背景及目的:誘導(dǎo)終末分化的細(xì)胞發(fā)生重編程,實(shí)現(xiàn)逆生長,重新獲得全能性而成為誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(iPSCs)是科學(xué)史上的一項(xiàng)重大突破。iPSCs與胚胎干細(xì)胞相似,具有自我更新和多向分化的潛能,并且不存在免疫排斥和倫理問題,具有很好的研究及應(yīng)用前景。但目前,誘導(dǎo)多能干細(xì)胞的臨床應(yīng)用仍存在技術(shù)瓶頸,如誘導(dǎo)效率、安全問題等,重編程的機(jī)制也并不完全清楚。因此,深入研究細(xì)胞重編程的分子機(jī)制,探索決定細(xì)胞命運(yùn)的關(guān)鍵因素,有助于獲得更高效、更安全的誘導(dǎo)技術(shù)體系,對誘導(dǎo)多能干細(xì)胞將來的臨床應(yīng)用具有十分重要的意義。長鏈非編碼RNA(long noncoding RNA,lncRNA)在表觀調(diào)控、轉(zhuǎn)錄調(diào)控等多個(gè)層面上參與編碼蛋白基因的調(diào)控,已經(jīng)被認(rèn)為是一種維持多能干細(xì)胞干性與分化能力的新的分子機(jī)制,并且lncRNA以其獨(dú)特的表觀遺傳學(xué)機(jī)制影響著細(xì)胞的命運(yùn)。本研究篩選出一個(gè)與多能干性基因Oct4啟動(dòng)子結(jié)合,與重編程相關(guān)的lncRNA-Osclr8(Oct4-Sox2 coating long noncoding RNA 8),其僅在iPSCs中表達(dá),而在成纖維細(xì)胞中不表達(dá),將其敲低后,干細(xì)胞發(fā)生分化,撤出多能性。這...

【文章頁數(shù)】：113 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖1.1人體發(fā)育過程中多能干細(xì)胞的變化

iPSCs）和成體干細(xì)胞（adultstemcells）等。根據(jù)干細(xì)胞的分化能力，可以將干細(xì)胞分為以下幾類[1]（如圖1.1）：（1）全能干細(xì)胞（totipotentstemcells），可分裂分化發(fā)育成一個(gè)完整生物個(gè)體，具有最高的分化潛能，如受精卵，受精卵形成大約4天....

圖3.2染色質(zhì)-lncRNA原位逆轉(zhuǎn)錄捕獲測序（CRIST-seq）原理圖

lncRNA（如圖3.2）。因?yàn)榧せ頞ct4這個(gè)主要干細(xì)胞因子是體細(xì)胞重編程以及多能干性維持的所必須的。我們假設(shè)這個(gè)主要核心因子的啟動(dòng)子染色質(zhì)區(qū)域有很多元件與其相互作用，特別是在重編程過程中可能有很多l(xiāng)ncRNA被活化，可能會(huì)參與染色質(zhì)重塑的過程。因此我們設(shè)計(jì)了兩條Oc....

圖3.3Cas9-gRNA特異性結(jié)合Oct4的驗(yàn)證

證Cas9-gRNA結(jié)合Oct4的特異性ST-seq是通過實(shí)驗(yàn)來確定我們設(shè)計(jì)的Cas9-gRNA能夠準(zhǔn)確的結(jié)Oct4啟動(dòng)子區(qū)域，因此以隨機(jī)gRNA以及空質(zhì)粒作為陰性對NA一起構(gòu)建質(zhì)粒、病毒包裝，進(jìn)行上述實(shí)驗(yàn)，最后進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)PCR的方法檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn)Ca....

圖3.4與Oct4相結(jié)合的lncRNA示意圖

吉林大學(xué)博士學(xué)位論文FigureA:wedesignprimerstotestthespecificityoftheCRISTtargeting.WechosepOct4targetingsiteandothersite,including....

本文編號：4050678