發(fā)布時(shí)間：2018-02-16 15:48

  本文關(guān)鍵詞： 內(nèi)皮祖細(xì)胞 骨髓 鑒定　出處：《蘇州大學(xué)》2007年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】： 目的探索大鼠骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)的分離、培養(yǎng)、誘導(dǎo)分化及鑒定方法，為實(shí)驗(yàn)研究和臨床應(yīng)用搭建平臺(tái)。 方法沖洗大鼠骨髓腔，梯度密度離心法獲得單個(gè)核細(xì)胞，內(nèi)皮系細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)液EGM-2MV培養(yǎng)，通過(guò)觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)、增殖活性、內(nèi)皮細(xì)胞系列標(biāo)志CD34、VEGFR-2、vWF免疫組化，祖細(xì)胞標(biāo)志CD133免疫熒光技術(shù)動(dòng)態(tài)鑒定，激光共聚焦顯微鏡觀察其攝取DIL-AC-LDL，結(jié)合FITC-Lectin-UEA-1實(shí)驗(yàn)，，透射電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)和內(nèi)皮細(xì)胞特征性細(xì)胞器以及染色體核型分析進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)。 結(jié)果新分離的骨髓單個(gè)核細(xì)胞(BMMNCs)呈圓形，大小不一，48h后部分細(xì)胞開(kāi)始貼壁，形態(tài)有梭形、三角形、紡錘形或不規(guī)則形，4～8d出現(xiàn)細(xì)胞集落和細(xì)胞線(xiàn)狀排列，第9～11天接近融合，呈典型鵝卵石樣外觀。細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)呈“S”形，8天和10天的增殖活性強(qiáng)于5天和14天。貼壁細(xì)胞CD34、VEGFR-2、vWF、CD133均表達(dá)陽(yáng)性并呈動(dòng)態(tài)變化，能夠攝取DIL-AC-LDL和結(jié)合FITC-Lectin-UEA-1，透射電鏡可見(jiàn)特征性的Weible-Palade(W-P)小體存在，能穩(wěn)定保持二倍體核型。 結(jié)論本實(shí)驗(yàn)初步建立了一套大鼠骨髓血管內(nèi)皮祖細(xì)胞分離、培養(yǎng)、誘導(dǎo)分化及鑒定方法體系。
[Abstract]:Objective to explore the methods of isolation, culture, differentiation and identification of rat bone marrow endothelial progenitor cells (EPCs), and to establish a platform for experimental research and clinical application. Methods Mononuclear cells were obtained from rat medullary cavity by gradient density centrifugation. EGM-2MV was used as a special culture medium for endothelial cells. The morphology, proliferative activity and endothelial cell marker CD34 VEGFR-2VWF were observed by immunohistochemistry. CD133 immunofluorescence technique was used to dynamically identify progenitor cells. The uptake of DIL-AC-LDLwas observed by confocal laser microscope. The safety of DIL-AC-LDLwas evaluated by FITC-Lectin-UEA-1 assay, ultrastructural observation, characteristic organelles of endothelial cells and chromosome karyotype analysis under transmission electron microscope (TEM). Results the newly isolated bone marrow mononuclear cells (BMMNCs) were round. After 48 hours of different sizes, some of the cells began to adhere to the wall, with fusiform, triangular shape, spindle shape or irregular shape, cell colony and cell line arrangement appeared on the 8th day, and nearly fused on the 911th day. The cell growth curve was 8 and 10 days and the proliferation activity was stronger than that of 5 and 14 days. CD34 + VEGFR-2vWFFtc CD133 was positive and showed dynamic changes. When DIL-AC-LDL and FITC-Lectin-UEA-1 were ingested, the characteristic Weible-Palade W-PEA bodies were observed by transmission electron microscopy, and the diploid karyotype could be maintained stably. Conclusion A set of methods for isolation, culture, induction of differentiation and identification of endothelial progenitor cells from rat bone marrow were established.
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類(lèi)號(hào)】：R329.2

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本文編號(hào)：1515870