發(fā)布時間：2018-02-17 02:27

  本文關(guān)鍵詞： 芳香化酶 激素 避孕 基因 單核苷酸多態(tài)性 表型 單體型 單體域 EMSA 蛻膜化 月經(jīng) 米非司酮 孕酮的藥理撤退 血管內(nèi)皮生長因子　出處：《中國協(xié)和醫(yī)科大學》2006年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】： 目前世界上仍沒有一個臨床上正式推廣使用的男性避孕藥,研制安全、有效、可逆和能廣為接受的男性避孕藥已經(jīng)是當務(wù)之急。睪酮作為男性激素避孕藥物進行系統(tǒng)研究,迄今已有三十余年,在已經(jīng)完成的多項男性激素避孕的臨床實驗研究中,睪酮(或其衍生物)作為一種甾體藥物應(yīng)用于男性激素避孕,單獨或配伍使用雌激素(和/或孕激素)類藥物,取得了很好的避孕效果,是一個非常有前景的男性避孕藥物。 在研究過程中,發(fā)現(xiàn)人體對這類藥物的反應(yīng)具有多樣性(藥物反應(yīng)存在著群體間和個體間的差異),可以觀察到這類甾體藥物對精子的抑制情況(如抑制精子發(fā)生的程度和顯效時間的快慢等)在不同的人種間和個體間以及個體內(nèi)都存在一定的差異,其發(fā)生的機制尚不清楚。 在臨床實驗中觀察到雌激素對下丘腦和垂體具有負反饋調(diào)控作用,睪酮對下丘腦和垂體的負反饋作用較雌二醇弱得多,外源性睪酮主要通過芳香化酶作用轉(zhuǎn)化為雌激素從而在垂體中發(fā)揮作用。此外,臨床中發(fā)現(xiàn)的芳香化酶功能缺陷患者激素水平的表現(xiàn)也支持這種調(diào)控方式,這些患者共有的基本表型就是體內(nèi)檢測不到雌激素,但睪酮和促性腺激素的水平高于正常。因此,有理由認為睪酮在中樞神經(jīng)系統(tǒng)芳香化酶的催化作用下轉(zhuǎn)化為雌二醇,對下丘腦和垂體起負反饋抑制作用導致FSH和LH分泌減少,LH的減少影響Leydig細胞合成睪酮,并最終引起精原細胞發(fā)育和精子排放障礙,是男性使用外源性睪酮激素避孕中抑制精子發(fā)生的根本原因。由于睪酮抑制精子發(fā)生的作用是男性生殖內(nèi)分泌調(diào)控的結(jié)果,越來越多的證據(jù)表明雌激素在男性生殖內(nèi)分泌的負反饋調(diào)控中具有重要作用。因此,芳香化酶,一個催化雄激素轉(zhuǎn)化為雌激素的關(guān)鍵酶,是本研究的興趣所在。 同一藥物在不同個體產(chǎn)生的效果不是完全相同的。環(huán)境因素和遺傳因素都有可能產(chǎn)生和影響人體對藥物反應(yīng)的多樣性,而這種差異首先是具有遺傳差異基礎(chǔ)的,是由于藥物本身在不同個體體內(nèi)活化、代謝、清除方面的差異所決定的。通過研究遺傳多態(tài)性與個體對藥物敏感性或耐受性之間的相關(guān)性,可以闡明遺傳因素對藥物效用的影響,從而為醫(yī)生針對性的用藥和藥物的開發(fā)提供指導和依據(jù)。因此認識和闡明甾體藥物反應(yīng)群體和個體間差異產(chǎn)生和影響的機制,不僅對于提高藥物作用的效果及未來個體化用藥,同時對于揭示和完善甾體激素在人類生殖、發(fā)育和代謝中的作用機理以及男性生殖內(nèi)分泌調(diào)控的具體機制具有極其重要的意義。 為此本研究目的在于從基因組水平探索芳香化酶基因多態(tài)性和睪酮藥物避孕中藥物反應(yīng)多樣性的相關(guān)性,并進一步研究這種相關(guān)性產(chǎn)生的機制。 方法:利用參加十一酸睪酮酯(TU)避孕有效性的多中心Ⅲ期臨床研究的150名有生育史的正常中國河北兩個地區(qū)漢族成年男性志愿者,對其中一組50名男子利用DHPLC和測序方法檢測了CYP19基因的單核苷酸多態(tài)性,包括CYP19基因的9個編碼外顯子和PI.f及其各自上下游100～200bp范圍序列共約7kb范圍。對檢測到的SNP位點進行相關(guān)表型的關(guān)聯(lián)分析,并在另一組人群中進行了關(guān)聯(lián)關(guān)系驗證。對CYP19基囚檢測到的多態(tài)性位點使用生物信息學工具對其進行了單體型界定和單體域分析,并進行表型的關(guān)聯(lián)分析。對于發(fā)現(xiàn)的顯著關(guān)聯(lián)位點和區(qū)域通過核酸蛋白質(zhì)結(jié)合反應(yīng)對具體機制做了初步探討。結(jié)果:在中國河北地區(qū)50名漢族男性中,檢測出14個CYP19基因的多態(tài)性位點,其中有3個是首次檢出,并與可檢索到的人群相關(guān)數(shù)據(jù)進行了比較分析,認為CYP19多態(tài)性位點在編碼區(qū)出現(xiàn)頻率較少,在非編碼區(qū)則出現(xiàn)的頻率較多,其多態(tài)性在人群中的分布不均一,具有明顯的人群差異性和種族差異性,并具有地區(qū)差異,提示芳香化酶的進化與環(huán)境因素相關(guān)。通過關(guān)聯(lián)分析,人群的身高在位于intron 2和exon3的兩個多態(tài)性位點的不同基因型間存在顯著性差異(身高在GG和AA基因型間差距達4～5cm,P＜0.05)。利用檢測出的SNP位點,使用生物信息學工具,界定了15種單體型,其中4種常見單體型的頻率在人群中占81.8%,并且發(fā)現(xiàn)其中1種單體型與外源性睪酮抑制精子發(fā)生程度密切相關(guān),在有精子組和無精子組中存在顯著差異(P＜0.05)。在進一步單體域分析中,發(fā)現(xiàn)位于腦組織特異性啟動子區(qū)域內(nèi)的兩個位點組成的單體型AC與外源性睪酮抑制精子發(fā)生程度密切相關(guān),在有精子組和無精子組中存在顯著性差異(P＜0.05),單體型AC個體更容易完全抑制精子的發(fā)生;通過蛋白質(zhì)核酸的特異性結(jié)合反應(yīng),發(fā)現(xiàn)其中一個位點附近區(qū)域序列可以和腦組織細胞核核蛋白提取物發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)。結(jié)論:芳香化酶基岡的多態(tài)性在人群中存在種族和地域的明顯差異。該基因的兩個多態(tài)性位點5845A/G和5998A/G與身高密切相關(guān),分別位于intron2和exon3中。芳香化酶基因腦組織特異性啟動子區(qū)域中的兩個多態(tài)性位點組成的單體型AC與外源性睪酮抑制精子發(fā)生程度差異有關(guān),認為芳香化酶基因多態(tài)性與外源性睪酮抑制精子程度差異有關(guān);并且其中一個位點附近區(qū)域存在與腦組織細胞核提取物中的蛋白特異性結(jié)合位點,表明該區(qū)域含有與腦組織特異性轉(zhuǎn)錄相關(guān)的順式作用元件。 子宮內(nèi)膜周期性的脫落、出血和再生是靈長類和其他月經(jīng)動物特有的現(xiàn)象。人的子宮內(nèi)膜是一個動態(tài)的組織,在宮內(nèi)優(yōu)勢的內(nèi)分泌和旁分泌環(huán)境的影響下,在適當時期未能受孕時,子宮內(nèi)膜為準備下一次胚胎植入而經(jīng)歷一個極典型的大面積脫落、出血、修復(fù)、增殖和分化的循環(huán),即存在一個反復(fù)的生理學損傷和修復(fù)重建過程。月經(jīng)的狀況直接關(guān)系著婦女的生殖健康。月經(jīng)機制的研究受限于動物模型�？蓹z索文獻中僅有兩個小鼠月經(jīng)模型的報告,采用停止孕酮的注射或取出孕酮皮下埋植物模仿了靈長類分泌期黃體崩解所導致的情況。臨床研究發(fā)現(xiàn)在黃體中晚期服用米非司酮常(Mifepristone,RU486)能促使子宮內(nèi)膜脫落、出血,誘導月經(jīng)提前出現(xiàn)。 因此本研究目的在于利用米非司酮建立小鼠子宮出血模型。方法:成年雌性去勢NIH小鼠在花生油誘導蛻膜化后,給予米非司酮灌胃,間隔8小時檢測形態(tài)學和血清激素水平至給藥后48小時,并利用陰道細胞學檢查監(jiān)測出血狀況。同時,利用免疫組織化學和原位雜交方法檢測了VEGF在出血不同時程中子宮內(nèi)膜中的表達。結(jié)果:蛻膜化子宮內(nèi)膜在給藥后16小時崩解嚴重,24小時脫落,伴陰道出血。子宮內(nèi)膜在24小時出現(xiàn)再生,至48小時基本恢復(fù)。此過程中血清孕酮濃度保持不變,而雌激素濃度升高。VEGF主要表達在子宮內(nèi)膜的腺體上皮細胞和間質(zhì)細胞,在模型中子宮內(nèi)膜出血的初期(8h)、高峰時期(16h和24h)以及修復(fù)期(32h)表達量較高。結(jié)論:人工誘導蛻膜化后的小鼠,利用米非司酮模擬孕酮的藥理撤退,能夠成功誘導發(fā)生月經(jīng)樣的改變。VEGF檢測結(jié)果提示VEGF在子宮發(fā)生出血和修復(fù)中具有重要作用。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2006
【分類號】：R169.42;R-332

【共引文獻】

相關(guān)期刊論文 前7條

1 朱華萍,張遠強,齊宇紅,趙潔,趙勇,馬靜,候武剛;X射線全身照射對成年小鼠睪丸Smad4表達的影響[J];輻射研究與輻射工藝學報;2005年05期

2 胡靜,張遠強,王紅,張金山,許若軍;Smad2和Smad4蛋白在成年大鼠睪丸的表達[J];解剖學報;2001年04期

3 馬靜,張遠強,王宗仁,張金山,李偉,趙勇;腺嘌呤致大鼠雄性不育發(fā)病機理的實驗研究[J];解剖學報;2005年03期

4 侯武剛;張遠強;趙潔;趙勇;;轉(zhuǎn)化生長因子β及其受體在小鼠精子發(fā)生過程中的表達[J];解剖學報;2006年02期

5 楊彤彤,段銀鐘,金巖,畢惠賢;大鼠正畸牙齒移動過程中Smad1的表達和意義[J];牙體牙髓牙周病學雜志;2003年05期

6 ;Stage-specific localization of transforming growth factor β1 and β3 and their receptors during spermatogenesis in men[J];Asian Journal of Andrology;2004年02期

7 陳加祥;王晶磊;徐斯凡;;生殖干細胞增殖中的信號轉(zhuǎn)導[J];中央民族大學學報(自然科學版);2006年03期

相關(guān)博士學位論文 前2條

1 朱華萍;X射線輻射損傷過程中小鼠睪丸Smads的表達及其意義[D];第四軍醫(yī)大學;2006年

2 胡挺松;生殖干細胞與腫瘤干細胞多能性及分裂機制的研究[D];第二軍醫(yī)大學;2009年

相關(guān)碩士學位論文 前8條

1 胡靜;大鼠睪丸Smad1,Smad2,Smad4和Smad5蛋白的表達與發(fā)育變化研究[D];第四軍醫(yī)大學;2001年

2 楊彤彤;大鼠正畸牙齒移動過程中BMP-Smad的信號通路研究[D];中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學;2003年

3 賀曉舟;轉(zhuǎn)化生長因子β及其受體在人及大鼠實驗性隱睪中的表達[D];第四軍醫(yī)大學;2004年

4 曾辛;胰島素樣生長因子-I在精原干細胞中的作用及其機理研究[D];江西醫(yī)學院;2004年

5 王相生;牛飼料轉(zhuǎn)化效率分子遺傳標記的研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2005年

6 余榮嬌;表皮生長因子在精原干細胞中的作用及其機理研究[D];江西醫(yī)學院;2005年

7 陳加祥;原癌基因c-src在大鼠精原干細胞增殖中作用機制的研究[D];南昌大學;2007年

8 寧萑;孕期接觸細菌脂多糖對雄性子代生殖發(fā)育的長期損害[D];安徽醫(yī)科大學;2009年

，

本文編號：1517004