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慢病毒介導shRNA沉默hnRNPA2/B1基因對宮頸癌細胞化療敏感性的影響及作用機制初探

發(fā)布時間:2024-07-06 05:50
  目的:分析不均一核糖核蛋白A2/B1(heterogeneous nuclear ribonucleoproteinA2/B1,hnRNPA2/B1)基因對宮頸癌細胞的平板克隆形成、轉移、侵襲能力和增殖能力、細胞周期的影響;以及探討其改變宮頸癌細胞化療藥物敏感性及作用機制。方法:設計含有hnRNPA2/B1 shRNA(short hairpin RNA,shRNA)干擾序列4對、陰性對照1對。構建含靶向hnRNPA2/B1 shRNA的重組慢病毒質粒,并穩(wěn)定轉染Caski細胞、Hela細胞,qRT-PCR檢測hnRNPA2/B1 mRNA表達水平,Western blot檢測hnRNPA2/B1蛋白表達水平;分別用平板克隆形成實驗、劃痕實驗、細胞侵襲實驗檢測細胞的生物功能;MTT比色法檢測細胞的增殖能力、洛鉑(Lobaplatin)作用于細胞的IC50、伊立替康(Irinotecan Hydrochloride)作用于細胞的IC50;流式細胞術分析hnRNPA2/B1基因沉默后細胞周期以及洛鉑、伊立替康對細胞凋亡作用的改變;用qRT-PCR和Western blot檢測相關基因bax...

【文章頁數(shù)】:70 頁

【學位級別】:碩士

【部分圖文】:

圖1.pGMLV-SC1RNAi慢病毒載體圖譜

圖1.pGMLV-SC1RNAi慢病毒載體圖譜

貴州醫(yī)科大學2016屆科學學位碩士研究生學位論文CaSki細胞,中文名稱人宮頸癌腸轉移細胞,形態(tài)上皮細胞,購自中院細胞庫。含有完整的HPV-16(每個細胞大約600個拷貝)和HPV-18相HeLa細胞,中文名稱人宮頸癌細胞,形態(tài)上皮細胞,購自中國科學庫。含有人乳....


圖2慢病毒干擾載體的序列對比圖譜

圖2慢病毒干擾載體的序列對比圖譜

NC-ShNRA序列對比圖2慢病毒干擾載體的序列對比圖譜Fig.2mapofSequencelentiviralinterferedvectorShNRA-1序列對比ShNRA-2序列對比


圖3慢病毒干擾載體的序列對比圖譜

圖3慢病毒干擾載體的序列對比圖譜

NC-ShNRA序列對比圖2慢病毒干擾載體的序列對比圖譜Fig.2mapofSequencelentiviralinterferedvectorShNRA-1序列對比ShNRA-2序列對比


圖4慢病毒shRNA感染細胞熒光照片

圖4慢病毒shRNA感染細胞熒光照片

圖4慢病毒shRNA感染細胞熒光照片AhnRNPA2/B1-shRNA1一號孔,BhnRNPA2/B1-shRNA1六號孔,ChnRNPA2/B1-shR一號孔.DhnRNPA2/B1-shRNA2六號孔,EhnRNPA2/B1-shRNA3一號孔,F(xiàn)hnR....



本文編號:4002155

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