發(fā)布時(shí)間：2024-12-21 22:05

　　阿爾茨海默癥(Alzheimer's disease,AD),俗稱老年癡呆癥,是一種慢性神經(jīng)退行性疾病。其發(fā)病機(jī)制極其復(fù)雜,目前尚未完全闡明,亦無(wú)有效的治療藥物,是一個(gè)棘手的社會(huì)和醫(yī)療問(wèn)題。AD有兩個(gè)典型的病理特征,分別是淀粉樣蛋白Aβ在胞外聚集形成的老年斑,以及過(guò)度磷酸化的tau蛋白在胞內(nèi)聚集形成的神經(jīng)纖維纏結(jié)。長(zhǎng)期以來(lái),無(wú)論是在臨床藥物開(kāi)發(fā)還是在基礎(chǔ)科學(xué)研究中,Aβ淀粉樣蛋白級(jí)聯(lián)假說(shuō)一直占據(jù)主要地位。然而與Aβ相比,tau蛋白的病理變化與臨床癥狀相關(guān)度更高,且由于靶向Aβ藥物的接連失敗,人們的注意力開(kāi)始轉(zhuǎn)向tau蛋白。Tau蛋白包括兩大主要結(jié)構(gòu)域:N-端的外伸結(jié)構(gòu)域和C-端的微管結(jié)合結(jié)構(gòu)域,后者決定了tau的生物學(xué)功能及AD病理發(fā)生。金屬離子如銅、鐵、鋅、鋁等的動(dòng)態(tài)平衡與AD的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),特別是Aβ聚集形成老年斑的過(guò)程和磷酸化tau蛋白聚集形成神經(jīng)纖維纏結(jié)的過(guò)程,此外金屬離子還與氧化應(yīng)激、突觸可塑性、神經(jīng)毒性、自噬和凋亡等機(jī)制有關(guān)。然而Zn2+離子與tau蛋白微管結(jié)合域第三段重復(fù)序列(tau-R3)的研究尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)。因此,論文的第一部分,是應(yīng)用一系列先進(jìn)的實(shí)驗(yàn)手段從分子、細(xì)...

【文章頁(yè)數(shù)】：155 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號(hào)說(shuō)明
引言
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 AD的重要性
    1.2 AD研究概況的可視化分析
        1.2.1 Citespace簡(jiǎn)介
        1.2.2 數(shù)據(jù)收集
        1.2.3 關(guān)鍵詞共現(xiàn)分析
        1.2.4 研究熱點(diǎn)和前沿趨勢(shì)分析
        1.2.5 核心作者共現(xiàn)圖譜分析
        1.2.6 高產(chǎn)研究機(jī)構(gòu)共現(xiàn)圖譜分析
    1.3 阿爾茨海默癥的發(fā)病機(jī)制
        1.3.1 淀粉樣蛋白級(jí)聯(lián)假說(shuō)
        1.3.2 Tau蛋白異常磷酸化假說(shuō)
        1.3.3 金屬離子代謝紊亂假說(shuō)
        1.3.4突觸損傷與AD
        1.3.5 線粒體功能障礙與AD
        1.3.6 自噬障礙與AD
    1.4 天然產(chǎn)物(中藥)對(duì)阿爾茨海默癥的防治作用
        1.4.1 中藥干預(yù)阿爾茨海默癥研究的可視化分析
        1.4.2 本論文選用的幾種代表性天然產(chǎn)物簡(jiǎn)介
    1.5 選題的意義和目的
第2章 金屬離子與tau-R3的作用機(jī)制研究
    2.1 引言
    2.2 材料
    2.3 方法
        2.3.1 等溫滴定量熱法
        2.3.2 紫外分光光度法
        2.3.3 硫磺素T熒光法
        2.3.4 圓二色譜法
        2.3.5 原子力顯微鏡觀察tau-R3的聚集形態(tài)
    2.4 結(jié)果
        2.4.1 金屬離子與tau-R3的結(jié)合
        2.4.2 金屬離子對(duì)tau-R3聚集的影響
        2.4.3 金屬離子對(duì)tau-R3二級(jí)結(jié)構(gòu)的影響
        2.4.4 原子力顯微鏡觀察tau-R3聚集體的形態(tài)
    2.5 討論
    2.6 小結(jié)
第3章 Zn²⁺+R3對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的作用機(jī)制研究
    3.1 引言
    3.2 材料
    3.3 方法
        3.3.1 主要試劑的配制方法
        3.3.2 細(xì)胞分組及前處理過(guò)程
        3.3.3 細(xì)胞系培養(yǎng)
        3.3.4 tau-R3-FITC和Zn²⁺+R3-FITC在N2A細(xì)胞中的定位
        3.3.5 細(xì)胞器熒光探針標(biāo)記
        3.3.6 Cell Counting Kit-8 (CCK-8)法檢測(cè)細(xì)胞活力
        3.3.7 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)ROS
        3.3.8 原代神經(jīng)元培養(yǎng)
        3.3.9 細(xì)胞免疫熒光
        3.3.10 免疫印跡試驗(yàn)
        3.3.11 線粒體超氧化物的檢測(cè)
        3.3.12 線粒體耗氧量測(cè)試
        3.3.13 線粒體膜電位檢測(cè)
    3.4 結(jié)果
        3.4.1 Zn²⁺加劇了tau-R3對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的毒性
        3.4.2 Zn²⁺+R3在細(xì)胞中的定位
        3.4.3 Zn²⁺+R3對(duì)神經(jīng)細(xì)胞tau病理的影響
        3.4.4 Zn²⁺+R3對(duì)神經(jīng)細(xì)胞神經(jīng)突觸的影響
        3.4.5 Zn²⁺+R3對(duì)神經(jīng)細(xì)胞線粒體的影響
        3.4.6 Zn²⁺+R3對(duì)神經(jīng)細(xì)胞自噬的影響
    3.5 討論
    3.6 小結(jié)
第4章 散發(fā)型AD小鼠模型的構(gòu)建
    4.1 引言
    4.2 材料
    4.3 方法
        4.3.1 小鼠分組與處理
        4.3.2 藥物的分組與制備
        4.3.3 鼠腦立體定位注射
        4.3.4 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)
        4.3.5 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)
        4.3.6 高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)
        4.3.7 新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)
        4.3.8 場(chǎng)景恐懼實(shí)驗(yàn)
        4.3.9 血脂和血糖水平的檢測(cè)
        4.3.10 冰凍切片
        4.3.11 神經(jīng)纖維纏結(jié)染色
        4.3.12 尼氏染色
        4.3.13 透射電鏡
        4.3.14 小鼠腦組織ATP的檢測(cè)
    4.4 結(jié)果
        4.4.1 Zn²⁺+R3對(duì)小鼠行為學(xué)認(rèn)知能力的影響
        4.4.2 生化指標(biāo)的檢測(cè)
        4.4.3 Zn²⁺+R3對(duì)小鼠腦組織tau病理的影響
        4.4.4 Zn²⁺+R3對(duì)小鼠腦組織神經(jīng)突觸的影響
        4.4.5 Zn²⁺+R3對(duì)小鼠腦組織線粒體的影響
    4.5 討論
    4.6 小結(jié)
第5章 中藥復(fù)方早期干預(yù)AD的研究
    5.1 引言
    5.2 材料
        5.2.1 小鼠模型與藥物
        5.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        5.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    5.3 方法
        5.3.1 小鼠分組與處理
        5.3.2 免疫熒光檢測(cè)小鼠腦內(nèi)Aβ的表達(dá)與分布
    5.4 結(jié)果
        5.4.1 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)小鼠的自發(fā)活動(dòng)與探索能力
        5.4.2 小鼠血清生化指標(biāo)的檢測(cè)
        5.4.3 小鼠腦內(nèi)Aβ病理相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)
        5.4.4 小鼠腦內(nèi)tau病理相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)
        5.4.5 小鼠腦內(nèi)突觸病理相關(guān)指標(biāo)的檢測(cè)
    5.5 討論
    5.6 小結(jié)
第6章 總結(jié)與展望
    6.1 總結(jié)
    6.2 展望
參考文獻(xiàn)
致謝
在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與取得的其他研究成果



本文編號(hào)：4018974