發(fā)布時間：2018-02-16 15:48

  本文關(guān)鍵詞： 內(nèi)皮祖細(xì)胞 骨髓 鑒定　出處：《蘇州大學(xué)》2007年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 目的探索大鼠骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)的分離、培養(yǎng)、誘導(dǎo)分化及鑒定方法，為實驗研究和臨床應(yīng)用搭建平臺。 方法沖洗大鼠骨髓腔，梯度密度離心法獲得單個核細(xì)胞，內(nèi)皮系細(xì)胞專用培養(yǎng)液EGM-2MV培養(yǎng)，通過觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)、增殖活性、內(nèi)皮細(xì)胞系列標(biāo)志CD34、VEGFR-2、vWF免疫組化，祖細(xì)胞標(biāo)志CD133免疫熒光技術(shù)動態(tài)鑒定，激光共聚焦顯微鏡觀察其攝取DIL-AC-LDL，結(jié)合FITC-Lectin-UEA-1實驗，，透射電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)和內(nèi)皮細(xì)胞特征性細(xì)胞器以及染色體核型分析進(jìn)行安全性評價。 結(jié)果新分離的骨髓單個核細(xì)胞(BMMNCs)呈圓形，大小不一，48h后部分細(xì)胞開始貼壁，形態(tài)有梭形、三角形、紡錘形或不規(guī)則形，4～8d出現(xiàn)細(xì)胞集落和細(xì)胞線狀排列，第9～11天接近融合，呈典型鵝卵石樣外觀。細(xì)胞生長曲線呈“S”形，8天和10天的增殖活性強于5天和14天。貼壁細(xì)胞CD34、VEGFR-2、vWF、CD133均表達(dá)陽性并呈動態(tài)變化，能夠攝取DIL-AC-LDL和結(jié)合FITC-Lectin-UEA-1，透射電鏡可見特征性的Weible-Palade(W-P)小體存在，能穩(wěn)定保持二倍體核型。 結(jié)論本實驗初步建立了一套大鼠骨髓血管內(nèi)皮祖細(xì)胞分離、培養(yǎng)、誘導(dǎo)分化及鑒定方法體系。
[Abstract]:Objective to explore the methods of isolation, culture, differentiation and identification of rat bone marrow endothelial progenitor cells (EPCs), and to establish a platform for experimental research and clinical application. Methods Mononuclear cells were obtained from rat medullary cavity by gradient density centrifugation. EGM-2MV was used as a special culture medium for endothelial cells. The morphology, proliferative activity and endothelial cell marker CD34 VEGFR-2VWF were observed by immunohistochemistry. CD133 immunofluorescence technique was used to dynamically identify progenitor cells. The uptake of DIL-AC-LDLwas observed by confocal laser microscope. The safety of DIL-AC-LDLwas evaluated by FITC-Lectin-UEA-1 assay, ultrastructural observation, characteristic organelles of endothelial cells and chromosome karyotype analysis under transmission electron microscope (TEM). Results the newly isolated bone marrow mononuclear cells (BMMNCs) were round. After 48 hours of different sizes, some of the cells began to adhere to the wall, with fusiform, triangular shape, spindle shape or irregular shape, cell colony and cell line arrangement appeared on the 8th day, and nearly fused on the 911th day. The cell growth curve was 8 and 10 days and the proliferation activity was stronger than that of 5 and 14 days. CD34 + VEGFR-2vWFFtc CD133 was positive and showed dynamic changes. When DIL-AC-LDL and FITC-Lectin-UEA-1 were ingested, the characteristic Weible-Palade W-PEA bodies were observed by transmission electron microscopy, and the diploid karyotype could be maintained stably. Conclusion A set of methods for isolation, culture, induction of differentiation and identification of endothelial progenitor cells from rat bone marrow were established.
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R329.2

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉雋煒;董念國;;內(nèi)皮祖細(xì)胞研究進(jìn)展[J];心血管病學(xué)進(jìn)展;2011年04期

2 劉慧婷;楊簡;童海;王佐;;氨氯地平對ox-LDL致大鼠骨髓EPCs損傷的保護(hù)作用與上調(diào)一氧化氮合酶表達(dá)有關(guān)[J];中南醫(yī)學(xué)科學(xué)雜志;2011年02期

3 任建立;任華;姚建民;;內(nèi)皮祖細(xì)胞在急慢性肺損傷治療中的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2011年17期

4 金惠銘;胡仁明;;糖尿病時循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞、內(nèi)皮祖細(xì)胞和循環(huán)祖細(xì)胞的變化及其臨床意義[J];中國糖尿病雜志;2007年04期

5 蔣惠新;彭仕友;何小解;;腎毒血清對骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞增生及血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)的影響[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2011年16期

6 劉麗紅;張宏偉;張巖青;石鋼;;內(nèi)皮祖細(xì)胞與腫瘤血管的形成[J];現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生;2011年18期

7 彭艷;程培;徐勇;;糖尿病足內(nèi)皮祖細(xì)胞治療現(xiàn)狀[J];醫(yī)學(xué)綜述;2011年13期

8 李梅;羅容珍;吳秋良;;祖細(xì)胞歸巢與低氧性肺動脈高壓[J];廣東醫(yī)學(xué);2011年09期

9 孫文文;任國慶;汪奕斌;張浩;;血管緊張素Ⅱ?qū)ν庵苎�早期�?nèi)皮祖細(xì)胞血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)的影響[J];中國動脈硬化雜志;2011年08期

10 李美玲;劉鳳姣;劉玲;;小鼠骨髓源性內(nèi)皮祖細(xì)胞的分離培養(yǎng)與鑒定[J];中國動脈硬化雜志;2011年06期

相關(guān)會議論文 前10條

1 李巍;王航;秦浙學(xué);劉潔;黃嵐;;硫化氫對大鼠骨髓源內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量及生理學(xué)特性影響[A];第十三次全國心血管病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

2 徐小勇;廉姜芳;葛世俊;周建慶;;大鼠骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞的中電導(dǎo)鈣離子激活鉀通道與容積敏感性氯離子通道[A];2011年浙江省心電生理與起搏學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2011年

3 李巍;王航;秦浙學(xué);劉潔;黃嵐;;硫化氫對大鼠骨髓源內(nèi)皮祖細(xì)胞數(shù)量及生理學(xué)特性影響[A];中國心臟大會（CHC）2011暨北京國際心血管病論壇論文集[C];2011年

4 周音頻;黃嵐;宋耀明;武曉靜;晉軍;張坡;宋明寶;;粒細(xì)胞集落刺激因子動員骨髓促進(jìn)損傷血管內(nèi)皮修復(fù)[A];中國心臟大會（CHC）2011暨北京國際心血管病論壇論文集[C];2011年

5 陳鵬;朱初麟;程江濤;杜廷海;;中醫(yī)藥對內(nèi)皮祖細(xì)胞的影響[A];第二屆全國中西醫(yī)結(jié)合心血管病中青年論壇暨第二屆黃河心血管病防治論壇資料匯編[C];2011年

6 周音頻;黃嵐;宋耀明;武曉靜;晉軍;張坡;宋明寶;;粒細(xì)胞集落刺激因子動員骨髓促進(jìn)損傷血管內(nèi)皮修復(fù)[A];第十三次全國心血管病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

7 趙剛;宋明寶;于學(xué)軍;朱光旭;于世勇;董紅梅;康華利;黃嵐;;肝細(xì)胞生長因子對低密度脂蛋白損傷內(nèi)皮祖細(xì)胞功能的影響[A];第十三次全國心血管病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

8 趙剛;宋明寶;于學(xué)軍;朱光旭;于世勇;董紅梅;康華利;黃嵐;;肝細(xì)胞生長因子對低密度脂蛋白損傷內(nèi)皮祖細(xì)胞功能的影響[A];中國心臟大會（CHC）2011暨北京國際心血管病論壇論文集[C];2011年

9 岳蘭竹;李麗娟;王s

本文編號：1515870