發(fā)布時(shí)間：2024-11-02 13:51

　　 目的建立間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）衰老模型,探討C1q/TNF相關(guān)蛋白3（CTRP3）對衰老MSCs的作用并初步探討機(jī)制。方法用過氧化氫（H₂O₂）誘導(dǎo)小鼠MSCs衰老,CCK8實(shí)驗(yàn)和β-半乳糖苷酶染色驗(yàn)證模型的建立。外源性給予CTRP3處理MSCs 24 h,CCK8實(shí)驗(yàn)檢測增殖活性,β-半乳糖苷酶染色檢測MSCs衰老,分化誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)檢測MSCs分化能力,Western blotting法檢測MSCs凋亡。RT-PCR檢測MSCs中衰老相關(guān)基因P16、P21以及抗衰老基因SIRT1的mRNA表達(dá)變化。采用GraphPad Prism 6進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。組間比較采用方差分析或LSD兩兩比較。結(jié)果 H₂O₂可抑制MSCs的增殖活性,且呈濃度依賴性。與正常對照組相比,200μmol/L H₂O₂作用4 h,細(xì)胞立體感消失,細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則;CCK8染色結(jié)果顯示細(xì)胞增殖活性顯著下降;β-半乳糖苷酶陽性細(xì)胞百分比顯著升高。繼續(xù)CTRP3處理24 h后,衰老MSCs增殖和分...

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 MSCs的培養(yǎng)
    1.2 CTRP3蛋白的制備
    1.3 MSCs衰老模型的建立
    1.4 CCK8測細(xì)胞活性
    1.5 細(xì)胞β-半乳糖苷酶染色
    1.6 MSCs成脂成骨誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)
    1.7 Western blotting分析細(xì)胞蛋白表達(dá)水平
    1.8 RNA提取和RT-PCR
    1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
2 結(jié) 果
    2.1 H2O2呈濃度依賴性地抑制MSCs增殖活性
    2.2 成功建立衰老模型
    2.3 CTRP3抑制MSCs的衰老
    2.4 CTRP3增強(qiáng)衰老MSCs的分化潛能
    2.5 CTRP3抑制衰老MSCs凋亡
    2.6 CTRP3下調(diào)P16和P21表達(dá), 上調(diào)SIRT1的 表達(dá)
3 討 論



本文編號：4009606