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肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A1在甲醇酵母中的表達(dá)與純化

發(fā)布時間:2020-12-17 14:36
  呼吸窘迫綜合征(RDS)是導(dǎo)致早產(chǎn)兒死亡的主要因素并與一定的遺傳背景有關(guān)。PS替代治療是唯一有效的治療手段。與RDS同樣,肺表面活性物質(zhì)(PS)的功能或成分的改變與其它呼吸系統(tǒng)疾病相關(guān);如成人呼吸窘迫綜合征(ARDS)、特異性肺纖維化(IPF)和肺部感染。目前臨床使用的PS主要為動物肺組織和人羊水中提取物,價格昂貴,不能滿足臨床的需要,因此人工合成磷脂和基因工程產(chǎn)物生產(chǎn)PS將是獲得PS的最佳途徑。 PS是由肺Ⅱ型細(xì)胞合成與分泌的一種脂蛋白復(fù)合物,肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白(SP-A)是PS中含量最豐富的蛋白質(zhì),有多種生理功能。SP-A基因定位于染色體10q21-23,由兩個功能基因SP-A1、SP-A2和一個假基因組成,兩種基因在核苷酸水平有94%的同源性,基因產(chǎn)物有97%的同源性。SP-A單體由248個氨基酸組成,相對分子量約為26~38kDa。 甲醇酵母作為單細(xì)胞真核生物,既具有大腸桿菌或釀酒酵母的繁殖快、易于培養(yǎng)和便于基因工程操作的特性,又具有高等真核表達(dá)系統(tǒng)的蛋白質(zhì)折疊和翻譯后加工功能。并且外源蛋白質(zhì)表達(dá)水平高,還能分泌外源蛋白質(zhì)到培養(yǎng)夜中,便于蛋白質(zhì)的純化。因此,最近... 

【文章來源】:南方醫(yī)科大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】:72 頁

【學(xué)位級別】:碩士

【部分圖文】:

肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A1在甲醇酵母中的表達(dá)與純化


圖I超晗比較圈8%SDSPAGE廈液:2扭漣液:

限制性酶切


C3.SK/Sp一A一和ppIC3.SK的限制性酶切stofPPIC3.SK/SP一AIandPPIC3.SKwithSnaBmarker言ofpPIC3.SKsPawithSnaB1andEeoRI;3.SKsPa:stofPPIC3.SKwithSnaB1andEeoRI:3.SK46

酵母染色體,重組子,體重,質(zhì)粒


圖2pPIe:生.SK/sP一人z和pple3.SK的民RI戶192.PCRofpPIC:虧.SK/5尸一AlandpPIC3.SK1.8DNAm全一rk。改;2.:3spa重組子Reeombinantp一,IC:,.SK/SP一AI;4.5空載體重組子pPIC3.砍;6,7質(zhì)粒pPIC3.SK/SP一AI2,4.6PrimerofAOXI:3.5,7PrimerofSP一AIgene圖3酵母染色體拷貝整合菌株的篩選.,.

【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]人肺表面活性物質(zhì)結(jié)合蛋白A基因組克隆及亞克隆[J]. 姬毅,封志純,黃建生,任大明.  中國兒童保健雜志. 2000(01)



本文編號:2922211

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