發(fā)布時間：2025-01-05 21:42

　　 目的:構(gòu)建NR1基因RNA干擾（RNA interference,RNAi）的海馬神經(jīng)干細胞體系,用于離體水平研究NR1對精神分裂癥模型海馬神經(jīng)發(fā)生的調(diào)控作用。方法:利用293T細胞,將病毒原液稀釋至不同病毒梯度,經(jīng)過逐孔稀釋法檢測慢病毒滴度;體外培養(yǎng)海馬神經(jīng)干細胞,分別加入MOI值為100、10、1的慢病毒,確定海馬神經(jīng)干細胞的最適MOI值;海馬神經(jīng)干細胞體系中加入濃度為200μmol/L的MK-801 24 h后,加入干擾NR1亞基的慢病毒12 h,通過熒光顯微鏡觀察海馬神經(jīng)干細胞干擾效率,通過Western Blot檢測轉(zhuǎn)染后海馬神經(jīng)干細胞NR1的蛋白表達。結(jié)果:（1）重組的慢病毒滴度可達2×10～8²×10～9TU/m L。MOI值為100時,海馬神經(jīng)干細胞轉(zhuǎn)染率可達90%;（2）Western Blot結(jié)果顯示:感染慢病毒的海馬神經(jīng)干細胞中NR1蛋白表達水平明顯降低（P<0.05）。結(jié)論:成功構(gòu)建了NR1基因RNA干擾的海馬神經(jīng)干細胞體系,慢病毒介導的shRNA可有效的干擾海馬神經(jīng)干細胞中NR1亞基的表達,為進一步探討NR1對精神分裂癥海馬神經(jīng)發(fā)生...

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
材料和方法
    1 材料
        1.1 主要試劑
        1.2 RNAi重組慢病毒載體
        1.3 實驗動物
    2 方法
        2.1 逐孔稀釋法病毒滴度的測定
        2.2 海馬神經(jīng)干細胞的原代培養(yǎng)
        2.3 海馬神經(jīng)干細胞MOI值的確定
        2.4 慢病毒干擾海馬神經(jīng)干細胞NR1亞基
        2.5 Western Blot檢測海馬神經(jīng)干細胞NR1蛋白的表達
結(jié)果
    1慢病毒包裝及病毒滴度測定
    2 MOI值的測定
    3 海馬神經(jīng)干細胞的轉(zhuǎn)染效率
    4 海馬神經(jīng)干細胞NR1蛋白表達
討論



本文編號：4023310