【摘要】：目的 腦白質(zhì)損傷(White matter damage, WMD)作為引起新生兒圍生期死亡和腦癱發(fā)生的重要原因,越來越引起人們的關(guān)注,對其的研究也日益增多。然而,目前早產(chǎn)兒WMD的病理生理機制仍不十分明朗,通過總結(jié)眾多動物實驗及流行病學研究成果我們發(fā)現(xiàn)宮內(nèi)感染可能在其中起了重要作用。但對于腦白質(zhì)損傷的早期診斷,目前廣泛應用的常規(guī)MRI以及頭顱超聲具有明顯的局限性。近年來,隨著醫(yī)學影像技術(shù)的發(fā)展,彌散加權(quán)成像(Diffusion Weighted Imaging, DWI)對急性腦損傷,譬如急性腦梗、腦缺血的早期診斷價值得到了業(yè)界廣泛認同。本實驗通過孕鼠宮內(nèi)感染脂多糖(LPS)建立早產(chǎn)胎鼠腦損傷模型,了解其對新生幼鼠腦內(nèi)髓鞘堿性蛋白(MBP)、膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)表達的影響,結(jié)合光鏡、電鏡下病理結(jié)果,探討早產(chǎn)兒宮內(nèi)感染致腦損傷的可能機制,并試圖通過提供的早期影像學證據(jù),闡明常規(guī)MRI及DWI在臨床早產(chǎn)兒腦損傷的早期診斷和治療中的價值。 材料與方法 20只受孕wistar大鼠隨機分為對照組(n=6)和LPS實驗組(n=14)。實驗組孕鼠于孕后第18天起連續(xù)2天腹腔注射LPS450μ g·kg-1·d-1,對照組孕鼠于相同時間腹腔注射等量生理鹽水。觀察兩組大鼠分娩日期及新生仔鼠出生體重、狀態(tài)。孕第22天前分娩的仔鼠為早產(chǎn)鼠,并去除早產(chǎn)鼠。兩組仔鼠分別于生后6h、生后3d、生后7d及生后25d取新生大鼠腦組織。應用蘇木素-伊紅染色及免疫組化法研究新生仔鼠各年齡段腦白質(zhì)病理變化和MBP、GFAP的表達特點,以及電鏡、影像學DWI分析檢測。 另收集我院新生兒NICU病房收治的早產(chǎn)兒40例(2010.9-2012.2),正常足月兒10例。分別于生后4周或糾正胎齡、3個月、6個月及12個月對患兒進行頭部常規(guī)MRI及DWI隨訪研究。此外對各患兒入院后進行血常規(guī)、C-反應蛋白(CRP)、血糖、血清膽紅素及血清中各種離子的測定。 結(jié)果 實驗組共獲得54只幼鼠,存活率約85%,對照組為71只,存活率100%。感染組子宮及胎盤病理檢測可見大量中性粒細胞浸潤,血管充血水腫。對照組未見明顯炎癥改變。實驗組仔鼠出生后顏色青紫、體重低。實驗組孕鼠與對照組孕鼠每胎平均活產(chǎn)仔鼠只數(shù)、幼鼠出生平均體重有顯著性差異(P0.05)宮內(nèi)感染后實驗組7d組仔鼠腦HE染色可見腦白質(zhì)結(jié)構(gòu)疏松、染色淡等表現(xiàn)。實驗組生后6h及3d組仔鼠腦各層面腦白質(zhì)MBP及GFAP未見明確染色；實驗組7d組及25d組仔鼠GFAP陽性細胞數(shù)量在海馬區(qū)、腦室旁白質(zhì)及胼胝體區(qū)明顯多于對照組(P0.05)；實驗組7d組海馬齒狀回、胼胝體及25d組仔鼠腦各層面腦白質(zhì)MBP免疫陽性區(qū)域面積均較對照組明顯減少,統(tǒng)計分析后均有顯著性差異(P0.05),實驗組7d組側(cè)腦室旁白質(zhì)區(qū)MBP染色差異不明顯,不具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。電鏡觀察可發(fā)現(xiàn)實驗組早期(6h-3d)多數(shù)神經(jīng)元細胞器腫脹、溶解,可見線粒體腫脹明顯,呈空泡樣結(jié)構(gòu),粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)脫顆�，F(xiàn)象,可見到凋亡細胞。晚期(7d、25d)可見染色質(zhì)邊集、核仁固縮等征象。髓鞘情況：實驗組中6h組及3d組未見髓鞘形成,7d組和25d組髓鞘厚度明顯變薄。而對照組均未見上述變化。因此,宮內(nèi)感染能導致新生仔鼠腦白質(zhì)結(jié)構(gòu)稀疏、幼鼠髓鞘發(fā)育不完善、早期少突膠質(zhì)細胞及星形細胞溶解壞死。在對幼鼠進行的影像學MRI檢查中,對照組及實驗組在常規(guī)MRI T2WI相上均未見明顯異常。實驗組中6h組的DWI在側(cè)腦室旁白質(zhì)、海馬齒狀回及胼胝體區(qū)可見彌漫性片狀稍高信號,較對照組彌散受限程度重、面積大。在實驗組中3d組DWI圖像上異常信號不顯著,但通過進行ADC值的測量發(fā)現(xiàn)兩組ADC值較對照組低(P(6h組)=0.001；P(3d組)=0.002),差異具有統(tǒng)計學意義。7d組及25d組較對照組ADC值差異不具統(tǒng)計學意義(P(7d組)=0.080；P(25d組)=0.176)。 在對早產(chǎn)兒的影像學MRI檢查中,首次檢查40例早產(chǎn)兒中28例DWI未見高信號改變,27例常規(guī)MRI示雙側(cè)側(cè)腦室前后角旁可見斑點狀短T1稍短T2信號,8例未見明顯異常信號；12例患兒DWI示雙側(cè)側(cè)腦室周圍白質(zhì)及額、頂葉白質(zhì)內(nèi)可見簇狀高信號,其中7例在常規(guī)MRI病灶處呈小片狀、點狀或條狀T1高信號T2低信號影,5例常規(guī)MRI未見明顯改變。其所顯示的腦白質(zhì)對稱彌漫性異常高信號可作為診斷早產(chǎn)兒腦損傷的證據(jù)。隨訪：DWI正常組(隨訪時間3個月-22個月)中22例(22/27)頭部MRI示病灶吸收消失。DWI異常組(隨訪時間1個月-22個月)中5例(5/12)常規(guī)MRI正�；純�2周后復查DWI示腦白質(zhì)內(nèi)可見不規(guī)則高、低混雜信號,而常規(guī)MRI則顯示相應部位呈小片狀或點狀短T1稍短T2信號；4例(4/12)于糾正胎齡后復查MRI出現(xiàn)側(cè)腦室擴張,中央?yún)^(qū)腦白質(zhì)變少等改變,8例于4個月后復查MRI可觀察到相應病灶出現(xiàn)囊性腦室旁白質(zhì)軟化(Periventricular leukomalacia, PVL)改變,2例符合大腦發(fā)育不良診斷。 結(jié)論 1.孕鼠腹腔注射LPS后可出現(xiàn)宮內(nèi)感染相應的病理改變,成功建立LPS致孕鼠宮內(nèi)感染的動物模型。 2.宮內(nèi)感染可導致新生大鼠腦白質(zhì)損傷,DWI可實時反應腦損傷后腦組織病理生理的動態(tài)變化過程。其ADC值對顯示模型鼠各區(qū)域腦損傷后腦水腫情況有更高的敏感性。 3.DWI在診斷早期PVL具有比常規(guī)MRI更高的相關(guān)性,是早期診斷PVL的首選檢測方法。 4.具備腦白質(zhì)損傷高危因素的早產(chǎn)兒應盡早進行磁共振檢查,為早期臨床診療提供科學依據(jù),減少不良預后的發(fā)生。
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R722.6

【參考文獻】

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本文編號：2517798