發(fā)布時(shí)間：2025-02-15 11:21

　　目的:初步探究柯薩奇病毒B組3型（Coxsackies virus,CVB3）的結(jié)構(gòu)蛋白VP2對心肌細(xì)胞的影響,為研究CVB3引起病毒性心肌炎的致病機(jī)制提供理論基礎(chǔ)。方法:1.以CVB3病毒RNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,PCR擴(kuò)增VP2基因,同時(shí)構(gòu)建蛋白融合表達(dá)質(zhì)粒pCAG-2Strep-Flag-VP2,pCAG-2Strep-Flag-VP2-APEX2和腺病毒載體pAdTrack-2Strep-Flag-VP2,pAdTrack-2Strep-Flag-VP2-APEX2,并包裝成重組腺病毒顆粒Ad-VP2和Ad-VP2-APEX2,擴(kuò)增后測定重組腺病毒顆粒的滴度;2.原代心肌細(xì)胞的提取:取新生SD大鼠（1-3天）心肌組織,研磨至1-3mm³的組織塊,用0.1%的胰酶消化8-10次,每次10分鐘,離心收集細(xì)胞,差速貼壁2h后獲得搏動(dòng)的心肌細(xì)胞;3.以Ad-VP2（MOI=10）感染心肌細(xì)胞后觀察光學(xué)顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)變化;4.通過CCK8方法檢測Ad-VP2（MOI=10）感染心肌細(xì)胞后0 h,24 h,48h,72 h的細(xì)胞增殖變化;5.Ad-VP2-APE...

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.4APEX2系統(tǒng)篩選相互作用蛋白流程圖

圖1.4APEX2系統(tǒng)篩選相互作用蛋白流程圖Fig1.4TheprotocolforscreeningtheinteractingproteinoftargetproteinbyAEPX2.1.5S100A6蛋白S100蛋白家族是一種Ca2+....

圖1.6技術(shù)路線

第1章引言作為腫瘤診斷的標(biāo)志物[53]。與此同時(shí)，S100A6也被證實(shí)與多種心血管疾病相，在急性冠脈綜合征中，S100A6表達(dá)顯著高于正常對照組。TNF-α可以通過-κB途徑誘導(dǎo)S100A6的表達(dá)，S100A6使p53磷酸化產(chǎn)生抑制心肌細(xì)胞凋亡作用[54]....

圖2.2.2.1腺病毒重組質(zhì)粒的構(gòu)建及重組腺病毒的制備Figure2.2.2.1Theprocdureofconstructiontheadenoviralrecombinantplasmidandproductionofrecombinantadenovirus.

14圖2.2.2.1腺病毒重組質(zhì)粒的構(gòu)建及重組腺病毒的制備Figure2.2.2.1Theprocdureofconstructiontheadenoviralrecombinantplasmidandproductioofrecombinantad....

圖3.1.1.1PCR擴(kuò)增VP2和APEX2基因Fig3.1.1.1AmplicationofVP2andAPEX2genesbyPCR.(A)VP2.(B)APEX2.M:2kbDNALadder.

第3章結(jié)果第3章結(jié)果組腺病毒Ad-VP2-APEX2和Ad-VP2的構(gòu)建與表達(dá)重組腺病毒載體的構(gòu)建.構(gòu)建重組質(zhì)粒pCAG-2Strep-Flag-VP2-APEX2和pCAG-2Strep-FlaB3cDNA和本實(shí)驗(yàn)室質(zhì)粒pCDNA3.1(-)-....

本文編號：4034230