發(fā)布時(shí)間：2018-02-17 02:27

  本文關(guān)鍵詞： 芳香化酶 激素 避孕 基因 單核苷酸多態(tài)性 表型 單體型 單體域 EMSA 蛻膜化 月經(jīng) 米非司酮 孕酮的藥理撤退 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子　出處：《中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)》2006年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 目前世界上仍沒有一個(gè)臨床上正式推廣使用的男性避孕藥,研制安全、有效、可逆和能廣為接受的男性避孕藥已經(jīng)是當(dāng)務(wù)之急。睪酮作為男性激素避孕藥物進(jìn)行系統(tǒng)研究,迄今已有三十余年,在已經(jīng)完成的多項(xiàng)男性激素避孕的臨床實(shí)驗(yàn)研究中,睪酮(或其衍生物)作為一種甾體藥物應(yīng)用于男性激素避孕,單獨(dú)或配伍使用雌激素(和/或孕激素)類藥物,取得了很好的避孕效果,是一個(gè)非常有前景的男性避孕藥物。 在研究過程中,發(fā)現(xiàn)人體對(duì)這類藥物的反應(yīng)具有多樣性(藥物反應(yīng)存在著群體間和個(gè)體間的差異),可以觀察到這類甾體藥物對(duì)精子的抑制情況(如抑制精子發(fā)生的程度和顯效時(shí)間的快慢等)在不同的人種間和個(gè)體間以及個(gè)體內(nèi)都存在一定的差異,其發(fā)生的機(jī)制尚不清楚。 在臨床實(shí)驗(yàn)中觀察到雌激素對(duì)下丘腦和垂體具有負(fù)反饋調(diào)控作用,睪酮對(duì)下丘腦和垂體的負(fù)反饋?zhàn)饔幂^雌二醇弱得多,外源性睪酮主要通過芳香化酶作用轉(zhuǎn)化為雌激素從而在垂體中發(fā)揮作用。此外,臨床中發(fā)現(xiàn)的芳香化酶功能缺陷患者激素水平的表現(xiàn)也支持這種調(diào)控方式,這些患者共有的基本表型就是體內(nèi)檢測(cè)不到雌激素,但睪酮和促性腺激素的水平高于正常。因此,有理由認(rèn)為睪酮在中樞神經(jīng)系統(tǒng)芳香化酶的催化作用下轉(zhuǎn)化為雌二醇,對(duì)下丘腦和垂體起負(fù)反饋抑制作用導(dǎo)致FSH和LH分泌減少,LH的減少影響Leydig細(xì)胞合成睪酮,并最終引起精原細(xì)胞發(fā)育和精子排放障礙,是男性使用外源性睪酮激素避孕中抑制精子發(fā)生的根本原因。由于睪酮抑制精子發(fā)生的作用是男性生殖內(nèi)分泌調(diào)控的結(jié)果,越來越多的證據(jù)表明雌激素在男性生殖內(nèi)分泌的負(fù)反饋調(diào)控中具有重要作用。因此,芳香化酶,一個(gè)催化雄激素轉(zhuǎn)化為雌激素的關(guān)鍵酶,是本研究的興趣所在。 同一藥物在不同個(gè)體產(chǎn)生的效果不是完全相同的。環(huán)境因素和遺傳因素都有可能產(chǎn)生和影響人體對(duì)藥物反應(yīng)的多樣性,而這種差異首先是具有遺傳差異基礎(chǔ)的,是由于藥物本身在不同個(gè)體體內(nèi)活化、代謝、清除方面的差異所決定的。通過研究遺傳多態(tài)性與個(gè)體對(duì)藥物敏感性或耐受性之間的相關(guān)性,可以闡明遺傳因素對(duì)藥物效用的影響,從而為醫(yī)生針對(duì)性的用藥和藥物的開發(fā)提供指導(dǎo)和依據(jù)。因此認(rèn)識(shí)和闡明甾體藥物反應(yīng)群體和個(gè)體間差異產(chǎn)生和影響的機(jī)制,不僅對(duì)于提高藥物作用的效果及未來個(gè)體化用藥,同時(shí)對(duì)于揭示和完善甾體激素在人類生殖、發(fā)育和代謝中的作用機(jī)理以及男性生殖內(nèi)分泌調(diào)控的具體機(jī)制具有極其重要的意義。 為此本研究目的在于從基因組水平探索芳香化酶基因多態(tài)性和睪酮藥物避孕中藥物反應(yīng)多樣性的相關(guān)性,并進(jìn)一步研究這種相關(guān)性產(chǎn)生的機(jī)制。 方法:利用參加十一酸睪酮酯(TU)避孕有效性的多中心Ⅲ期臨床研究的150名有生育史的正常中國(guó)河北兩個(gè)地區(qū)漢族成年男性志愿者,對(duì)其中一組50名男子利用DHPLC和測(cè)序方法檢測(cè)了CYP19基因的單核苷酸多態(tài)性,包括CYP19基因的9個(gè)編碼外顯子和PI.f及其各自上下游100～200bp范圍序列共約7kb范圍。對(duì)檢測(cè)到的SNP位點(diǎn)進(jìn)行相關(guān)表型的關(guān)聯(lián)分析,并在另一組人群中進(jìn)行了關(guān)聯(lián)關(guān)系驗(yàn)證。對(duì)CYP19基囚檢測(cè)到的多態(tài)性位點(diǎn)使用生物信息學(xué)工具對(duì)其進(jìn)行了單體型界定和單體域分析,并進(jìn)行表型的關(guān)聯(lián)分析。對(duì)于發(fā)現(xiàn)的顯著關(guān)聯(lián)位點(diǎn)和區(qū)域通過核酸蛋白質(zhì)結(jié)合反應(yīng)對(duì)具體機(jī)制做了初步探討。結(jié)果:在中國(guó)河北地區(qū)50名漢族男性中,檢測(cè)出14個(gè)CYP19基因的多態(tài)性位點(diǎn),其中有3個(gè)是首次檢出,并與可檢索到的人群相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行了比較分析,認(rèn)為CYP19多態(tài)性位點(diǎn)在編碼區(qū)出現(xiàn)頻率較少,在非編碼區(qū)則出現(xiàn)的頻率較多,其多態(tài)性在人群中的分布不均一,具有明顯的人群差異性和種族差異性,并具有地區(qū)差異,提示芳香化酶的進(jìn)化與環(huán)境因素相關(guān)。通過關(guān)聯(lián)分析,人群的身高在位于intron 2和exon3的兩個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)的不同基因型間存在顯著性差異(身高在GG和AA基因型間差距達(dá)4～5cm,P＜0.05)。利用檢測(cè)出的SNP位點(diǎn),使用生物信息學(xué)工具,界定了15種單體型,其中4種常見單體型的頻率在人群中占81.8%,并且發(fā)現(xiàn)其中1種單體型與外源性睪酮抑制精子發(fā)生程度密切相關(guān),在有精子組和無精子組中存在顯著差異(P＜0.05)。在進(jìn)一步單體域分析中,發(fā)現(xiàn)位于腦組織特異性啟動(dòng)子區(qū)域內(nèi)的兩個(gè)位點(diǎn)組成的單體型AC與外源性睪酮抑制精子發(fā)生程度密切相關(guān),在有精子組和無精子組中存在顯著性差異(P＜0.05),單體型AC個(gè)體更容易完全抑制精子的發(fā)生;通過蛋白質(zhì)核酸的特異性結(jié)合反應(yīng),發(fā)現(xiàn)其中一個(gè)位點(diǎn)附近區(qū)域序列可以和腦組織細(xì)胞核核蛋白提取物發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)。結(jié)論:芳香化酶基岡的多態(tài)性在人群中存在種族和地域的明顯差異。該基因的兩個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)5845A/G和5998A/G與身高密切相關(guān),分別位于intron2和exon3中。芳香化酶基因腦組織特異性啟動(dòng)子區(qū)域中的兩個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)組成的單體型AC與外源性睪酮抑制精子發(fā)生程度差異有關(guān),認(rèn)為芳香化酶基因多態(tài)性與外源性睪酮抑制精子程度差異有關(guān);并且其中一個(gè)位點(diǎn)附近區(qū)域存在與腦組織細(xì)胞核提取物中的蛋白特異性結(jié)合位點(diǎn),表明該區(qū)域含有與腦組織特異性轉(zhuǎn)錄相關(guān)的順式作用元件。 子宮內(nèi)膜周期性的脫落、出血和再生是靈長(zhǎng)類和其他月經(jīng)動(dòng)物特有的現(xiàn)象。人的子宮內(nèi)膜是一個(gè)動(dòng)態(tài)的組織,在宮內(nèi)優(yōu)勢(shì)的內(nèi)分泌和旁分泌環(huán)境的影響下,在適當(dāng)時(shí)期未能受孕時(shí),子宮內(nèi)膜為準(zhǔn)備下一次胚胎植入而經(jīng)歷一個(gè)極典型的大面積脫落、出血、修復(fù)、增殖和分化的循環(huán),即存在一個(gè)反復(fù)的生理學(xué)損傷和修復(fù)重建過程。月經(jīng)的狀況直接關(guān)系著婦女的生殖健康。月經(jīng)機(jī)制的研究受限于動(dòng)物模型。可檢索文獻(xiàn)中僅有兩個(gè)小鼠月經(jīng)模型的報(bào)告,采用停止孕酮的注射或取出孕酮皮下埋植物模仿了靈長(zhǎng)類分泌期黃體崩解所導(dǎo)致的情況。臨床研究發(fā)現(xiàn)在黃體中晚期服用米非司酮常(Mifepristone,RU486)能促使子宮內(nèi)膜脫落、出血,誘導(dǎo)月經(jīng)提前出現(xiàn)。 因此本研究目的在于利用米非司酮建立小鼠子宮出血模型。方法:成年雌性去勢(shì)NIH小鼠在花生油誘導(dǎo)蛻膜化后,給予米非司酮灌胃,間隔8小時(shí)檢測(cè)形態(tài)學(xué)和血清激素水平至給藥后48小時(shí),并利用陰道細(xì)胞學(xué)檢查監(jiān)測(cè)出血狀況。同時(shí),利用免疫組織化學(xué)和原位雜交方法檢測(cè)了VEGF在出血不同時(shí)程中子宮內(nèi)膜中的表達(dá)。結(jié)果:蛻膜化子宮內(nèi)膜在給藥后16小時(shí)崩解嚴(yán)重,24小時(shí)脫落,伴陰道出血。子宮內(nèi)膜在24小時(shí)出現(xiàn)再生,至48小時(shí)基本恢復(fù)。此過程中血清孕酮濃度保持不變,而雌激素濃度升高。VEGF主要表達(dá)在子宮內(nèi)膜的腺體上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞,在模型中子宮內(nèi)膜出血的初期(8h)、高峰時(shí)期(16h和24h)以及修復(fù)期(32h)表達(dá)量較高。結(jié)論:人工誘導(dǎo)蛻膜化后的小鼠,利用米非司酮模擬孕酮的藥理撤退,能夠成功誘導(dǎo)發(fā)生月經(jīng)樣的改變。VEGF檢測(cè)結(jié)果提示VEGF在子宮發(fā)生出血和修復(fù)中具有重要作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R169.42;R-332

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1517004