發(fā)布時(shí)間：2020-11-21 07:55

　　 目的:中電導(dǎo)鈣激活鉀離子通道(KCa3.1)在宮頸組織中的表達(dá)上調(diào)與宮頸鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生及發(fā)展有密切的關(guān)系,探討抑制元件l沉默轉(zhuǎn)錄因子(repressor element 1silencing transcription factor,REST)又稱為神經(jīng)元限制性沉默因子(neuron restrictive silencing factor,NRSF)在宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中表達(dá)及其對(duì)中電導(dǎo)鈣激活鉀離子通道(KCa3.1)的影響,初步研究宮頸鱗狀細(xì)胞癌中KCa3.1上調(diào)機(jī)制。方法:通過查閱整理數(shù)據(jù)庫(NCBI、UCSC、Bio GPS)了解REST在不同組織中的表達(dá)情況,分析REST在不同組織以及宮頸組織中的表達(dá)情況。通過收集宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織、癌旁組織和正常宮頸組織,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)的方法檢測不同組織中REST與KCa3.1的mRNA表達(dá)量,采用免疫組織化學(xué)方法檢測不同組織中REST蛋白的表達(dá)水平。使用染色質(zhì)免疫沉淀(ChIP)和定量PCR方法檢測REST是否能在KCa3.1啟動(dòng)子區(qū)抑制元件1(Repressor Element l,RE1)位點(diǎn)處富集以及相應(yīng)的程度。結(jié)果:通過分析整理數(shù)據(jù)庫發(fā)現(xiàn)REST在分化成熟的神經(jīng)組織中低表達(dá),在正常非神經(jīng)組織中高表達(dá),在正常的宮頸組織中REST的表達(dá)較高。qRT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織、癌旁組織、正常宮頸組織中RESTmRNA相對(duì)表達(dá)量分別為0.46±0.06、0.89±0.13、1.00±0.12;宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中RESTmRNA相對(duì)表達(dá)量較癌旁組織和正常宮頸組織分別下降48%、54%。宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織、癌旁組織、正常宮頸組織中KCa3.1mRNA表達(dá)量分別為2.14±0.35、1.18±0.21、1.00±0.13;宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中KCa3.1mRNA表達(dá)量較癌旁組織和正常宮頸組織分別上升81%、114%。RESTmRNA表達(dá)量在宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中較癌旁組織及正常宮頸組織明顯降低(P0.05),KCa3.1mRNA表達(dá)量在宮頸鱗狀細(xì)胞癌中較癌旁組織及正常宮頸組織明顯增加(P0.05)。免疫組織化學(xué)發(fā)現(xiàn)在細(xì)胞漿與細(xì)胞核處均能觀察到REST蛋白陽性反應(yīng),在正常宮頸組織中均檢測到REST蛋白不同程度的表達(dá),陽性率為100%,宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中REST蛋白的陽性率為40%,REST蛋白表達(dá)量在宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中較正常宮頸組織明顯降低(P0.05)。ChIP-qPCR發(fā)現(xiàn)REST能結(jié)合在KCa3.1啟動(dòng)子區(qū)RE1位點(diǎn)處,REST在正常宮頸組織、癌旁組織、宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中RE1位點(diǎn)處的富集量分別為0.41±0.03、0.36±0.041、0.16±0.008;REST在宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中的富集量相比正常宮頸組織下降了約60.1%,相比癌旁組織下降了約56%。REST在宮頸鱗狀細(xì)胞癌中富集的量要顯著低于正常宮頸組織和癌旁組織(P0.05)。結(jié)論:宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中REST的表達(dá)較正常宮頸組織及癌旁組織均有明顯降低,REST可以通過與KCa3.1啟動(dòng)子RE1位點(diǎn)處結(jié)合負(fù)調(diào)控KCa3.1表達(dá)。前期研究結(jié)果顯示KCa3.1在宮頸癌中表達(dá)量上升,促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞生長,增加宮頸癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力,因此宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織REST表達(dá)下調(diào)導(dǎo)致其對(duì)KCa3.1基因表達(dá)的抑制減弱,導(dǎo)致KCa3.1基因表達(dá)量上升,增強(qiáng)KCa3.1鉀離子通道的活性,促進(jìn)宮頸鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞生長、侵襲和轉(zhuǎn)移。
【學(xué)位單位】：西南醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R737.33
【部分圖文】：

西 南 醫(yī) 科 大 學(xué) 碩 士 學(xué) 位 論 文結(jié) 果1 查閱整理不同數(shù)據(jù)庫中 REST 基因的表達(dá)查閱整理不同數(shù)據(jù)庫得出 REST 基因在不同組織中的表達(dá)情況如圖 1所示。REST 在正常非神經(jīng)組織（結(jié)腸、腎上腺、肝臟、肺、卵巢、腎臟、子宮、乳腺、宮頸）中高表達(dá)，在分化成熟的神經(jīng)組織（大腦、小腦、大腦皮層、下丘腦）中低表達(dá)，在正常宮頸組織中高表達(dá)。

西 南 醫(yī) 科 大 學(xué) 碩 士 學(xué) 位 論 文表 2 RNAOD260/280 值及濃度Table 2 RNAOD260/280 value and concentration泳A 瓊脂糖電泳如 3 所示，圖中 28S 和 18S 條帶明亮、清晰 條帶最淡，表明提取的 RNA 無明顯降解，可用于后續(xù)試樣品 OD260/280 濃度(ng/μl)鱗狀細(xì)胞癌織組織（CC） 1.98 190.9癌旁組織(AT) 1.80 216.4正常宮頸組織(NC) 1.88 247.3

圖 4 A RESTmRNA 相對(duì)表達(dá)量 B KCa3.1mRNA 相對(duì)表達(dá)量宮頸鱗狀細(xì)胞癌（CC）、癌旁組織(AT)、正常宮頸組織(NC)，*，P<0.05。Figure 4 A relative expression of REST mRNA；B relative expression of RESTmRNA Cervical squamous cell carcinoma (CC), paracancer tissue (AT), normal cervicaltissue (NC), *, P<0.053 免疫組織化學(xué)檢測 REST 蛋白的表達(dá)情況3.1 IKCa3.1 蛋白的表達(dá)情況課題組前期采用免疫組化檢測 30 例宮頸癌組織及 18 例正常宮頸組織中 IKCa3.1 的表達(dá)情況如圖 5，結(jié)果顯示：IKCa3.1 主要分布在細(xì)胞核和細(xì)胞膜上（圖中 5 箭頭處），在宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中 IKCa3.1 蛋白的陽性率為 100%，正常宮頸組織中 IKCa3.1 的陽性率 5.56%，宮頸鱗狀細(xì)胞癌組織中 IKCa3.1 蛋白的表達(dá)較正常宮頸組織明顯升高(P＜0.05)[13]。
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