發(fā)布時間：2018-06-15 22:32

  本文選題：紅細胞 + Aβ_(25-35)��； 參考：《陜西師范大學(xué)》2007年碩士論文

【摘要】： β淀粉樣肽25-35(β-amyloid peptide 25-35，Aβ_(25-35))是Alzheimer's disease(AD)神經(jīng)元中β淀粉樣肽39～43中的一段，其氨基酸序列為GSNKGAIIGLM。目前已知Aβ_(25-35)可導(dǎo)致人紅細胞溶血，但機制不清楚。有研究表明茶多酚對淀粉樣肽1～40／42的神經(jīng)毒性有抑制作用。為進一步了解Aβ_(25-35)的細胞毒性作用，探究淀粉樣肽的細胞毒性機制，本實驗采用紅細胞為材料，用Aβ_(25-35)處理紅細胞，分析血紅蛋白和鉀離子的釋放，電泳分析紅細胞膜蛋白圖譜改變、紅細胞谷胱甘肽(GSH)含量變化以及各種茶多酚對紅細胞溶血的效應(yīng)。實驗結(jié)果表明，Aβ_(25-35)對紅細胞的溶血是一種非氧化和非滲透性損傷。在所測試的茶多酚化合物中，(-)表兒茶酚-3-五倍子酸(ECG)和(-)表沒食子兒茶酚-3-五倍子酸(EGCG)對Aβ_(25-35)誘導(dǎo)溶血具有明顯不同的作用，其機制可能與EGCG和ECG對Aβ_(25-35)聚集形態(tài)的影響有關(guān)。 實驗的主要方法和結(jié)論： 一、Aβ_(25-35)的溶血機制 1．Aβ_(25-35)與紅細胞作用過程中血紅蛋白和K~+離子釋放的時相分析 在Aβ_(25-35)與紅細胞作用過程中，分別采用可見光分光光度計和原子吸收分光光度計對血紅蛋白和K~+離子的釋放進行監(jiān)測，血紅蛋白和K~+釋放的時相沒有差別，即血紅蛋白和K~+離子的釋放是一種非滲透性釋放，支持Aβ_(25-35)對紅細胞的損害是膜穿孔的假說。 2．Aβ_(25-35)對紅細胞GSH含量的影響 采用Ellman方法測定紅細胞GSH含量。Aβ_(25-35)可使紅細胞內(nèi)GSH含量降低，在低濃度范圍內(nèi)具有線性量效關(guān)系，當(dāng)Aβ_(25-35)濃度達到20μg／mL時作用達到飽和，GSH的最大耗損量為17％。說明由Aβ_(25-35)導(dǎo)致的GSH含量的降低是很有限的。 3．Aβ_(25-35)對紅細胞膜蛋白譜帶的影響 Aβ_(25-35)處理紅細胞后，提取細胞膜，用SDS-PAGE檢測紅細胞膜蛋白譜帶，未發(fā)現(xiàn)有明顯變化，表明Aβ_(25-35)對紅細胞的損害沒有導(dǎo)致膜蛋白的聚集。 4．Aβ_(25-35)對紅細胞形態(tài)的影響 紅細胞與Aβ_(25-35)孵育后，在顯微鏡下可觀察到杯狀細胞(Stomatocyte)，以及大量的大小不一的球形囊泡。這些囊泡一部分可能源于棘突釋放，另外部分可能來自于細胞膜碎片的再閉合和融合。 二、茶多酚對紅細胞溶血的效應(yīng) 本文對五種茶多酚EGCG，ECG，(-)表兒茶酚(EC)，，(-)表沒食子酸(EGC)和(+)兒茶素(C)與紅細胞的相互作用進行了研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩種茶多酚EGCG和ECG對紅細胞具有截然相反的作用，ECG可以促進Aβ_(25-35)對紅細胞的溶血作用，而EGCG則有強烈的抑制作用。 1．EGCG和ECG還原能力的測定 由于EGCG和ECG含有多酚結(jié)構(gòu)，在生物體系中表現(xiàn)出強的抗氧化活性。EGCG和ECG對叔丁基氫過氧化物(t-BHP)誘導(dǎo)產(chǎn)生的脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA具有相近的抑制作用，ECG的抑制作用略大于EGCG，說明EGCG和ECG對Aβ_(25-35)誘導(dǎo)溶血作用的影響與它們的氧化還原能力無關(guān)。 2．EGCG和ECG處理Aβ_(25-35)之后的溶血效應(yīng) 經(jīng)EGCG和ECG處理的紅細胞對Aβ_(25-35)的溶血作用表現(xiàn)出截然相反的結(jié)果。ECG可以促進Aβ_(25-35)對紅細胞的溶血作用，而EGCG則有強烈的抑制作用。將Aβ_(25-35)和EGCG和ECG分別溫浴處理，再與紅細胞作用，其結(jié)果相同。EGCG和ECG對Aβ_(25-35)溶血作用的差異可能與它們二者對Aβ_(25-35)的聚集形態(tài)的影響相關(guān)。 3．Aβ_(25-35)經(jīng)EGCG和ECG處理后的聚集形態(tài) 淀粉樣肽形成以β結(jié)構(gòu)為主的纖維狀聚集體，是其產(chǎn)生細胞毒性的主要環(huán)節(jié)。EGCG和ECG分別與Aβ_(25-35)在37℃溫育120min后，經(jīng)透射電鏡觀察，對照呈纖維狀，EGCG處理后聚集體呈無定形體，ECG處理后呈較小的無定形體，可能是纖維前體或者寡聚體。已有的研究報道證實，蛋白淀粉樣變性過程中的纖維前體或者寡聚體具有強的細胞毒性作用，這與本文的結(jié)果是一致的。
[Abstract]:尾 - amyloid peptide 25 - 35 ( A尾 _ ( 25 - 35 )) is a section of 尾 - amyloid peptide 39 - 43 in Alzheimer ' s disease ( AD ) neurons . The amino acid sequence is GSNKGAIIGLM .






The main methods and conclusions of the experiment are as follows :






One 銆

本文編號：2023893