發(fā)布時(shí)間：2020-12-17 21:27

　　背景:腦白質(zhì)損傷（white matter injury,WMI）是早產(chǎn)兒最常見的腦損傷形式,目前尚無有效療法,導(dǎo)致腦癱等后遺癥。少突膠質(zhì)前體細(xì)胞（oligodendrocyte precursor cells,OPCs）是中樞神經(jīng)系統(tǒng)（central nervous system,CNS）唯一的天然成髓鞘前體細(xì)胞,WMI時(shí)OPCs特異性受損,使得少突膠質(zhì)細(xì)胞（oligodendrocytes,OLs）分化成髓鞘障礙,最終導(dǎo)致白質(zhì)區(qū)廣泛脫髓鞘,從而引發(fā)神經(jīng)功能障礙。細(xì)胞移植是治療WMI的新希望,而OPCs是理想的種子細(xì)胞。本實(shí)驗(yàn)室已成功通過人胎腦神經(jīng)干細(xì)胞（neural stem cells,NSCs）快速、穩(wěn)定誘導(dǎo)出OPCs,但OPCs的分化及成髓鞘功能尚有待驗(yàn)證。目的:探討本實(shí)驗(yàn)室誘導(dǎo)的人OPCs的功能性,包括體外分化成熟為OLs能力和體內(nèi)移植成髓鞘能力。方法:對(duì)人NSCs誘導(dǎo)獲得的OPCs,通過PDGFR-α、A2B5、NG2、SOX10等OPCs特異性標(biāo)記及星形膠質(zhì)細(xì)胞（astrocytes,AST）的標(biāo)記GFAP、神經(jīng)元的標(biāo)記Tuj-1行免疫熒光染色（immunofluore... 

【文章來源】：南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－２不同厚度神經(jīng)球冰凍切片的Ｎｅｓｔｉｎ免疫熒光染色（Ｘ?１００）??Ｆｉｇｕｒｅ?１－２?Ｎｅｓｔｉｎ?ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｓｔａｉｎｉｎｇ?ｏｆ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｔｈｉｃｋｎｅｓｓ?ｏｆ?ｎｅｕｒｏｓｐｈｅｒｅ?ｆｒｏｚｅｎ??ｓｅｃｔｉｏｎｓ?（Ｘ?１００）??

??ＮＳＣｓ接種于無包被Ｔ２５培養(yǎng)瓶中誘導(dǎo)的ＯＰＣｓ如圖２－１－Ｂ所示：培養(yǎng)２天，??可見細(xì)胞懸浮生長，不貼壁，細(xì)胞聚集或增殖為小細(xì)胞團(tuán)；培養(yǎng)４天觀察，小細(xì)??胞團(tuán)生長為周邊較圓潤的細(xì)胞球，折光性良好；培養(yǎng)６天觀察，細(xì)胞球開始崩散、??壞死，無法繼續(xù)培養(yǎng)。??Ｈ??圖２－１原代誘導(dǎo)的ＯＰＣｓ?（Ｘ?１００）?Ａ：貼壁誘導(dǎo)的原代ＯＰＣｓ，培養(yǎng)１２天：Ｂ：懸浮誘導(dǎo)??的ＯＰＣｓ，培養(yǎng)６天??Ｆｉｇｕｒｅ２－１?Ｉｎｄｕｃｅｄ?ｐｒｉｍａｒｙ?ｏｌｉｇｏｄｃｎｄｒｏｃｙｔｅｓ（ｘ?１００）?Ａ：?Ｐｒｉｍａｒｙ?ＯＰＣｓ?Ｉｎｄｕｃｅｄ?ｂｙ?Ａｄｈｅｒｅｎｃｅ?ｆｏｒ??１２?Ｄａｙｓ；?Ｂ：?Ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ?ｐｒｉｍａｒｙ?ＯＰＣｓ?ｃｕｌｔｕｒｅｄ?ｆｏｒ?６?ｄａｙｓ??２．３．２倒置顯微鏡下觀察傳代ＯＰＣｓ生長情況??接種于ＰＤＬ／ＬＮ包被培養(yǎng)板上的傳代ＯＰＣｓ貼壁３天觀察，細(xì)胞均己貼壁，??形態(tài)良好，較為一致。有圓形或橢圓形的胞體，折光性強(qiáng)，從胞體邊緣爬出雙極??突起

?培養(yǎng)６天?培養(yǎng)９天??圖２－２在ＴＯＬ／Ｌｎ包被孔板中培養(yǎng)的傳代ＯＰＣｓ?（?Ｘ?１００）??Ｆｉｇｕｒｅ２－２?Ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅｄ?ＯＰＣｓ?ｉｎ?ＰＤＬ／Ｌｎ?ｃｏａｔｅｄ?ｐｌａｔｅｓ（?Ｘ?１００）??將傳代的ＯＰＣｓ接種于無包被的六孔板中培養(yǎng)，前幾天觀察到細(xì)胞懸浮生長，??聚成小團(tuán)，慢慢成球生長，周邊有毛刺，折光性可，形態(tài)與神經(jīng)球相似。長時(shí)間??培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)懸浮的球沉底，向四周放射狀爬出細(xì)胞。細(xì)胞形態(tài)與ＯＰＣｓ類似，具有??較圓且折光性良好的胞體，短而直的二三極突起。搖晃培養(yǎng)瓶，中央的球可以飄??起，部分爬出的細(xì)胞繼續(xù)貼壁（如圖２－３）。??土４?參?１９?天??圖２－３在無包被培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)的傳代ＯＰＣｓ?（Ｘ２００）??Ｆｉｇｕｒｅ２－３?Ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅｄ?ＯＰＣｓ?ｉｎ?ｕｎｃｏａｔｅｄ?ｆｌａｓｋｓ?（Ｘ?２００）??２．３．２免疫熒光染色鑒定傳代的ＯＰＣｓ??接種于ＰＤＬ／ＬＮ包被培養(yǎng)板上的ＯＰＣｓ，培養(yǎng)４天后免疫熒光染色鑒定其是??否為ＯＰＣｓ，結(jié)果表明Ａ２Ｂ５陽性率為８８．２１?±２．４０％，?ＳＯＸ１０陽性率為９０．４１?土??１．７２％

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]早產(chǎn)兒腦白質(zhì)損傷診斷、防治與綜合管理的專家組意見[J]. 侯新琳,馮琪,湯澤中,吳曄,周叢樂,童笑梅,封志純,尹曉娟,陳超,程國強(qiáng),王來栓,周文浩,虞人杰,周曉玉,母得志,劉俐,毛健,岳少杰,俞惠民.  中國新生兒科雜志. 2015(03)
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