發(fā)布時(shí)間：2020-11-16 21:34

　　 背景:由于各種社會(huì)因素,高齡產(chǎn)婦所占比例逐年增加,伴隨而來(lái)的是生育能力的降低,其中女性的卵巢功能降低、卵泡數(shù)量減少、卵泡質(zhì)量下降是其中的重要原因。卵泡是卵子發(fā)生的場(chǎng)所,卵母細(xì)胞經(jīng)過(guò)卵子發(fā)生的過(guò)程才能具有受精能力。卵泡發(fā)育異常會(huì)直接影響到卵母細(xì)胞的生長(zhǎng)、成熟、受精及胚胎發(fā)育。本文通過(guò)模型動(dòng)物即10-12月齡BDF1雌鼠模擬38-42.5周歲的高齡產(chǎn)婦,為其生育能力的研究提供借鑒和參考。方法:為了研究高齡小鼠與年輕小鼠之間存在的繁殖能力差異,分別從生理學(xué)、組織學(xué)、細(xì)胞學(xué)、發(fā)育生物學(xué)、表觀遺傳及分子生物學(xué)等方面進(jìn)行了對(duì)比分析。通過(guò)觀測(cè)發(fā)情周期、測(cè)定生殖激素含量研究了其生理學(xué)差異;利用組織學(xué)切片研究了雌鼠生殖器官的組織學(xué)差異;利用免疫熒光技術(shù),通過(guò)激光共聚焦顯微鏡,對(duì)比研究了染色質(zhì)構(gòu)型、細(xì)胞凋亡及線粒體分布等細(xì)胞學(xué)差異;用亮甲酚藍(lán)(Bright cresyl blue,BCB)染色檢測(cè)其細(xì)胞代謝活性,用孤雌激活、RT-qPCR及體細(xì)胞核移植技術(shù)對(duì)比研究了重編程及發(fā)育潛能;用免疫熒光分析H3K36me3的表達(dá),研究表觀遺傳差異。結(jié)果:與年輕小鼠相比,高齡小鼠的發(fā)情周期明顯縮短(Aged=3.31±0.10 d,Young=4.78±0.16 d,P0.05),同時(shí)也存在輸卵管結(jié)構(gòu)紊亂、上皮組織脫落和上皮空泡退化的現(xiàn)象;兩組小鼠存在凋亡程度和線粒體分布的顯著差異;但是采用體內(nèi)成熟卵檢測(cè)的核重編程能力和發(fā)育潛能結(jié)果表明,兩組之間并無(wú)顯著性差異(P0.05);高齡小鼠H3K36me3修飾異常(P0.05);高齡小鼠體內(nèi)成熟卵Oct4表達(dá)有顯著性差異(P0.05),而Cdx2、Nanog、Sox17的表達(dá)未出現(xiàn)差異顯著性。在卵子發(fā)生過(guò)程中,Germinal vesicle(GV)卵母細(xì)胞被分為兩種構(gòu)型,即染色質(zhì)彌散分布的Non-surrounded nucleolus(NSN)構(gòu)型,和染色質(zhì)凝縮并圍繞核仁分布的Surrounded nucleolus(SN)構(gòu)型。通過(guò)對(duì)未成熟卵進(jìn)一步細(xì)分,我們發(fā)現(xiàn),高齡小鼠的SN構(gòu)型卵母細(xì)胞表現(xiàn)出顯著的線粒體凝集,細(xì)胞凋亡和異常的H3K36me3,而NSN構(gòu)型卵母細(xì)胞除了凋亡程度有差異外幾乎沒(méi)有受到影響。總之,研究結(jié)果表明,雖然在高齡雌性小鼠中較低的E2含量導(dǎo)致發(fā)情周期縮短和卵泡質(zhì)量下降,導(dǎo)致未成熟卵母細(xì)胞質(zhì)量降低,特別是在SN型卵母細(xì)胞中,但是卵母細(xì)胞的發(fā)育潛能在高齡雌性小鼠中是正常的。這可能為高齡女性生殖帶來(lái)了新的希望,為輔助生殖提供了新的研究策略。
【學(xué)位單位】：阜陽(yáng)師范學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R714.8
【部分圖文】：

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【參考文獻(xiàn)】

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1 喬利敏;亮甲酚藍(lán)（BCB）染色法預(yù)測(cè)牛卵母細(xì)胞未來(lái)發(fā)育能力的研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

本文編號(hào)：2886696