目的分離并培養(yǎng)C57BL/6J-TgN (chickenβ-actin-EGFP) ZLFILAS小鼠羊膜干細(xì)胞(amnion-derived stem cells, ADSCs),并探索其特性。ADSCs具有多潛能分化和自我更新的能力,并能分泌神經(jīng)營養(yǎng)因子營養(yǎng)支持神經(jīng)元存活。通過移植小鼠ADSCs至APPswe/PS1AE9 (PAP)雙轉(zhuǎn)基因模型小鼠海馬內(nèi),檢測PAP小鼠認(rèn)知功能,明確小鼠ADSCs對PAP小鼠認(rèn)知功能的影響并進行初步的機制探討研究,為干細(xì)胞移植治療探尋新的細(xì)胞來源,并對ADSCs治療AD的基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用提供依據(jù)。方法無菌條件下機械分離C57BL/6J-TgN (chickenβ-actin-EGFP) ZLFILAS小鼠羊膜,并采用0.25%胰蛋白酶-EDTA的消化,應(yīng)用高糖-DMEM培養(yǎng)基(添加10gg/L人表皮生長因子)培養(yǎng)。取2-4代小鼠ADSCs,免疫熒光方法檢測干細(xì)胞表面標(biāo)記物：性別決定區(qū)Y框蛋白(sex determining region Y box 2, SOX-2)、八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子4 (octamer-binding transcripti...

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
綜述
    參考文獻
前言
第一部分 小鼠羊膜干細(xì)胞體外分離及其特性研究
    材料與方法
        1. 材料
            1.1 實驗動物
            1.2 主要儀器設(shè)備
            1.3 主要試劑
            1.4 主要抗體
            1.5 溶液配制
        2. 實驗方法
            2.1 ADSCs分離及培養(yǎng)
            2.2 免疫熒光細(xì)胞染色檢測細(xì)胞表面標(biāo)記物
            2.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測ADSCs表面標(biāo)記物
    結(jié)果
        1. ADSCs體外培養(yǎng)
        2. ADSCs表達干細(xì)胞表面標(biāo)記物及表達神經(jīng)營養(yǎng)因子BDNF、NGF
        3. 流式細(xì)胞術(shù)檢測ADSCs表面標(biāo)記物
    討論
    小結(jié)
第二部分 ADSCs移植改善APPswe/PS1△E9小鼠認(rèn)知功能的研究
    材料和方法
        1. 材料
            1.1 實驗動物
            1.2 主要儀器
            1.3 主要試劑
            1.4 主要抗體
            1.5 主要試劑配制方法
        2. 實驗方法
            2.1 轉(zhuǎn)基因動物的鑒定
            2.2 ADSCs移植
            2.3 行為學(xué)檢測
            2.4 小鼠腦組織取材
            2.5 腦組織海馬蛋白提取、濃度鑒定
            2.6 免疫組織化學(xué)及硫黃素-S熒光染色
            2.7 ELISA檢測Aβ含量
            2.8 Western blotting實驗步驟
            2.9 統(tǒng)計方法
    結(jié)果
        1. APPswe/PS1△E9小鼠基因型的鑒定
        2. BDNF在6月齡AD模型小鼠和WT小鼠海馬內(nèi)分泌情況
        3. ADSCs移植并在腦內(nèi)存活
        4. 行為學(xué)檢測小鼠空間學(xué)習(xí)記憶能力和自主活動及焦慮狀態(tài)情況
        5. 檢測腦組織海馬內(nèi)膠質(zhì)細(xì)胞激活情況
        6. 腦組織海馬內(nèi)BDNF、Synaptophysin蛋白水平變化
        7. 腦組織內(nèi)APP、Aβ42、Aβ40及P-Tau(Thr231)蛋白水平變化
        8. ADSCs移植后小鼠腦內(nèi)APPswe/PS1△E9小鼠腦內(nèi)老年斑沉積情況
        9. ADSCs移植后對小鼠腦形態(tài)和結(jié)構(gòu)的影響
        10. ADSCs移植后對小鼠腦內(nèi)神經(jīng)元的影響
    討論
    小結(jié)
全文總結(jié)
參考文獻
縮略詞語
個人簡介及發(fā)表文章
致謝



本文編號：4048262