本文選題：紅細(xì)胞 + Aβ_(25-35)　； 參考：《陜西師范大學(xué)》2007年碩士論文

【摘要】： β淀粉樣肽25-35(β-amyloid peptide 25-35，Aβ_(25-35))是Alzheimer's disease(AD)神經(jīng)元中β淀粉樣肽39～43中的一段，其氨基酸序列為GSNKGAIIGLM。目前已知Aβ_(25-35)可導(dǎo)致人紅細(xì)胞溶血，但機(jī)制不清楚。有研究表明茶多酚對淀粉樣肽1～40／42的神經(jīng)毒性有抑制作用。為進(jìn)一步了解Aβ_(25-35)的細(xì)胞毒性作用，探究淀粉樣肽的細(xì)胞毒性機(jī)制，本實(shí)驗(yàn)采用紅細(xì)胞為材料，用Aβ_(25-35)處理紅細(xì)胞，分析血紅蛋白和鉀離子的釋放，電泳分析紅細(xì)胞膜蛋白圖譜改變、紅細(xì)胞谷胱甘肽(GSH)含量變化以及各種茶多酚對紅細(xì)胞溶血的效應(yīng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，Aβ_(25-35)對紅細(xì)胞的溶血是一種非氧化和非滲透性損傷。在所測試的茶多酚化合物中，(-)表兒茶酚-3-五倍子酸(ECG)和(-)表沒食子兒茶酚-3-五倍子酸(EGCG)對Aβ_(25-35)誘導(dǎo)溶血具有明顯不同的作用，其機(jī)制可能與EGCG和ECG對Aβ_(25-35)聚集形態(tài)的影響有關(guān)。 實(shí)驗(yàn)的主要方法和結(jié)論： 一、Aβ_(25-35)的溶血機(jī)制 1．Aβ_(25-35)與紅細(xì)胞作用過程中血紅蛋白和K~+離子釋放的時(shí)相分析 在Aβ_(25-35)與紅細(xì)胞作用過程中，分別采用可見光分光光度計(jì)和原子吸收分光光度計(jì)對血紅蛋白和K~+離子的釋放進(jìn)行監(jiān)測，血紅蛋白和K~+釋放的時(shí)相沒有差別，即血紅蛋白和K~+離子的釋放是一種非滲透性釋放，支持Aβ_(25-35)對紅細(xì)胞的損害是膜穿孔的假說。 2．Aβ_(25-35)對紅細(xì)胞GSH含量的影響 采用Ellman方法測定紅細(xì)胞GSH含量。Aβ_(25-35)可使紅細(xì)胞內(nèi)GSH含量降低，在低濃度范圍內(nèi)具有線性量效關(guān)系，當(dāng)Aβ_(25-35)濃度達(dá)到20μg／mL時(shí)作用達(dá)到飽和，GSH的最大耗損量為17％。說明由Aβ_(25-35)導(dǎo)致的GSH含量的降低是很有限的。 3．Aβ_(25-35)對紅細(xì)胞膜蛋白譜帶的影響 Aβ_(25-35)處理紅細(xì)胞后，提取細(xì)胞膜，用SDS-PAGE檢測紅細(xì)胞膜蛋白譜帶，未發(fā)現(xiàn)有明顯變化，表明Aβ_(25-35)對紅細(xì)胞的損害沒有導(dǎo)致膜蛋白的聚集。 4．Aβ_(25-35)對紅細(xì)胞形態(tài)的影響 紅細(xì)胞與Aβ_(25-35)孵育后，在顯微鏡下可觀察到杯狀細(xì)胞(Stomatocyte)，以及大量的大小不一的球形囊泡。這些囊泡一部分可能源于棘突釋放，另外部分可能來自于細(xì)胞膜碎片的再閉合和融合。 二、茶多酚對紅細(xì)胞溶血的效應(yīng) 本文對五種茶多酚EGCG，ECG，(-)表兒茶酚(EC)，，(-)表沒食子酸(EGC)和(+)兒茶素(C)與紅細(xì)胞的相互作用進(jìn)行了研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩種茶多酚EGCG和ECG對紅細(xì)胞具有截然相反的作用，ECG可以促進(jìn)Aβ_(25-35)對紅細(xì)胞的溶血作用，而EGCG則有強(qiáng)烈的抑制作用。 1．EGCG和ECG還原能力的測定 由于EGCG和ECG含有多酚結(jié)構(gòu)，在生物體系中表現(xiàn)出強(qiáng)的抗氧化活性。EGCG和ECG對叔丁基氫過氧化物(t-BHP)誘導(dǎo)產(chǎn)生的脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA具有相近的抑制作用，ECG的抑制作用略大于EGCG，說明EGCG和ECG對Aβ_(25-35)誘導(dǎo)溶血作用的影響與它們的氧化還原能力無關(guān)。 2．EGCG和ECG處理Aβ_(25-35)之后的溶血效應(yīng) 經(jīng)EGCG和ECG處理的紅細(xì)胞對Aβ_(25-35)的溶血作用表現(xiàn)出截然相反的結(jié)果。ECG可以促進(jìn)Aβ_(25-35)對紅細(xì)胞的溶血作用，而EGCG則有強(qiáng)烈的抑制作用。將Aβ_(25-35)和EGCG和ECG分別溫浴處理，再與紅細(xì)胞作用，其結(jié)果相同。EGCG和ECG對Aβ_(25-35)溶血作用的差異可能與它們二者對Aβ_(25-35)的聚集形態(tài)的影響相關(guān)。 3．Aβ_(25-35)經(jīng)EGCG和ECG處理后的聚集形態(tài) 淀粉樣肽形成以β結(jié)構(gòu)為主的纖維狀聚集體，是其產(chǎn)生細(xì)胞毒性的主要環(huán)節(jié)。EGCG和ECG分別與Aβ_(25-35)在37℃溫育120min后，經(jīng)透射電鏡觀察，對照呈纖維狀，EGCG處理后聚集體呈無定形體，ECG處理后呈較小的無定形體，可能是纖維前體或者寡聚體。已有的研究報(bào)道證實(shí)，蛋白淀粉樣變性過程中的纖維前體或者寡聚體具有強(qiáng)的細(xì)胞毒性作用，這與本文的結(jié)果是一致的。
[Abstract]:尾 - amyloid peptide 25 - 35 ( A尾 _ ( 25 - 35 )) is a section of 尾 - amyloid peptide 39 - 43 in Alzheimer ' s disease ( AD ) neurons . The amino acid sequence is GSNKGAIIGLM .






The main methods and conclusions of the experiment are as follows :






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本文編號：2023893