發(fā)布時間：2020-11-03 17:15

　　 目的:探討水通道蛋白-4(Aquapofins-4,AQP4)和神經元素-3(Neurogenin3,Ngn3)在創(chuàng)傷性腦損傷(Traumatic brain injury,TBI)后腦組織中的表達及分布,探索其在創(chuàng)傷性腦損傷中的作用及調控機制,為創(chuàng)傷性腦損傷后腦水腫的預防及臨床治療以及神經再生與神經功能恢復的研究提供實驗室依據。方法:隨機將30只健康成年SD大鼠(雌雄均有、體質量280-300g)分為正常對照組(5只)和創(chuàng)傷性腦損傷模型組(25只),模型組再分為5個亞組(每組5只)。10%的水合氯醛3.5 ml/Kg腹腔麻醉后,采用自制改良的marmarou自由落體打擊器撞擊大鼠頭部,建立大鼠創(chuàng)傷性腦損傷模型(TBI),分別于6h、1d、2d、5d、7d收集模型組腦組織及正常對照組腦組織進行組織學處理,模型組與正常對照組均采用免疫組織化學SABC法染色觀察AQP4和Ngn3在腦組織中的表達及分布,Western-blot檢測AQP4、Ngn3蛋白在創(chuàng)傷性腦損傷后腦組織中的表達及變化。結果:AQP4在正常大鼠腦組織中不表達或表達較弱,陽性反應主要分布在腦組織中的血管內皮及膠質細胞;Ngn3在正常大鼠腦組織主要表達于室管膜上皮。TBI模型組6 h時,AQP4在腦組織內的表達無明顯變化,和正常對照組比較,無統計學差異(P0.05),1 d時AQP 4大量表達于髓質、毛細血管內皮及神經膠質,2 d時表達開始下降,5 d時表達再次出現高峰,1 d后AQP4在模型組的表達與正常對照組相比,差異具有統計學意義(P0.05)。模型組6 h時,大腦皮質可見少量的Ngn3陽性神經元,局灶性聚集或散在分布,1 d時海馬區(qū)出現少量未分化的大顆粒細胞呈Ngn3陽性,5 d時海馬區(qū)Ngn3陽性細胞數量達到高峰,高表達狀態(tài)持續(xù)至第7 d,模型組各時段Ngn3的表達與正常對照組比較存在差異,并具有統計學意義(P0.05)。結論:AQP4在創(chuàng)傷性腦損傷中的表達水平直接影響著與腦水腫的程度,對腦水腫的發(fā)生、發(fā)展具有重要的調控作用,在腦水腫的預防和靶向治療上具有重要的臨床意義;創(chuàng)傷性腦損傷后,Ngn3在皮質區(qū)神經元呈短暫性表達,可能與腦損傷的應激及神經元損傷有關,海馬區(qū)未分化的大顆粒細胞可能為神經干細胞,其分化可能參與腦損傷后的神經元再生。
【學位單位】：大理大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R651.15
【部分圖文】：

玻璃導管被牢固固定于鐵支架臺上，頂端安置一個定滑輪裝置，玻璃導管下方離實驗臺面 15 cm 處放置金屬承重臺及麻醉后實驗大鼠。細魚絲線懸吊砝碼使其底部處于水平狀，底面與大鼠頭部擺放部位相平行，以保證打擊時撞擊面處于水平。大鼠頭頂部固定 頭盔 ，可避免局部顱骨損傷，同時可以使砝碼對大鼠頭顱的打擊力呈彌散分布，造成大腦組織彌散損傷。所有實驗動物均選擇 10% 的水合氯醛 3.5 ml/Kg 腹腔麻醉，模型組根據傷后時間 6h，1d，2d，5d，7d 麻醉后斷頸處死取材（腦組織），每個時間點另取1 只 SD 大鼠作為正常對照組麻醉后斷頸處死取材（腦組織），一部分采用 10%的中性福爾馬林固定液固定，一部分置于消毒凍存管凍存于 -86℃ 冰箱保存。圖 1 創(chuàng)傷性腦損傷模型打擊裝置Fig 1 Strike device of traumatic brain injury model

大理大學碩士學位論文第 3 章 結 果3.1 形態(tài)學觀察3.1.1 大體形態(tài)觀察正常對照組大腦形態(tài)完整，色澤明亮，被膜下無點狀出血，血管走行及質的溝回紋理清晰（圖 2A）；模型組大腦形態(tài)完整，色澤暗紅，可見腦實血、呈水腫樣，局部有腦實質挫裂傷改變，血管走行及腦實質溝回紋理模糊2B）。

可見腦實質充血、呈水腫樣，局部有腦實質挫裂傷改變，血管走行及腦實質溝回紋理模糊（圖2B）。3.1.2 顯微形態(tài)觀察H-E 染色后顯微鏡下觀察，正常對照組大腦皮質及海馬區(qū)組織清晰、結構完整，神經元密集、排列整齊，神經細胞胞漿豐富，胞質染色淡，細胞核居中，核仁明顯，海馬區(qū)顆粒層邊緣可見少量未分化的大顆粒細胞，胞漿豐富（圖3A-B）。 TBI 模型組大腦皮質和海馬區(qū)結構神經細胞排列凌亂，神經細胞數量圖 2A 正常對照組大鼠腦外觀形態(tài)。Fig 2A Brain appearance of normalcontrol group rats.圖 2B TBI 模型組（1 d）大鼠腦外觀形態(tài)，“↑”示腦挫裂區(qū)。Fig 2B Brain appearance of TBI rats modelafter 1d. “↑” showing contusion andlaceration of brain.AB
【參考文獻】

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1 陳梅花;陳貴珍;賈萬鈞;孫汝亮;胡丙杰;;改良大鼠彌漫性腦損傷實驗模型[J];中國比較醫(yī)學雜志;2013年07期

2 張巧梅;謝亞寧;王強;;Neurogenin基因家族對疾病治療前景的研究進展[J];中華神經外科疾病研究雜志;2013年02期

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本文編號：2868861