目的:我們之前的研究表明IL-27與子癇前期(PE)的發(fā)病密切相關(guān),IL-27可誘導滋養(yǎng)細胞產(chǎn)生促炎效應。本研究是為了探究IL-27是否通過影響滋養(yǎng)細胞的功能參與子癇前期的發(fā)病以及其相關(guān)機制。方法:本研究用CCK-8、Ed U增殖實驗和流式凋亡實驗檢測了IL-27是否能夠影響滋養(yǎng)細胞株HTR8/SVneo的增殖和凋亡。然后收取正常早孕期絨毛組織進行絨毛外植體實驗,檢測IL-27是否影響外植體的外生性生長。通過Transwell和劃痕實驗檢測IL-27對滋養(yǎng)細胞株HTR8/SVneo侵襲和遷移能力的影響。Western Blotting檢測IL-27刺激滋養(yǎng)細胞株HTR8/SVneo后上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)標志物的改變。并使用免疫熒光觀察IL-27對外植體和滋養(yǎng)細胞株HTR8/SVneo的EMT標志物表達的影響。Western Blotting檢測IL-27刺激滋養(yǎng)細胞株HTR8/SVneo后STAT1和STAT3的激活情況。分別使用STAT1 si RNA和STAT3 si RNA轉(zhuǎn)染滋養(yǎng)細胞株HTR8/SVneo后觀察IL-27對其侵襲和遷移能力的影響。最后使用Western Blotting檢測子癇前期和正常胎盤組織中STAT1的磷酸化水平。結(jié)果:IL-27對滋養(yǎng)細胞株HTR8/SVneo的增殖和凋亡并無明顯的影響,但可顯著抑制其侵襲和遷移的能力,并明顯抑制外植體的外生性生長。IL-27可使滋養(yǎng)細胞株HTR8/SVneo的上皮標志物(β-catenin)的表達增強,使其間質(zhì)標志物(vimentin)的表達減弱。在絨毛外植體試驗中,IL-27刺激后的外植體絨毛外滋養(yǎng)細胞的上皮標志物(E-cadherin和β-catenin)的表達增強,而間質(zhì)標志物(vimentin)的表達減弱。IL-27可以明顯激活滋養(yǎng)細胞株HTR8/SVneo中的STAT1和STAT3。選擇性抑制STAT1和STAT3的表達后發(fā)現(xiàn),STAT1的表達受到抑制后可削弱IL-27對滋養(yǎng)細胞株HTR8/SVneo的EMT標志物的表達的影響,以及對其侵襲和遷移能力的影響,但抑制STAT3的表達則不能。與正常孕婦相比較,子癇前期孕婦的胎盤組織中STAT1的磷酸化水平是升高的。結(jié)論:IL-27可能主要是通過激活STAT1抑制滋養(yǎng)細胞的EMT過程,從而抑制其侵襲和遷移能力參與子癇前期的發(fā)病。目的:探討IL-27參與原代人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs)功能受損的信號通路,及其在子癇前期發(fā)病機制中的作用。方法:(1)使用Western blot檢測子癇前期和正常足月胎盤組織中IL-27及其受體WSX-1的表達;(2)分離并培養(yǎng)原代人臍靜脈內(nèi)皮細胞,用免疫熒光的方法鑒定HUVECs細胞;(3)對原代HUVECs予以50 ng/m L人重組IL-27蛋白刺激15 min、30 min、1 h和2 h后,提取蛋白,Western blot方法檢測JAK2、STAT1的活化情況;(4)使用JAK的特異性抑制劑AG490處理原代HUVECs后,分為六個處理組,分別是空白對照組(Con)、DMSO組、抑制劑組(AG490),IL-27處理組(IL-27)、IL-27和DMSO共同處理組(DMSO+IL-27)、IL-27和抑制劑共同處理組(AG490+IL-27),然后用Transwell和細胞管腔成型實驗檢測IL-27對原代HUVECs血管成形能力的影響。結(jié)果:(1)IL-27及其受體WSX-1的蛋白水平在子癇前期胎盤組織中高于正常足月胎盤;(2)成功在體外建立培養(yǎng)原代人臍靜脈內(nèi)皮細胞的模型;(3)人重組IL-27(50 ng/m L)刺激HUVECs細胞后可以激活JAK2/STAT1信號通路;(4)與相應對照組相比,IL-27組、DMSO+IL-27組的遷移和血管成形能力降低。但是AG490+IL-27組與AG490組相比,并無明顯變化。結(jié)論:IL-27可能通過JAK2/STAT1信號通路影響血管內(nèi)皮細胞功能參與子癇前期的發(fā)病。
【學位單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R714.244
【部分圖文】：

圖 1 IL-27 刺激 HTR-8/SVneo 細胞后對其增殖和凋亡的影響Fig. 1 IL-27 had no significantly effect on apoptosis and proliferation in HTR-8/SVneo cells.A：使用流式細胞儀檢測 IL-27 對 HTR-8/SVneo 細胞凋亡的影響；B：兩組凋亡率的統(tǒng)計分析；C：EdU 增殖實驗檢測 IL-27 對 HTR-8/SVneo 細胞增殖的影響；D：EdU 增殖實驗結(jié)果的統(tǒng)計分析；E：CCK-8 實驗檢測 IL-27 對 HTR-8/SVneo 細胞增殖的影響。(A) The effects of IL-27 on apoptosis rates in HTR-8/SVneo cells, assessed by flow cytometryRepresentative pictures of flow cytometry for apoptosis rate. (B) Bar graph shows the apoptosis ratecompared to the control group. (C) EdU incorporation assay showed no significant difference in celproliferation between IL-27 group and control group. The blue color indicates the nuclei and the redcolor represents EdU-positive nuclei. (D) Percentage of EdU-positive cells in each group. (E) TheOD value of each group was detected by CCK-8.All experiments were repeated three times.

重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文2.2 IL-27 可以抑制絨毛外植體的生長以及 HTR-8/SVneo 細胞的侵襲和遷移為了觀察 IL-27 對滋養(yǎng)細胞能動性的影響，進行了絨毛外植體實驗。滋養(yǎng)細胞外生性生長的距離反映了其遷移的能力。外植體培養(yǎng) 72 h 后，IL-27 處理組的外植體絨毛外滋養(yǎng)細胞的外生性生長的距離要短于對照組(圖 2A, B)。為了進一步明確IL-27 對滋養(yǎng)細胞侵襲和遷移的影響，我們進行了 Transwell 和劃痕實驗。結(jié)果表明 IL-27 可以明顯抑制滋養(yǎng)細胞株 HTR-8/SVneo 的侵襲和遷移能力（Figure 2C,F）。

24圖 3 IL-27 對 HTR-8/SVneo 細胞和外植體絨毛外滋養(yǎng)細胞的 EMT 標志物表達的影響Fig. 3 The effects of IL-27 on EMT markers in HTR8/SVneo cells and extravillous explants.A-B：Western blotting 檢測 IL-27 對 HTR-8/SVneo 細胞的 EMT 標志物表達的影響；C：免疫熒光檢測 IL-27 處理 HTR-8/SVneo 細胞 24 h 后其 EMT 標志物表達的變化。D：免疫熒光檢測 IL-27 處理外植體 72 h 后 EVTs 的 EMT 標志物表達的變化。* P < 0.05; ** P < 0.01。(A and B) HTR8/SVneo cells were treated with or without IL-27 for 24 h and subjected t
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本文編號：2883703