劑量氯氨酮酮組(C組)三組,A組不做任何處理,B、C兩組行左頸動(dòng)脈分離術(shù),C組術(shù)中腹腔注射亞麻醉劑量氯胺酮0.1mg,術(shù)畢縫合并消毒傷口,待小鼠完全清醒并可以自由活動(dòng)后放回動(dòng)物中心繼續(xù)喂養(yǎng),分別于術(shù)后第1d、3d、5d、7d進(jìn)行水迷宮實(shí)驗(yàn)。另30只昆明小鼠以同樣分的組和實(shí)驗(yàn)處理進(jìn)行操作,于術(shù)后九小時(shí)斷頭取海馬組織,制得海馬勻漿,采用蛋白質(zhì)免疫印跡試驗(yàn)(Western Blot)檢測(cè)NMDAR1、NMDAR2A和NMDAR2B蛋白的表達(dá)情況,用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測(cè)定各組小鼠海馬勻漿中炎性因子TNF-α和IL-6的表達(dá),免疫組化(IHC)分析NMDAR2B陽性表達(dá)強(qiáng)度同時(shí)進(jìn)行蛋白定位以及用一氧化氮合酶試劑盒檢測(cè)各組小鼠海馬勻漿中一氧化氮合酶(NOS)的相對(duì)活力。結(jié)果:免疫組化鏡下結(jié)果顯示,A組NMDAR2B蛋白染色較深呈中等陽性(++),B組NMDAR2B蛋白染色很深呈強(qiáng)陽性(+++),C組NMDAR2B蛋白染色很淺呈弱陽性(+)。另外觀察到NMDAR2B蛋白主要集中在海馬CA1區(qū)表達(dá)且三組小鼠表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而在CA3區(qū)的表達(dá)三組小鼠無明顯差異。B組小鼠潛伏期于術(shù)后第1d、3d明顯延長(zhǎng)(63.54±32.25比15.42±7.47、35.37±39.34,51.5±25.36比13.1±6.15、25.8±34.53,均P0.01),A、C兩組潛伏期差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。B組小鼠目標(biāo)象限百分比于術(shù)后第1d明顯降低(21.94±9.64比37.51±9.52、48.47±20.32,P0.01)。C組小鼠海馬勻漿中IL-6、TNF-α含量明顯降低[IL-6(ng/ml):1.95±0.95比2.06±0.46、5.36±0.49,TNF-α(pg/ml):21.84±6.54比25.73±13.84、94.48±35.72,均P0.05)]。Western Blot結(jié)果提示:C組小鼠海馬的勻漿中NMDAR1、NMDAR2A、NMDAR2B的蛋白表達(dá)量和NOS相對(duì)活力均較空白對(duì)照組和手術(shù)組明顯降低,C組小鼠NMDAR1、NMDAR2A、NMDAR2B的蛋白灰度值比分別較手術(shù)組降低(1.39±0.23)、(2.32±3.13)、(3.24±0.46)倍,NOS的相對(duì)活力RFU值較手術(shù)組降低(2.99±1.96)倍,較空白對(duì)照組降低(1.11±1.17)倍,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P0.05)。結(jié)論:亞麻醉劑量氯胺酮能拮抗NMDA受體,抑制NOS活性,減少信號(hào)通路下游的炎癥因子釋放,從而降低POCD的發(fā)病率。
【學(xué)位單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R614
【部分圖文】：

圖 2-1 一氧化氮合酶活性檢測(cè)原理圖【49】(Fig.2-1) Nitric oxide synthase activity detection principle試劑的準(zhǔn)備ADPH 溶液的配制首先往 NADPH 粉劑里加入 1 毫升的 Milli-Q 級(jí)純水，輕勻，由此而得到 2.5mM 的 NADPH 溶液。將配制好的溶如果在當(dāng)日實(shí)驗(yàn)不使用的溶液請(qǐng)及時(shí)放于-70℃保存。最M 的 NADPH 溶液用 NOS 檢測(cè)緩沖液稀釋五倍，最終可以ADPH 溶液以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。OS 檢測(cè)緩沖液的配制將 NOS 檢測(cè)緩沖液（2X）稀釋一倍，即加入等體積的 M吹打，充分混勻，便可以得到所需要的 NOS 檢測(cè)緩沖液

亞麻醉劑量氯胺酮調(diào)控NMDA-NO信號(hào)通路在小鼠術(shù)后認(rèn)知功能障礙機(jī)制中的研究 2015級(jí)碩士研究生畢業(yè)論文三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.各組小鼠術(shù)后七天水迷宮（Morris Maze）變化趨勢(shì)B 組小鼠的潛伏期在術(shù)后第 1、第 3 天明顯延長(zhǎng)，此后又逐漸降低；目標(biāo)象限百分比在術(shù)后的第 1、第 3 天明顯降低，此后逐漸增加，與 A 組和 C組的小鼠結(jié)果相比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；A 組和 C 組小鼠術(shù)后 7 天的潛伏期及目標(biāo)象限百分比比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），結(jié)果見圖 3-1。

各組小鼠NMDAR2B的IRS評(píng)分(Fig.3-2)IRSscoresofmouseNMDAR2Bineachgroup
【參考文獻(xiàn)】

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