【摘要】：咬合創(chuàng)傷(traumatic occlusion)是指由于不正常的牙合接觸關(guān)系和/或咀嚼系統(tǒng)的功能異常,造成咀嚼系統(tǒng)的某些部位的病理性損害或適應(yīng)性變化。是由于咬合關(guān)系不正�；蛞Ш狭α坎粎f(xié)調(diào),個(gè)別或某幾個(gè)牙所受的咬合力量超過(guò)其牙周組織的耐受力而造成的牙周組織損傷情況,咬合創(chuàng)傷嚴(yán)重者可導(dǎo)致牙槽骨的吸收。在咬合創(chuàng)傷發(fā)生發(fā)展過(guò)程中,毛細(xì)血管的變化有著重要作用,通過(guò)對(duì)毛細(xì)血管的鑄型,可以直接顯示咬合創(chuàng)傷發(fā)生后毛細(xì)血管的變化,為揭示牙周組織在異常外力作用下微循環(huán)變化研究提供直接證據(jù)。 本研究中為揭示咬合創(chuàng)傷造成的病損與為微循環(huán)形態(tài)學(xué)變化之間關(guān)系,通過(guò)建立Wistar大鼠下頜第一磨牙咬合創(chuàng)傷模型,模擬人類(lèi)的咬合創(chuàng)傷,采用毛細(xì)血管鑄型技術(shù)、掃描電鏡技術(shù)、病理切片等方法,從形態(tài)學(xué)角度,研究咬合創(chuàng)傷對(duì)牙周組織、顳下頜關(guān)節(jié)區(qū)域的毛細(xì)血管鑄型變化,為進(jìn)一步系統(tǒng)、全面、深入研究和分析毛細(xì)血管變化在口頜系統(tǒng)病損中的變化,為研究咬合創(chuàng)傷致口頜系統(tǒng)疾患的發(fā)病機(jī)理及其防治措施提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ)。 一、毛細(xì)血管鑄型材料配制研究 在室溫和45°水浴恒溫條件下,分別對(duì)低粘度樹(shù)脂和高粘度樹(shù)脂聚合固化的過(guò)程中,觀察聚合中粘稠度、體積變化、有無(wú)炸管、氣泡,并進(jìn)行分析。 室溫條件下,低粘度樹(shù)脂溶液中分為聚合引發(fā)劑0.1%組、0.3%組、0.5%組、1.0%組、1.5%組5組。加入聚合引發(fā)劑1小時(shí)后觀察,1.5%組中,5支試管均有大氣泡產(chǎn)生；1.0%組中,5支試管中有2支有比較大氣泡產(chǎn)生,另3支試管有中小氣泡產(chǎn)生。加入聚合引發(fā)劑3小時(shí)后觀察,0.5%組均發(fā)生爆管現(xiàn)象,0.3%組沒(méi)有氣泡,0.1%組沒(méi)有氣泡。 0.1%組48小時(shí)未能完全聚合,0.3%組36小時(shí)聚合,0.5%組36小時(shí)聚合,1.0%組30小時(shí)聚合,1.5%組12小時(shí)聚合。室溫低粘度樹(shù)脂聚合后體積變化：0.1%組48小時(shí)未能聚合,因此不進(jìn)行體積測(cè)量；0.3%組、0.5%組、1.0%組、1.5%組的體積變化均數(shù)分別為4.32±0.05ml,4.30±0.08ml,4.30±0.11ml,4.35±0.12ml。統(tǒng)計(jì)分析4組聚合反應(yīng)后體積無(wú)明顯差異。 45℃水浴恒溫條件下,低粘度樹(shù)脂溶液聚合引發(fā)劑0.1%組、0.3%組、0.5%組、1.0%組、1.5%組5組中,加入聚合引發(fā)劑1小時(shí)后觀察,1.0%組和1.5%組中,每組5支試管均有大氣泡產(chǎn)生；加入聚合引發(fā)劑3小時(shí)后觀察,0.5%組均發(fā)生爆管現(xiàn)象,0.3%組無(wú)氣泡,0.1%組也有少量小氣泡。0.1%組18小時(shí)聚合,0.3%組12小時(shí)聚合,0.5%組12小時(shí)聚合,1.0%組6小時(shí)聚合,1.5%組6小時(shí)聚合。聚合后體積變化：0.1%、0.3%組、0.5%組、1.0%組、1.5%組的體積變化均數(shù)分別為4.31±0.06ml,4.27±0.06ml,4.28±0.12ml,4.30±0.17ml,4.27±0.13ml。統(tǒng)計(jì)分析5組聚合反應(yīng)后體積無(wú)明顯差異。 室溫條件下,高粘度樹(shù)脂溶液聚合引發(fā)劑0.1%組、0.3%組、0.5%組、1.0%組、1.5%組5組中,加入聚合引發(fā)劑1小時(shí)后觀察,1.5%組中5支試管4支試管有大氣泡產(chǎn)生,剩余1支試管有中等量氣泡；加入聚合引發(fā)劑3小時(shí)后觀察,1.0%組和0.5%組有中、小氣泡產(chǎn)生,0.3%組和0.1%組無(wú)氣泡產(chǎn)生。5組均沒(méi)有發(fā)生爆管現(xiàn)象。0.1%組24小時(shí)聚合,0.3%組18小時(shí)聚合,0.5%組18小時(shí)聚合,1.0%組12小時(shí)聚合,1.5%組12小時(shí)聚合。高粘度樹(shù)脂聚合后體積變化：0.1%、0.3%組、0.5%組、1.0%組、1.5%組的體積變化均數(shù)分別為4.52±0.05ml,4.47±0.06ml,4.39±0.13ml,4.33±0.16ml,4.38±0.18ml。統(tǒng)計(jì)分析5組聚合反應(yīng)后體積無(wú)明顯差異。 45℃水浴恒溫條件下,高粘度樹(shù)脂溶液聚合引發(fā)劑0.1%組、0.3%組、0.5%組、1.0%組、1.5%組5組中,加入聚合引發(fā)劑1小時(shí)后觀察,0.5%組、1.0%組和1.5%組,每組5支試管均有大氣泡產(chǎn)生。5組均沒(méi)有發(fā)生爆管現(xiàn)象。0.1%組、0.3%組和0.5%組6小時(shí)聚合；1.0%組和1.5%組中,1小時(shí)聚合。聚合后體積變化：0.1%、0.3%組、0.5%組、1.0%組、1.5%組的體積變化均數(shù)分別為4.46±0.08ml,4.55±0.09ml,4.54±0.16ml,4.46±0.21ml,4.46±0.25ml。統(tǒng)計(jì)分析5組聚合反應(yīng)后體積無(wú)明顯差異。 對(duì)于毛細(xì)血管鑄型材料,采用高粘度和低粘度2種樹(shù)脂溶液,選用比例為0.3%的聚合引發(fā)劑,有利于在室溫和45。C恒溫水浴中聚合良好后,將可以形成理想的毛細(xì)血管鑄型標(biāo)本。 二、正常Wistar大鼠口頜系統(tǒng)毛細(xì)血管鑄型制作 選用健康的8周齡Wistar大鼠,8只,頭面部無(wú)外傷,牙列完整,咬合關(guān)系正常,無(wú)齲壞及牙周病。給予腹腔注射2%戊巴比妥鈉進(jìn)行麻醉后,打開(kāi)胸腹腔,保留肝臟,剪去腹腔以下部分,從心尖進(jìn)針插入主動(dòng)脈。Wistar大鼠標(biāo)本沖洗脫血后,使用KDS200注射泵以5ml/min的速度注入50ml低粘度樹(shù)脂溶液,前肢變硬伸直；然后再以1ml/min的速度注入5ml高粘度樹(shù)脂溶液。抽出灌注針扎緊主動(dòng)脈,放入45℃恒溫水浴箱中加溫聚合24小時(shí)。解剖大鼠頭頸部,形成皮膚標(biāo)本、舌標(biāo)本、下頜骨標(biāo)本、上頜骨標(biāo)本、顳下頜關(guān)節(jié)標(biāo)本。Wistar大鼠解剖后標(biāo)本腐蝕,含有骨與軟組織的標(biāo)本用次氯酸鈉溶液浸泡腐蝕；皮膚標(biāo)本、舌標(biāo)本浸泡在10%NaOH溶液中腐蝕。對(duì)Wistar大鼠標(biāo)本清洗去油、流水沖洗、超聲波清洗。將Wistar大鼠標(biāo)本自然干燥,制作完成的各毛細(xì)血管鑄型標(biāo)本,可以進(jìn)行掃描電子顯微鏡觀察分析。 舌毛細(xì)血管鑄型標(biāo)本,顯示舌部表面形態(tài)完整,毛細(xì)血管網(wǎng)解剖形態(tài)清晰,舌部?jī)蓚?cè)毛細(xì)血管網(wǎng)被舌正中纖維隔分開(kāi),舌前部正中存在凹陷。舌深動(dòng)脈發(fā)出分支上升至舌背構(gòu)成舌背粘膜下毛細(xì)血管網(wǎng),兩側(cè)未見(jiàn)明顯吻合,可以顯示舌中部缺失血管位置與形態(tài)。 掃描電鏡顯微分析Wistar大鼠舌背部密布絲狀乳頭和菌狀乳頭的毛細(xì)血管叢,數(shù)量眾多,形態(tài)多種多樣。掃描電鏡下放大300倍至1000倍,可以觀察到絲狀乳頭血管叢呈現(xiàn)圓錐狀或者花籃狀,大小不均一；菌狀乳頭頂端平坦,呈現(xiàn)圓盤(pán)狀。毛細(xì)血管網(wǎng)結(jié)構(gòu)清晰,表面光滑。放大到3000倍和4500倍時(shí),毛細(xì)血管鑄型結(jié)構(gòu)表面依然清晰光滑,在4500倍視野中,清楚顯示毛細(xì)血管鑄型的管徑明顯小于10μm,說(shuō)明樹(shù)脂材料完全可以灌注入毛細(xì)血管。 上、下頜牙根部位血管鑄型標(biāo)本,毛細(xì)血管鑄型標(biāo)本解剖結(jié)構(gòu)清晰,顯示頜骨、牙與毛細(xì)血管鑄型之間的關(guān)系。來(lái)自牙槽骨和牙齦的微動(dòng)脈多沿牙槽骨走行,逐級(jí)分支變細(xì),各級(jí)分支相互交織形成緊靠根面的網(wǎng)絡(luò),包圍牙根周?chē)�。Wistar大鼠髁突的動(dòng)脈主要來(lái)自關(guān)節(jié)囊的血管網(wǎng)和翼外肌動(dòng)脈,血管分支在髁突頸部吻合成平行于髁突長(zhǎng)軸的橫形血管弓,由弓上發(fā)出分支至髁突表面形成關(guān)節(jié)表面的血管網(wǎng)。 Wistar大鼠頜面皮膚以及皮下組織結(jié)構(gòu)毛細(xì)血管鑄型標(biāo)本,可以看到各級(jí)細(xì)微鑄型結(jié)構(gòu)組成的血管網(wǎng),大的血管逐級(jí)發(fā)出分支,直到毛細(xì)血管網(wǎng)絡(luò),清楚顯示分支走形的立體結(jié)構(gòu)。電鏡掃描圖像中,可見(jiàn)到小動(dòng)脈、毛細(xì)血管前微動(dòng)脈、毛細(xì)血管及微靜脈等微血管的立體構(gòu)筑結(jié)構(gòu),直徑較粗的血管與毛細(xì)血管網(wǎng)交織一起,形成豐富多樣的血管走形網(wǎng)絡(luò)。 三、Wistar大鼠咬合創(chuàng)傷模型制作 選用健康的雄性8周齡Wistar大鼠12只,給予腹腔注射2%戊巴比妥鈉進(jìn)行麻醉后,用光固化丙烯酸酯結(jié)構(gòu)膠將光固化復(fù)合樹(shù)脂材料固定在右側(cè)下頜第一、二磨牙牙合面上,形成高為1.Omm的高點(diǎn),建立右側(cè)磨牙早接觸的創(chuàng)傷咬合。造模1月后觀測(cè)Wistar大鼠咬合創(chuàng)傷組的咬合面嵌體固位良好,右側(cè)咬合發(fā)生早接觸,咬合左側(cè)不接觸；對(duì)照組咬合接觸正常。Wistar大鼠咬合創(chuàng)傷組右側(cè)局部牙周組織稍紅腫,牙周袋不明顯,對(duì)合牙明顯磨損,牙齒無(wú)明顯松動(dòng)。Wistar大鼠處理組體重增長(zhǎng)比對(duì)照組平均少30g,且被毛凌亂,無(wú)光澤：對(duì)照組比較溫順,被毛光滑,有光澤。 本研究中采用Wistar大鼠作為咬合創(chuàng)傷的動(dòng)物模型,由于Wistar大鼠來(lái)源豐富,有磨牙習(xí)慣,咬合創(chuàng)傷發(fā)展速度較快,可以短時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)咬合創(chuàng)傷模型；價(jià)格低廉,飼養(yǎng)容易,抗病力強(qiáng),有利于批量研究的順利進(jìn)行。 四、Wistar大鼠咬合創(chuàng)傷模型的牙周毛細(xì)血管鑄型研究 選用健康的雄性8周齡Wistar大鼠48只,隨機(jī)分為8組,每組6只。對(duì)于處理組,選擇制作模型完成后3天、1周、2周、3周、4周、6周、8周為觀察時(shí)間點(diǎn),對(duì)照組6只,第8周為觀察時(shí)間點(diǎn)。 牙周膜和牙槽骨的變化：對(duì)于3天、1周、2周、3周、4周、6周、8周處理組和對(duì)照組,制作鑄型標(biāo)本觀察牙周膜的毛細(xì)血管和牙槽骨的變化。3天組和1周組,牙槽骨無(wú)明顯吸收,牙齦以及周?chē)彻悄そY(jié)構(gòu)中毛細(xì)血管膨大；2周組、3周組和4周組,牙槽骨有吸收,毛細(xì)血管密度變小,結(jié)構(gòu)變細(xì),四周組吸收最為明顯；6周組處于靜止期,8周組中牙槽吸收有所修復(fù),牙周毛細(xì)血管密度逐漸增加。 咬合創(chuàng)傷可以導(dǎo)致大鼠牙槽骨牙周組織發(fā)生病理變化,隨著咬合創(chuàng)傷的改建,牙槽骨與牙周組織破壞得到修復(fù)。Wistar大鼠咬合創(chuàng)傷模型的毛細(xì)血管鑄型研究,揭示咬合創(chuàng)傷與微循環(huán)變化之間的關(guān)系。為牙周組織的病理與生理變化研究提供了形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)。 五、Wistar大鼠咬合創(chuàng)傷模型的顳下頜關(guān)節(jié)毛細(xì)血管鑄型研究 對(duì)于Wistar大鼠7個(gè)處理組,選擇制作模型完成后第3天、1周、2周、3周、4周、6周、8周為觀察時(shí)間點(diǎn),提前4小時(shí)禁食,進(jìn)行解剖后按照第三章方法進(jìn)行血管灌注處理。大體鑄型標(biāo)本和掃描電鏡觀察顳下頜關(guān)節(jié)標(biāo)本的鑄型血管變化。 對(duì)于Wistar大鼠咬合創(chuàng)傷模型,在掃描電鏡下觀察,下頜骨髁突與關(guān)節(jié)盤(pán)周?chē)S著咬合創(chuàng)傷時(shí)間延長(zhǎng),毛細(xì)血管結(jié)構(gòu)密度逐漸減小,第4周達(dá)到最低；到第6周沒(méi)有發(fā)展,第8周出現(xiàn)恢復(fù)。和咬合創(chuàng)傷改建有著密切關(guān)系。 咬合創(chuàng)傷可以導(dǎo)致顳下頜關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)發(fā)生病變,毛細(xì)血管鑄型技術(shù)能真實(shí)完整地反映顳下頜關(guān)節(jié)區(qū)域毛細(xì)血管網(wǎng)解剖形態(tài)結(jié)構(gòu)和空間分布,對(duì)研究顳下頜關(guān)節(jié)紊亂病(temporomandibular disorders, TMD)的病理生理改變具有重要的應(yīng)用價(jià)值。 主要解決的問(wèn)題與創(chuàng)新 本研究中主要通過(guò)毛細(xì)血管鑄型技術(shù)方法,建立Wistar大鼠咬合創(chuàng)傷模型,研究牙周和顳下頜關(guān)節(jié)在咬合創(chuàng)傷中的毛細(xì)血管形態(tài)學(xué)變化,為微循環(huán)研究增添了新的方法。 ①通過(guò)對(duì)Wistar大鼠模型毛細(xì)血管鑄型,完備了毛細(xì)血管鑄型方法,為微循環(huán)的病理生理研究提供形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)。 ②通過(guò)Wistar大鼠咬合創(chuàng)傷模型的牙周毛細(xì)血管鑄型,揭示咬合創(chuàng)傷引起牙槽骨吸收,牙周膜變化的毛細(xì)血管的形態(tài)學(xué)改變。 ③通過(guò)Wistar大鼠咬合創(chuàng)傷模型的顳下頜關(guān)節(jié)毛細(xì)血管鑄型,揭示咬合創(chuàng)傷引起顳下頜關(guān)節(jié)病理變化的毛細(xì)血管形態(tài)學(xué)改變。 ④通過(guò)Wistar大鼠模型毛細(xì)血管鑄型從形態(tài)學(xué)研究疾病對(duì)微循環(huán)變化,可以和其病理生理的分子生物機(jī)制研究結(jié)果向結(jié)合,可以從宏觀和微觀2個(gè)方面相互印證,為其疾病的機(jī)理和治療措施的研究提供了可靠基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R782;R-332
【圖文】：

次氯酸鈉溶液（Sodium hypochlorite solution，分析純AR，廣東省化學(xué)試劑工程技術(shù)研宄開(kāi)發(fā)中心，廣東），見(jiàn)下圖2-1,圖2-2所示。圓圖2-1鑄型材料的試劑：甲基丙稀酸甲酯，N，N-二甲基苯胺，鄰苯二甲酸二丁酯，過(guò)氧化苯甲酷。Fig.2-1 Reagents of mold material ： methyl methacrylate, N,N-Dimethylaniline,Di-n-butyl phthaiate, Benzoyl peroxide.14

次氯酸鈉溶液（Sodium hypochlorite solution，分析純AR，廣東省化學(xué)試劑工程技術(shù)研宄開(kāi)發(fā)中心，廣東），見(jiàn)下圖2-1,圖2-2所示。圓圖2-1鑄型材料的試劑：甲基丙稀酸甲酯，N，N-二甲基苯胺，鄰苯二甲酸二丁酯，過(guò)氧化苯甲酷。Fig.2-1 Reagents of mold material ： methyl methacrylate, N,N-Dimethylaniline,Di-n-butyl phthaiate, Benzoyl peroxide.14

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【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 程明亮,袁耀華,侯皓天,趙建偉,李桂軍;人體全身血管鑄型標(biāo)本的研制[J];解剖學(xué)研究;2004年03期

本文編號(hào)：2835886