目的觀察體外原代培養(yǎng)大鼠心臟微血管內(nèi)皮細胞內(nèi)PKC/NADPH氧化應(yīng)激途徑在eNOS脫偶聯(lián)中的作用。方法用牛血清白蛋白糖基化終末產(chǎn)物(BSA-AGEs)(100 mg/L)與LY33531(PKC抑制劑)和DPI(NADPH抑制劑)分別作用大鼠心臟微血管內(nèi)皮細胞(24 h),HPLC法檢測BH4,試劑盒檢測NO和O2-生成,免疫組化檢測eNOS蛋白表達,Western blot法檢測P47phox蛋白表達。結(jié)果隨著LY33531和DPI濃度(5、10和20μmol/L)的增加,eNOS脫偶聯(lián)狀態(tài)減輕:NO生成逐漸增加(90.7±0.3～122.6±0.3,160.6±0.6,P<0.05),而O2-生成逐漸減少(P<0.05),eNOS表達逐漸減少(126.1±3.5～112.6±1.7,114.4±1.8,P<0.05),而BH4含量逐漸增加(P<0.05)。同時,ROS表達和P47phox表達減少(P<0.05)。結(jié)論 NADPH氧化應(yīng)激途徑可能參與AGEs誘導(dǎo)的心臟微血管內(nèi)皮細胞eNOS脫偶聯(lián)的發(fā)生。而AGEs誘導(dǎo)的心臟微血管內(nèi)皮細胞內(nèi)NADPH氧化...

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圖1大鼠心臟微血管內(nèi)皮細胞原代培養(yǎng)Fig1Theprimarycultureofcardiacmicrovascular

的DCF。用無血清的培養(yǎng)基清洗細胞兩次，再加入DCFH-DA(1∶1000稀釋)，37℃孵育箱中孵育20min后胰蛋白酶消化，1mL無血清的培養(yǎng)基重懸細胞，熒光顯微鏡觀察細胞內(nèi)ROS的熒光強度。1.10Westernblot測定P47phox具體步驟略。實驗結(jié)果采用eNOS/β-....

圖2AGEs和DPI對心臟微血管內(nèi)皮細胞eNOS表達的影響

成永霞PKC/NADPH氧化應(yīng)激途徑對大鼠心臟微血管內(nèi)皮細胞eNOS脫偶聯(lián)的影響A.showedAGEs100mg/Lgroup;B.showedDPI10μmol/Lgroup(×200)圖2AGEs和DPI對心臟微血管內(nèi)皮細胞eNOS表達的影響Fig2EffectsofAGE....

圖3AGEs和LY33531對心臟微血管內(nèi)皮細胞

基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床Basic＆ClinicalMedicine2013.33(1)*P＜0.01compairedwithcontrol;#P＜0.05，##P＜0.01compairedwithAGEs圖3AGEs和LY33531對心臟微血管內(nèi)皮細胞ROS表達的影響Fig3Effe....

圖4AGEs和LY33531對心臟微血管內(nèi)皮細胞P47phox蛋白表達的影響

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