本文關(guān)鍵詞：硫化氫改善慢性束縛應(yīng)激誘導(dǎo)的小鼠海馬神經(jīng)元內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【作者】 ；

【導(dǎo)師】 聶亞雄； 唐小卿；

【作者基本信息】 南華大學(xué)， 神經(jīng)病學(xué)（專(zhuān)業(yè)學(xué)位）， 2015， 碩士

【摘要】 目的:慢性應(yīng)激已被證實(shí)參與了像抑郁癥這樣常見(jiàn)的精神疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。在我們前期的研究中,硫化氫(hydrogen sulfide,H2S)在慢性不可預(yù)知應(yīng)激誘導(dǎo)的大鼠海馬神經(jīng)元損傷及皮質(zhì)酮誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞損傷中均發(fā)揮著神經(jīng)保護(hù)作用。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmic reticulum stress,ER stress)也被公認(rèn)是慢性應(yīng)激所致學(xué)習(xí)記憶損傷的重要機(jī)制之一;沉默信息調(diào)節(jié)2同源物1(silent mating type information regulator 2 homolog 1,SIRT-1)和腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)在急性和慢性神經(jīng)系統(tǒng)疾病的神經(jīng)保護(hù)作用均得到廣泛報(bào)道。因此,我們推測(cè)硫化氫是否可通過(guò)調(diào)節(jié)SIRT1和/或BDNF-Trk B通路實(shí)現(xiàn)對(duì)慢性束縛應(yīng)激小鼠海馬神經(jīng)元內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的調(diào)控。本文旨在探討慢性束縛應(yīng)激(chronic restraint stress,CRS)對(duì)小鼠海馬神經(jīng)元的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,內(nèi)源性硫化氫的生成,SIRT1及BDNF-Trk B通路的影響;并研究硫化氫在慢性束縛應(yīng)激引起的神經(jīng)損傷中所發(fā)揮的作用。方法:1.將昆明小鼠隨機(jī)分為6組(15只/組):包括對(duì)照組,CRS組,CRS+低濃度的硫氫化鈉(sodium hydrosulfide,Na HS)(30μM/kg)組,CRS+中濃度硫氫化鈉(60μM/kg)組,CRS+高濃度的硫氫化鈉(100μM/kg)組,和CRS+丙咪嗪(imipramine,Imip)(30mg/kg)組;除對(duì)照組外,其余各組小鼠均予以每日3小時(shí),連續(xù)4周,束縛于約50ml大小注射器中以建立慢性束縛應(yīng)激(chronic restraint stress,CRS)模型,硫氫化鈉及丙咪嗪均于CRS前半小時(shí)通過(guò)腹腔注射給予小鼠。2.采用western blot方法檢測(cè)慢性應(yīng)激小鼠海馬神經(jīng)元中CBS,3-MST,CHOP,GRP-78,SIRT1,BDNF,Trk B的表達(dá)水平。結(jié)果:1.慢性束縛應(yīng)激可誘導(dǎo)小鼠海馬神經(jīng)元的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。慢性束縛應(yīng)激4周后,小鼠海馬神經(jīng)元中的C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)和葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(78-k Da glucose-regulated protein,GRP78)的表達(dá)較對(duì)照組明顯增加。這提示慢性束縛應(yīng)激可誘導(dǎo)小鼠海馬神經(jīng)元內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。2.慢性束縛應(yīng)激可抑制小鼠海馬神經(jīng)元內(nèi)源性硫化氫生成。慢性束縛應(yīng)激4周后,小鼠海馬神經(jīng)元中胱硫醚-β-合酶(cystathionine beta synthase,CBS)和3-巰基丙酮酸硫轉(zhuǎn)移酶(3-mercaptopyruvate sulfurtransferase,3-MST)的表達(dá)水平明顯下降。這提示慢性束縛應(yīng)激可下調(diào)小鼠海馬神經(jīng)元內(nèi)源性硫化氫生成。3.硫化氫可抑制慢性束縛應(yīng)激誘導(dǎo)的小鼠海馬神經(jīng)元內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。在慢性束縛應(yīng)激30分鐘前,分別予以腹腔注射30,60,100μM/Kg的硫氫化鈉和30mg/Kg的丙咪嗪的處理后,小鼠海馬神經(jīng)元中CHOP及GRP-78的表達(dá)呈濃度依賴(lài)性地下降,且100μM/Kg的硫氫化鈉和30mg/Kg的丙咪嗪處理組CHOP及GRP-78的表達(dá)幾乎恢復(fù)至對(duì)照組水平。這提示硫化氫的神經(jīng)保護(hù)作用可能與其抑制慢性束縛應(yīng)激誘導(dǎo)的小鼠海馬神經(jīng)元內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激有關(guān)。4.硫化氫可改善慢性束縛應(yīng)激對(duì)小鼠海馬神經(jīng)元SIRT1表達(dá)的抑制。在慢性束縛應(yīng)激30分鐘前,分別予以腹腔注射30,60,100μM/Kg的硫氫化鈉和30mg/Kg的丙咪嗪的處理后,小鼠海馬神經(jīng)元中SIRT1的表達(dá)水平呈濃度依賴(lài)性地上升,且100μM/Kg的硫氫化鈉和30mg/Kg的丙咪嗪處理后SIRT1的表達(dá)幾乎較單純束縛應(yīng)激組增加了近30%。提示硫化氫具有拮抗慢性束縛應(yīng)激對(duì)SIRT1表達(dá)的抑制的作用;同時(shí)也提示,硫化氫有可能通過(guò)上調(diào)SIRT1從而拮抗慢性束縛應(yīng)激誘導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。5.硫化氫可改善慢性束縛應(yīng)激對(duì)小鼠海馬神經(jīng)元BDNF-Trk B通路的抑制。在慢性束縛應(yīng)激30分鐘前,分別予以腹腔注射30,60,100μM/Kg的硫氫化鈉和30mg/Kg的丙咪嗪的處理后,小鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞中BDNF-Trk B的表達(dá)水平呈濃度依賴(lài)性地上升,且100μM/Kg的硫氫化鈉和30mg/Kg的丙咪嗪處理后BDNF-Trk B的表達(dá)幾乎恢復(fù)至對(duì)照組水平,提示硫化氫可上調(diào)慢性束縛應(yīng)激對(duì)BDNF-Trk B通路的抑制。這同樣提示,硫化氫可能是通過(guò)上調(diào)BDNF-Trk B通路改善慢性束縛應(yīng)激誘導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。結(jié)論:硫化氫改善慢性束縛應(yīng)激誘導(dǎo)的小鼠海馬神經(jīng)元內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,其機(jī)制可能與其上調(diào)SIRT1和BDNF-Trk B通路有關(guān)。更多還原

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