發(fā)布時(shí)間：2020-11-14 16:47

　　 目的:我們之前的研究表明IL-27與子癇前期(PE)的發(fā)病密切相關(guān),IL-27可誘導(dǎo)滋養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)生促炎效應(yīng)。本研究是為了探究IL-27是否通過影響滋養(yǎng)細(xì)胞的功能參與子癇前期的發(fā)病以及其相關(guān)機(jī)制。方法:本研究用CCK-8、Ed U增殖實(shí)驗(yàn)和流式凋亡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了IL-27是否能夠影響滋養(yǎng)細(xì)胞株HTR8/SVneo的增殖和凋亡。然后收取正常早孕期絨毛組織進(jìn)行絨毛外植體實(shí)驗(yàn),檢測(cè)IL-27是否影響外植體的外生性生長(zhǎng)。通過Transwell和劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)IL-27對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞株HTR8/SVneo侵襲和遷移能力的影響。Western Blotting檢測(cè)IL-27刺激滋養(yǎng)細(xì)胞株HTR8/SVneo后上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)標(biāo)志物的改變。并使用免疫熒光觀察IL-27對(duì)外植體和滋養(yǎng)細(xì)胞株HTR8/SVneo的EMT標(biāo)志物表達(dá)的影響。Western Blotting檢測(cè)IL-27刺激滋養(yǎng)細(xì)胞株HTR8/SVneo后STAT1和STAT3的激活情況。分別使用STAT1 si RNA和STAT3 si RNA轉(zhuǎn)染滋養(yǎng)細(xì)胞株HTR8/SVneo后觀察IL-27對(duì)其侵襲和遷移能力的影響。最后使用Western Blotting檢測(cè)子癇前期和正常胎盤組織中STAT1的磷酸化水平。結(jié)果:IL-27對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞株HTR8/SVneo的增殖和凋亡并無明顯的影響,但可顯著抑制其侵襲和遷移的能力,并明顯抑制外植體的外生性生長(zhǎng)。IL-27可使滋養(yǎng)細(xì)胞株HTR8/SVneo的上皮標(biāo)志物(β-catenin)的表達(dá)增強(qiáng),使其間質(zhì)標(biāo)志物(vimentin)的表達(dá)減弱。在絨毛外植體試驗(yàn)中,IL-27刺激后的外植體絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞的上皮標(biāo)志物(E-cadherin和β-catenin)的表達(dá)增強(qiáng),而間質(zhì)標(biāo)志物(vimentin)的表達(dá)減弱。IL-27可以明顯激活滋養(yǎng)細(xì)胞株HTR8/SVneo中的STAT1和STAT3。選擇性抑制STAT1和STAT3的表達(dá)后發(fā)現(xiàn),STAT1的表達(dá)受到抑制后可削弱IL-27對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞株HTR8/SVneo的EMT標(biāo)志物的表達(dá)的影響,以及對(duì)其侵襲和遷移能力的影響,但抑制STAT3的表達(dá)則不能。與正常孕婦相比較,子癇前期孕婦的胎盤組織中STAT1的磷酸化水平是升高的。結(jié)論:IL-27可能主要是通過激活STAT1抑制滋養(yǎng)細(xì)胞的EMT過程,從而抑制其侵襲和遷移能力參與子癇前期的發(fā)病。目的:探討IL-27參與原代人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)功能受損的信號(hào)通路,及其在子癇前期發(fā)病機(jī)制中的作用。方法:(1)使用Western blot檢測(cè)子癇前期和正常足月胎盤組織中IL-27及其受體WSX-1的表達(dá);(2)分離并培養(yǎng)原代人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,用免疫熒光的方法鑒定HUVECs細(xì)胞;(3)對(duì)原代HUVECs予以50 ng/m L人重組IL-27蛋白刺激15 min、30 min、1 h和2 h后,提取蛋白,Western blot方法檢測(cè)JAK2、STAT1的活化情況;(4)使用JAK的特異性抑制劑AG490處理原代HUVECs后,分為六個(gè)處理組,分別是空白對(duì)照組(Con)、DMSO組、抑制劑組(AG490),IL-27處理組(IL-27)、IL-27和DMSO共同處理組(DMSO+IL-27)、IL-27和抑制劑共同處理組(AG490+IL-27),然后用Transwell和細(xì)胞管腔成型實(shí)驗(yàn)檢測(cè)IL-27對(duì)原代HUVECs血管成形能力的影響。結(jié)果:(1)IL-27及其受體WSX-1的蛋白水平在子癇前期胎盤組織中高于正常足月胎盤;(2)成功在體外建立培養(yǎng)原代人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的模型;(3)人重組IL-27(50 ng/m L)刺激HUVECs細(xì)胞后可以激活JAK2/STAT1信號(hào)通路;(4)與相應(yīng)對(duì)照組相比,IL-27組、DMSO+IL-27組的遷移和血管成形能力降低。但是AG490+IL-27組與AG490組相比,并無明顯變化。結(jié)論:IL-27可能通過JAK2/STAT1信號(hào)通路影響血管內(nèi)皮細(xì)胞功能參與子癇前期的發(fā)病。
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R714.244
【部分圖文】：

圖 1 IL-27 刺激 HTR-8/SVneo 細(xì)胞后對(duì)其增殖和凋亡的影響Fig. 1 IL-27 had no significantly effect on apoptosis and proliferation in HTR-8/SVneo cells.A：使用流式細(xì)胞儀檢測(cè) IL-27 對(duì) HTR-8/SVneo 細(xì)胞凋亡的影響；B：兩組凋亡率的統(tǒng)計(jì)分析；C：EdU 增殖實(shí)驗(yàn)檢測(cè) IL-27 對(duì) HTR-8/SVneo 細(xì)胞增殖的影響；D：EdU 增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析；E：CCK-8 實(shí)驗(yàn)檢測(cè) IL-27 對(duì) HTR-8/SVneo 細(xì)胞增殖的影響。(A) The effects of IL-27 on apoptosis rates in HTR-8/SVneo cells, assessed by flow cytometryRepresentative pictures of flow cytometry for apoptosis rate. (B) Bar graph shows the apoptosis ratecompared to the control group. (C) EdU incorporation assay showed no significant difference in celproliferation between IL-27 group and control group. The blue color indicates the nuclei and the redcolor represents EdU-positive nuclei. (D) Percentage of EdU-positive cells in each group. (E) TheOD value of each group was detected by CCK-8.All experiments were repeated three times.

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文2.2 IL-27 可以抑制絨毛外植體的生長(zhǎng)以及 HTR-8/SVneo 細(xì)胞的侵襲和遷移為了觀察 IL-27 對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞能動(dòng)性的影響，進(jìn)行了絨毛外植體實(shí)驗(yàn)。滋養(yǎng)細(xì)胞外生性生長(zhǎng)的距離反映了其遷移的能力。外植體培養(yǎng) 72 h 后，IL-27 處理組的外植體絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞的外生性生長(zhǎng)的距離要短于對(duì)照組(圖 2A, B)。為了進(jìn)一步明確IL-27 對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲和遷移的影響，我們進(jìn)行了 Transwell 和劃痕實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明 IL-27 可以明顯抑制滋養(yǎng)細(xì)胞株 HTR-8/SVneo 的侵襲和遷移能力（Figure 2C,F）。

24圖 3 IL-27 對(duì) HTR-8/SVneo 細(xì)胞和外植體絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞的 EMT 標(biāo)志物表達(dá)的影響Fig. 3 The effects of IL-27 on EMT markers in HTR8/SVneo cells and extravillous explants.A-B：Western blotting 檢測(cè) IL-27 對(duì) HTR-8/SVneo 細(xì)胞的 EMT 標(biāo)志物表達(dá)的影響；C：免疫熒光檢測(cè) IL-27 處理 HTR-8/SVneo 細(xì)胞 24 h 后其 EMT 標(biāo)志物表達(dá)的變化。D：免疫熒光檢測(cè) IL-27 處理外植體 72 h 后 EVTs 的 EMT 標(biāo)志物表達(dá)的變化。* P < 0.05; ** P < 0.01。(A and B) HTR8/SVneo cells were treated with or without IL-27 for 24 h and subjected t
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