發(fā)布時間：2020-10-21 03:36

　　 目的:探究亞麻醉劑量氯胺酮調控的N-甲基-D-天冬氨酸受體一氧化氮(NMDA-NO)通路在小鼠術后認知功能障礙(POCD)中的作用機制。方法:30只昆明小鼠隨機分為空白對照組(A組)、手術組(B組)、手術+亞麻醉劑量氯氨酮酮組(C組)三組,A組不做任何處理,B、C兩組行左頸動脈分離術,C組術中腹腔注射亞麻醉劑量氯胺酮0.1mg,術畢縫合并消毒傷口,待小鼠完全清醒并可以自由活動后放回動物中心繼續(xù)喂養(yǎng),分別于術后第1d、3d、5d、7d進行水迷宮實驗。另30只昆明小鼠以同樣分的組和實驗處理進行操作,于術后九小時斷頭取海馬組織,制得海馬勻漿,采用蛋白質免疫印跡試驗(Western Blot)檢測NMDAR1、NMDAR2A和NMDAR2B蛋白的表達情況,用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)測定各組小鼠海馬勻漿中炎性因子TNF-α和IL-6的表達,免疫組化(IHC)分析NMDAR2B陽性表達強度同時進行蛋白定位以及用一氧化氮合酶試劑盒檢測各組小鼠海馬勻漿中一氧化氮合酶(NOS)的相對活力。結果:免疫組化鏡下結果顯示,A組NMDAR2B蛋白染色較深呈中等陽性(++),B組NMDAR2B蛋白染色很深呈強陽性(+++),C組NMDAR2B蛋白染色很淺呈弱陽性(+)。另外觀察到NMDAR2B蛋白主要集中在海馬CA1區(qū)表達且三組小鼠表達差異有統(tǒng)計學意義,而在CA3區(qū)的表達三組小鼠無明顯差異。B組小鼠潛伏期于術后第1d、3d明顯延長(63.54±32.25比15.42±7.47、35.37±39.34,51.5±25.36比13.1±6.15、25.8±34.53,均P0.01),A、C兩組潛伏期差別無統(tǒng)計學意義。B組小鼠目標象限百分比于術后第1d明顯降低(21.94±9.64比37.51±9.52、48.47±20.32,P0.01)。C組小鼠海馬勻漿中IL-6、TNF-α含量明顯降低[IL-6(ng/ml):1.95±0.95比2.06±0.46、5.36±0.49,TNF-α(pg/ml):21.84±6.54比25.73±13.84、94.48±35.72,均P0.05)]。Western Blot結果提示:C組小鼠海馬的勻漿中NMDAR1、NMDAR2A、NMDAR2B的蛋白表達量和NOS相對活力均較空白對照組和手術組明顯降低,C組小鼠NMDAR1、NMDAR2A、NMDAR2B的蛋白灰度值比分別較手術組降低(1.39±0.23)、(2.32±3.13)、(3.24±0.46)倍,NOS的相對活力RFU值較手術組降低(2.99±1.96)倍,較空白對照組降低(1.11±1.17)倍,差異均有統(tǒng)計學意義(均P0.05)。結論:亞麻醉劑量氯胺酮能拮抗NMDA受體,抑制NOS活性,減少信號通路下游的炎癥因子釋放,從而降低POCD的發(fā)病率。
【學位單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R614
【部分圖文】：

圖 2-1 一氧化氮合酶活性檢測原理圖【49】(Fig.2-1) Nitric oxide synthase activity detection principle試劑的準備ADPH 溶液的配制首先往 NADPH 粉劑里加入 1 毫升的 Milli-Q 級純水，輕勻，由此而得到 2.5mM 的 NADPH 溶液。將配制好的溶如果在當日實驗不使用的溶液請及時放于-70℃保存。最M 的 NADPH 溶液用 NOS 檢測緩沖液稀釋五倍，最終可以ADPH 溶液以備后續(xù)實驗使用。OS 檢測緩沖液的配制將 NOS 檢測緩沖液（2X）稀釋一倍，即加入等體積的 M吹打，充分混勻，便可以得到所需要的 NOS 檢測緩沖液

亞麻醉劑量氯胺酮調控NMDA-NO信號通路在小鼠術后認知功能障礙機制中的研究 2015級碩士研究生畢業(yè)論文三、實驗結果1.各組小鼠術后七天水迷宮（Morris Maze）變化趨勢B 組小鼠的潛伏期在術后第 1、第 3 天明顯延長，此后又逐漸降低；目標象限百分比在術后的第 1、第 3 天明顯降低，此后逐漸增加，與 A 組和 C組的小鼠結果相比較差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；A 組和 C 組小鼠術后 7 天的潛伏期及目標象限百分比比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），結果見圖 3-1。

各組小鼠NMDAR2B的IRS評分(Fig.3-2)IRSscoresofmouseNMDAR2Bineachgroup
【參考文獻】

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本文編號：2849585