骨形態(tài)發(fā)生蛋白-9對人卵巢黃素化顆粒細胞增殖功能影響的研究
發(fā)布時間：2020-11-16 15:04
骨形態(tài)發(fā)生蛋白9(Bone morphogenetic protein 9,BMP-9)已被鑒定為在各種組織中調節(jié)細胞的增殖,凋亡和分化。然而,其在人卵母細胞成熟調節(jié)網絡中的作用及其與卵泡刺激素(Follicle stimulation hormone,FSH)的關系仍然知之甚少。在這里,我們探討了BMP-9對體外人卵巢黃體化顆粒細胞增殖的影響,并研究了BMP-9對FSH誘導的顆粒細胞增殖和類固醇激素合成影響的潛在機制。通過CCK-8試劑和EdU分析觀察BMP-9對顆粒細胞增殖作用。利用RT-PCR及Westernblot技術測定FSH在顆粒細胞BMP-9刺激下誘導的相關mRNA,蛋白質水平。CCK-8結果顯示,培養(yǎng)基中加入BMP-9上調顆粒細胞增殖,并表現劑量100 ng/ml(3.52±0.17倍,P0.05)和時間依賴性48小時(0.20±0.11,0.46±0.10,P0.05)。BMP-9與FSH聯合培養(yǎng)組EdU標記細胞比例大于FSH單獨培養(yǎng)組(3±0.82,5±0.67,P0.01)。此外,與觀察到的CCK-8細胞活力趨勢和EdU測定一致,BMP-9以劑量依賴性方式增加PCNA的mRNA水平(P0.05),并且增加FSH誘導的PCNA mRNA的表達。與FSH組相比,Westernblot結果顯示BMP-9聯合FSH培養(yǎng)組中,FSHR蛋白水平顯著升高(2±0.02,2.7±0.13,P0.01);PKA蛋白水平均下降(6±0.17,4±0.06,P0.05);Ras(2.2±0.11,3±0.10,P0.01)和Raf蛋白水平(1.9±0.09,2.6±0.16,P0.01)及ERK1/2的磷酸化顯著增加(1.9±0.05,3±0.08,P0.05)。在利用抑制劑阻滯顆粒細胞中FSHR,PKA,ERK蛋白表達和cAMP合成后,觀察到PCNA,StAR,3β-HSD和P450arom蛋白水平出現相應變化。本研究的結果表明,BMP-9促進基礎與FSH誘導的,與PCNA蛋白表達相關的人卵巢顆粒細胞增殖。此外,BMP-9可能是通過影響FSH誘導的FSHR,及其cAMP/PKA和MAPK信號傳導途徑來調節(jié)顆粒細胞增殖與類固醇的合成。
【學位單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R711.6
【部分圖文】：
采用均數±標準差(X±SD)表示。應用足正太方差齊，則使用方差分析對snq檢驗分析。P< 0. 05作為差異顯著結 果胞的體外分離培養(yǎng)與鑒定人卵巢顆粒細胞中，具有高度細胞特和胞質，呈棕褐色著染，細胞核呈深0%，表明分離培養(yǎng)的卵泡顆粒細胞
CCK8 檢測一定時間（0h,12h,24h,36h,48h,60h)內 BMP9 蛋白干預原代人卵巢顆粒細胞（GCs）活力產生的影響。對照組 OD 值在 12h 開始上升，48h 達頂峰后進入平臺期，各測量時間 OD 值與 0h 比較差異均有統計學意義（P<0.05）。添加 BMP-9（100ng/ml）組 OD 值在 6h 開始上升，48h顯著升高達到頂峰并進入平臺期，與 0h 比較差異均有統計學意義（0.2±0.11,0.46±0.10，P<0.05）。OD 值在 36h 顯著升高并高于對照組最大 OD 值，差異有統計學意義（P<0.05）(Fig.2A)。2.2 不同濃度 BMP-9 對顆粒細胞活力的影響濃度梯度 BMP-9 蛋白（0,5,10,20,50,100ng/ml）干預原代人卵巢顆粒細胞（GCs）48 小時后進行 CCK8 試劑檢測。其結果顯示：與對照組（OD值）相比，不同濃度 BMP9 均上調顆粒細胞的活性（P<0.05），并隨濃度梯度活性遞增，并在 100ng/ml 對細胞活性的影響最為顯著（3.52±0.17 倍，P<0.01）(Fig.2B)。A B
BMP-9 對 rFSH 誘導的人卵巢黃素化顆粒細-Ethynyl-2’- deoxyuridine）是一種胸腺嘧啶核時期代替胸腺嘧啶（T）滲入正在復制的 DN與 Apollo 熒光染料的特異性反應快速檢測細胞核都顯示出 Hoechst33342 染色的藍色熒代表正在復制的細胞，綠色細胞數量/藍色細 BMP-9 蛋白處理 48h 后，FSH 誘導組與單獨作用組比較，顯示更大比例的 EdU 標記作用組的細胞增殖率最高，差異有統計學意義（Fig.3）
【參考文獻】
本文編號：2886371
【學位單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R711.6
【部分圖文】：
采用均數±標準差(X±SD)表示。應用足正太方差齊，則使用方差分析對snq檢驗分析。P< 0. 05作為差異顯著結 果胞的體外分離培養(yǎng)與鑒定人卵巢顆粒細胞中，具有高度細胞特和胞質，呈棕褐色著染，細胞核呈深0%，表明分離培養(yǎng)的卵泡顆粒細胞
CCK8 檢測一定時間（0h,12h,24h,36h,48h,60h)內 BMP9 蛋白干預原代人卵巢顆粒細胞（GCs）活力產生的影響。對照組 OD 值在 12h 開始上升，48h 達頂峰后進入平臺期，各測量時間 OD 值與 0h 比較差異均有統計學意義（P<0.05）。添加 BMP-9（100ng/ml）組 OD 值在 6h 開始上升，48h顯著升高達到頂峰并進入平臺期，與 0h 比較差異均有統計學意義（0.2±0.11,0.46±0.10，P<0.05）。OD 值在 36h 顯著升高并高于對照組最大 OD 值，差異有統計學意義（P<0.05）(Fig.2A)。2.2 不同濃度 BMP-9 對顆粒細胞活力的影響濃度梯度 BMP-9 蛋白（0,5,10,20,50,100ng/ml）干預原代人卵巢顆粒細胞（GCs）48 小時后進行 CCK8 試劑檢測。其結果顯示：與對照組（OD值）相比，不同濃度 BMP9 均上調顆粒細胞的活性（P<0.05），并隨濃度梯度活性遞增，并在 100ng/ml 對細胞活性的影響最為顯著（3.52±0.17 倍，P<0.01）(Fig.2B)。A B
BMP-9 對 rFSH 誘導的人卵巢黃素化顆粒細-Ethynyl-2’- deoxyuridine）是一種胸腺嘧啶核時期代替胸腺嘧啶（T）滲入正在復制的 DN與 Apollo 熒光染料的特異性反應快速檢測細胞核都顯示出 Hoechst33342 染色的藍色熒代表正在復制的細胞，綠色細胞數量/藍色細 BMP-9 蛋白處理 48h 后，FSH 誘導組與單獨作用組比較，顯示更大比例的 EdU 標記作用組的細胞增殖率最高，差異有統計學意義（Fig.3）
【參考文獻】
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1 葉婧;丁婷;杜小芳;楊書紅;沈薇;石良艷;羅愛月;王世宣;;不同分離方法對人卵巢顆粒細胞體外培養(yǎng)的影響[J];中國現代醫(yī)學雜志;2013年17期
2 靳玉甫;覃愛平;;卵巢顆粒細胞P450芳香化酶研究進展[J];廣西醫(yī)科大學學報;2008年06期
本文編號：2886371
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